一种抗生素NVP018中间体的分离纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种抗生素NVP018中间体的分离纯化方法，通过在链霉菌接种至发酵培养基中进行发酵培养24h后,加入底物FS45并分批加入非极性大孔吸附树脂，而后将抗生素NVP018中间体从树脂中解吸出来并浓缩，之后采用硅胶柱层析法进行分离纯化，其中所采用的洗脱液为二氯甲烷-甲醇，并进行梯度洗脱。通过本发明专利技术的分离纯化方法，可分离得到纯度达92%以上的HS457，且其纯度在85%以上的收率可达70%，HS457的总回收率可达93%；同时采用该方法还可将HS496分离纯化，得到纯度最高达95%以上的HS496，其纯度在85%以上的收率可达70%，总回收率可达95%，且通过本发明专利技术的方法还可得到收率为50%的固体粉末状的HS496。

【技术实现步骤摘要】
201610133971

【技术保护点】
一种抗生素NVP018中间体的分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：1)在链霉菌接种至发酵培养基中进行发酵培养24h后，加入底物FS45并分批加入非极性大孔吸附树脂，底物终浓度控制在1.5～2.5mM/L，待发酵结束后，将所述树脂从发酵液中分离；2)采用pH为2.0～3.0的酸性溶液对所述树脂进行冲洗过滤，去除杂质，而后用等质量的乙腈溶液对所述树脂进行多次洗脱，合并洗脱液并进行浓缩得到第一浓缩液；3)调节所述第一浓缩液的pH至5.5～6.5，采用等体积的乙酸乙酯对所述第一浓缩液进行萃取、过滤，合并萃取液，减压浓缩得第二浓缩液；4)硅胶柱层析纯化：41)将所述第二浓缩液经环己烷处理分层，下层料液通过二氯甲烷溶解，得到上柱样品；42)将硅胶通过二氯甲烷浸泡过夜后，匀浆湿法装柱，上样后，采用二氯甲烷‑甲醇梯度洗脱，合并洗脱液并浓缩，HPLC检测跟踪，分别收集NVP018中间体HS457、HS496的粗品；其中，所述的FS45结构式为：所述的NVP018的结构式为：所述HS457的结构式为：所述HS496的结构式为：

【技术特征摘要】
1.一种抗生素NVP018中间体的分离纯化方法，其特征在于，包括如下步
骤：
1)在链霉菌接种至发酵培养基中进行发酵培养24h后，加入底物FS45并
分批加入非极性大孔吸附树脂，底物终浓度控制在1.5～2.5mM/L，待发酵结束后，
将所述树脂从发酵液中分离；
2)采用pH为2.0～3.0的酸性溶液对所述树脂进行冲洗过滤，去除杂质，
而后用等质量的乙腈溶液对所述树脂进行多次洗脱，合并洗脱液并进行浓缩得
到第一浓缩液；
3)调节所述第一浓缩液的pH至5.5～6.5，采用等体积的乙酸乙酯对所述第
一浓缩液进行萃取、过滤，合并萃取液，减压浓缩得第二浓缩液；
4)硅胶柱层析纯化：
41)将所述第二浓缩液经环己烷处理分层，下层料液通过二氯甲烷溶解，
得到上柱样品；
42)将硅胶通过二氯甲烷浸泡过夜后，匀浆湿法装柱，上样后，采用二氯
甲烷-甲醇梯度洗脱，合并洗脱液并浓缩，HPLC检测跟踪，分别收集NVP018中
间体HS457、HS496的粗品；
其中，所述的FS45结构式为：
所述的NVP018的结构式为：
所述HS457的结构式为：
所述HS496的结构式为：
2.根据权利要求1所述的抗生素NVP018中间体的分离纯化方法，其特征
在于，所采用的链霉菌菌种为购自IsomeraseTherapeuticsLtd公司生产的
Streptomycessp.BIOT-4746菌种。
3.根据权利要求2所述的抗生素NVP018中间体的分离纯化方法，其特征
在于，步骤1)的具体实施过程如下：
11)、一级种子培养
将保存在甘油管内的菌种接入灭好菌的摇瓶培养基中，置于摇床，
220r/min，27℃培养36～48h，当pH达到5.2～5.4，PMV≥18％时，得到一级种子
液；
其中，摇瓶培养基为：甘油40g/L、大豆蛋白胨(A3)10g/L、麦芽提取物
21g/L，pH控制在7.0；
12)、二级种子培养
将400～800ml的一级种子液接入灭好菌的1000L二级种子培养基中培养，
培养温度24～27℃，溶氧量＞30％，培养36～55h，当pH达到5.2～5.4，PMV≥20％
时，得...

【专利技术属性】
技术研发人员：王欣彤，胡志浩，蔡昌银，刘斌，
申请(专利权)人：苏州华赛生物工程技术有限公司，苏州汉酶生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32