一种AKR1C1蛋白的应用制造技术

本发明专利技术提供一种AKR1C1蛋白的应用，所述产品包括用RT‑PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或基因芯片诊断肺癌和预测肺癌转移的产品，用于制备诊断肺癌的产品和制备治疗肺癌的药物。过表达AKR1C1蛋白可显著增加肺癌细胞的体内转移，过表达AKR1C1蛋白可显著增加肺癌细胞的体外转移及侵袭能力，通过RNA干扰抑制AKR1C1可显著抑制肺癌细胞的体外转移及侵袭能力。本发明专利技术的AKR1C1蛋白，可作为诊断肺癌、预测肺癌转移及预后的特异标志蛋白，使肺癌诊断更加准确和快速，提高肺癌诊断和预测肺癌转移的准确性，且为防治肺癌提供了新的治疗靶点和有效新药。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程
，涉及一个蛋白的应用，尤其涉及一种AKR1C1蛋白的应用。
技术介绍
肺癌的发病率逐年增高，2012年起已经成为我国患病率和死亡率最高的恶性肿瘤。据美国国家癌症中心统计，79％的肺癌患者就诊时处于已出现转移的Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期病情；肺癌病人的死亡人数占所有癌症病人死亡人数的26.8％，2005-2011年的5年存活率仅为17.4％。这说明肺癌病人的转移情况和预后存活情况密切相关。这些数据说明，肺癌的临床研究，特别是转移相关研究，具有很大的实际意义与临床需求。人AKR1C1蛋白是由AKR1C1基因(GenebankNo.NM001353.5)编码而来，是醛酮还原酶AKR蛋白超家族成员之一。目前该蛋白的功能尚未被完全探明，只清楚AKR1C1蛋白能够利用NADH/NADPH作为辅酶，将醛酮转换为相应的醇类。文献报道，AKR1C1在肿瘤组织中表达异常，比如在肺癌中表达升高。AKR1C1蛋白与肿瘤耐药有一定的关系，但尚无关于AKR1C1蛋白在转移中的研究报道，尤其是在肺癌转移中的研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种AKR1C1蛋白在制备诊断肺癌和预测肺癌转移的产品中的应用。所述的产品包括：用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或基因芯片诊断肺癌和预测肺癌转移的产品。所述AKR1C1蛋白的序列如SEQIDNO.1所示(Aldo-ketoreductasefamily1memberC1醛酮还原酶，geneID1645，由323个aa编码)。所述用RT-PCR诊断肺癌和预测肺癌转移的产品至少包括一对特异性扩增AKR1C1基因的引物：AKR1C1正向引物：5'-agtaaagctttagaggccac-3'；反向引物：5'-cacccatggttcttctcgg-3'，扩增产物为591bp。所述用实时定量PCR诊断肺癌和预测肺癌转移的产品至少包括一对特异性扩增AKR1C1基因的引物：AKR1C1正向引物：5'-gtaaagctttagaggccac-3'；反向引物：5'-gaggtcaacataatccaattg-3'，扩增产物为245bp。所述用免疫检测诊断肺癌和预测肺癌转移的产品包括：与AKR1C1蛋白特异性结合的抗体。所述用原位杂交诊断肺癌和预测肺癌转移的产品包括：与AKR1C1基因的核酸序列杂交的探针。所述用基因芯片诊断肺癌和预测肺癌转移的产品包括：与AKR1C1基因的核酸序列杂交的探针。本专利技术所述的AKR1C1蛋白可作为肺癌诊断的标记物，提高肺癌诊断和预测肺癌转移的准确性。在本专利技术中，可以使用一系列本领域已知的方法来制备针对AKR1C1蛋白特异的抗体。例如，将纯化的人AKR1C1蛋白或它的抗原片段注射入动物体内以产生多克隆抗体。同样，表达人AKR1C1蛋白或它的抗原片段的细胞也可以用来对动物致免疫而产生抗体。根据本专利技术制备的抗体也可以是单克隆抗体，这些单克隆抗体可用杂交瘤技术制备。本专利技术的抗体包括可以阻抑AKR1C1功能的抗体，也可以是不影响人AKR1C1蛋白功能的抗体。每一类抗体都可以通过对人AKR1C1蛋白的片断或功能域致免疫而产生，而人AKR1C1蛋白产物及其片段可以用重组方法产生或用多肽合成仪进行合成。与非修饰形式的AKR1C1蛋白结合的抗体，可以利用在原核细胞例如E.coli中产生的基因产物来免疫动物而得到。与翻译后修饰形式如糖基化或磷酸化AKR1C1蛋白或多肽结合的抗体，可以利用在真核细胞如酵母或昆虫细胞中产生的基因产物来免疫动物而得到。在本专利技术中，所述探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其他衍生物。所述探针的长度没有限制，只要能够完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可以。所述探针的长度可以短至25、20、15或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。本专利技术的第二个目的是提供一种AKR1C1蛋白在制备治疗肺癌的药物中的应用。所述治疗肺癌的药物包括：通过RNA干扰抑制AKR1C1基因表达的双链核糖核酸，或用于抑制AKR1C1蛋白活性的蛋白质，或用于抑制AKR1C1蛋白功能的粗提物或小分子化合物。本专利技术实验证明过表达AKR1C1蛋白可显著增加肺癌细胞的体内转移；过表达AKR1C1蛋白可显著增加肺癌细胞的体外转移及侵袭能力；通过RNA干扰抑制AKR1C1可显著抑制肺癌细胞的体外转移及侵袭能力；AKR1C1蛋白的促转移能力是通过转录调控转移相关基因MMP2/Twist/Sox2。因此，AKR1C1蛋白可作为诊断和预测转移的特异性标志蛋白，使肺癌诊断更加准确、快速。本专利技术AKR1C1蛋白为防治肺癌提供了新的治疗靶标和有效新药。附图说明图1是本专利技术通过过表达AKR1C1蛋白可显著增加肺癌细胞的裸鼠体内肝转移。图2是本专利技术通过过表达AKR1C1蛋白可显著增加肺癌细胞的体外转移及侵袭能力。图3是本专利技术通过RNA干扰抑制AKR1C1可显著抑制肺癌细胞的体外转移及侵袭能力。图4是本专利技术通过RT-PCR技术证明AKR1C1蛋白的促转移能力是通过转录调控转移相关基因MMP2/Twist/Sox2。图5是本专利技术通过qRT-PCR技术说明外源性转染或敲除AKR1C1蛋白后其mRNA的水平发生相应的改变。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1：取雌性4～6周龄裸小鼠用于实验。EDTA消化收取非小细胞肺癌细胞株NCI-H1299稳定高表达AKR1C1的组别和对照组的细胞，培液洗涤两次后，用于裸小鼠尾静脉注射。每只裸鼠注射200万细胞，200μL体积。60天后，颈椎脱臼处死，并解剖，观察脏器转移情况，拍照。如图1所示，高表达AKR1C1的组别，裸鼠体内的肝转移明显高于对照组别。实施例2：在传代培养的肺癌细胞NCI-H1650，NCI-H1299中分别采用质粒转染AKR1C1基因(AKR1C1组)，并设置空白对照(pcmv6组)。待转染24小时后，采用Transwell法，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种AKR1C1蛋白在制备诊断肺癌和预测肺癌转移的产品中的应用，其特征在于，所述的产品包括：用RT‑PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或基因芯片诊断肺癌和预测肺癌转移的产品，所述AKR1C1蛋白的序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种AKR1C1蛋白在制备诊断肺癌和预测肺癌转移的产品中的应用，其特征在于，所述
的产品包括：用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或基因芯片诊断肺癌和预测肺
癌转移的产品，所述AKR1C1蛋白的序列如SEQIDNO.1所示。
2.根据权利要求1所述的一种AKR1C1蛋白在制备诊断肺癌和预测肺癌转移的产品中的应
用，其特征在于，所述用RT-PCR诊断肺癌和预测肺癌转移的产品至少包括一对特异性扩增
AKR1C1基因的引物：AKR1C1正向引物：5'-agtaaagctttagaggccac-3'；反向引物：5'-cac
ccatggttcttctcgg-3'，扩增产物为591bp。
3.根据权利要求1所述的一种AKR1C1蛋白在制备诊断肺癌和预测肺癌转移的产品中的
应用，其特征在于，所述用实时定量PCR诊断肺癌和预测肺癌转移的产品至少包括一对特异
性扩增AKR1C1基因的引物：AKR1C1正向引物：5'-gtaaagctttagaggccac-3'；反向
引物：5'-gaggtcaacataatccaattg-3'，扩增产物为245bp。
4.根据权利要求1所述的一种AKR1C1蛋白在制备诊断肺癌和预测肺癌转移的产品中的
应用，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨波，何俏军，朱虹，应美丹，常琳琳，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33