细叶石斛的组培快繁方法技术

本发明专利技术属于植物组织培养领域，具体涉及一种细叶石斛的组培快繁方法。针对自然条件下细叶石斛自然萌发率低、现有技术中缺乏系统全面快速的繁育方法等问题，本发明专利技术提供一种细叶石斛的组培快繁方法，通过将细叶石斛的蒴果消毒后，以其种子为外植体，经过诱导、增殖分化及生根阶段，得到大量的细叶石斛组培苗。本发明专利技术技术方案建立组培快繁技术体系，实现了细叶石斛的大量人工繁育，为该植物以后的工厂化生产打下基础，并对于保护其野生资源，扩大其种植面积，以实现其种质资源的可持续利用，具有重要的现实意义和经济效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物组织培养
，具体涉及一种细叶石斛的组培快繁方法。
技术介绍
细叶石斛DendrobiumhancockiiRolfe为兰科石斛属的多年生草本植物，在我国主要分布于陕西秦岭以南、四川、甘肃、河南及广西等地，附生在密林中树干上或山谷岩石上。该种是我国传统的名贵中药材，全草药用，其茎干可加工成枫斗，是石斛类药材来源之一，具有生津养胃、止咳润肺等功效，用于治疗病后虚热、口干燥咳、食欲不振等病症，在中药材市场上深受欢迎。近年来，由于石斛价格昂贵，供不应求，药民无节制地采挖细叶石斛野生资源，致使其采集量大于生长量，造成其野生资源稀缺，已被列于《中国稀有濒危保护植物名录Ⅱ》中。细叶石斛亦是我国名贵的观赏类石斛兰，该植物兼具竹子的秀丽和兰花的幽香。虽为草本植物，但其茎质地较硬，紫红色，小枝披散，植株具备似竹的秀美；盛开金黄色的花朵，花质地厚，具有微香。虽然细叶石斛具有很高的观赏价值，且为阴性湿生植物中耐寒冷和稍耐干旱的种类，较其他石斛类植物更易管理和栽培，但目前在我国细叶石斛的观赏价值并未得到开发利用，花卉市场中难觅其的踪迹。石斛属植物对自然生态环境要求苛刻，其种子细如微尘，在自然条件下萌发率极低。目前我国关于细叶石斛方面的研究甚少，且无系统全面的关于其快速繁殖方面的研究。
技术实现思路
针对现有技术中缺乏系统、快速的细叶石斛快速培育方法，本专利技术的专利技术目的在于提供一种细叶石斛的组培快繁方法。该方法通过以细叶石斛种子为外植体进行组培，建立快繁技术体系，实现了细叶石斛的大量人工繁育，为该植物以后的工厂化生产打下基础，并对于保护其野生资源，扩大其种植面积，以实现其种质资源的可持续利用，具有重要的现实意义和经济效益。本专利技术要解决的技术问题是提供一种细叶石斛的组培快繁方法，包括以下步骤：a、外植体处理采摘细叶石斛蒴果作为外植体材料，进行消毒处理；b、诱导培养剪开消毒后蒴果，将种子分散于诱导培养基上培养至长出原球茎；c、增殖分化培养将步骤b中原球茎接种到增殖分化培养基上进行增殖分化培养至具2～4个叶片、高3～4cm的无根苗；d、生根培养将步骤c中无根苗移植到生根培养基上培养为高7～8cm、有5～10条根的幼苗；e、炼苗培养将步骤d中幼苗进行炼苗，炼苗后移栽大棚培养。其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤a中所述消毒处理为：用73～75wt％的酒精浸泡15～30s后，再用0.09～0.1wt％氯化汞溶液或0.9～1wt％次氯酸钠溶液浸泡10～20min，无菌水冲洗，再用无菌滤纸吸干。优选的，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤a中所述消毒处理在酒精浸泡前，先用0.2～0.3wt％的洗衣粉水浸泡15～30min，用水冲洗10～30min；更优选的，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤a中所述消毒处理在酒精浸泡后，先用无菌水冲洗干净，再用0.09～0.1wt％氯化汞溶液或0.9～1wt％次氯酸钠溶液浸泡。其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤b中所述诱导培养基组成为：VW基础培养基+蔗糖19～21g/l+琼脂5.3～5.5g/l+香蕉100～150g/l，PH为5.4～5.6。其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤b中所述培养温度为22±2℃，光照强度为1500～2000Lux，光照时间为11～13h/d，培养时间45～55天。其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤c中所述增殖分化培养基组成为：VW基础培养基+萘乙酸0.05～0.15mg/l+蔗糖19～21g/l+琼脂5.3～5.5g/l+香蕉100～150g/l，PH为5.4～5.6。其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤c中所述培养温度为22±2℃，光照强度为1500～2000Lux，光照时间为11～13h/d，培养时间为45～60天。其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤c中所述接种时每瓶接种2～4个团，每团约20～30个原球茎。其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤d中所述生根培养基组成为：1/2VW基础培养基+吲哚丁酸0.1～0.3mg/l+蔗糖19～21g/l+琼脂5.3～5.5g/l+香蕉100～150g/l+土豆90～110g/l+活性炭2～2.5g/l，PH5.4～5.6。其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤d中所述生根培养温度为22±2℃，光照强度为1500～2000Lux，光照时间11～13h/d，培养时间35～45天。其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤e中所述炼苗是于培养室中炼苗5～7天、自然光下炼苗2～4天。其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤e中所述移栽大棚培养时，培养基质为7～10cm厚的松树皮上层覆盖一层1～2cm厚的水苔，基质湿度60～70％；移栽前10～15天内每1～2天洒一次水，之后每2～3天洒一次水，移栽培养时间为30～35天；待组培苗成活后，转移到大棚常规管理。其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤c、d、e中的高不包含根的长度。本专利技术技术方案为细叶石斛的育苗开辟了新的途径，采用本专利技术的组培快繁技术，能将细叶石斛种子染菌率控制在10％以内，染菌弱苗少，培育的细叶石斛幼苗质量好；同时，本专利技术技术方案能有效促进细叶石斛种子的萌发，诱导的种子萌发率几近100％；还能促进萌发的幼苗快速增殖、分化和生根，增殖系数10～25，分化率和生根率均在95％左右；此外，采用本专利技术技术方案，由于染菌少，幼苗质量好，移栽成活率高，基本达到95％以上。本专利技术技术方案能快速得到优良的细叶石斛幼苗，对推动细叶石斛的产业发展具有重大的意义。具体实施方式本专利技术提供一种细叶石斛的组培快繁方法，具体操作过程如下：a、采摘细叶石斛未开裂的蒴果，用0.2～0.3wt％的洗衣粉水浸泡15～30min后，于自来水冲洗10～30min后放入超净工作台上备用；在无菌条件下，用73～75wt％的酒精处理15～30s、无菌水冲洗4～6次；0.09～0.1wt％氯化汞溶液或0.9～1.0wt％次氯酸钠溶液灭菌10～20min，无菌水冲洗4～6次，再用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分；b、用灭菌剪刀剪开无菌蒴果一端，轻轻晃动蒴果，把种子接入诱导培养基上；诱导培养基以VW为基础培养基，每L中添加19～21g蔗糖，5.3～5.5g琼脂，100～150g香蕉，PH在5.4～5.6之间，培养温度为22±2℃，光照时间为11～13h/d，光照强度为1500～2000Lux之间，培养45～55天至本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细叶石斛的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：a、外植体处理采摘细叶石斛蒴果作为外植体材料，进行消毒处理；b、诱导培养剪开消毒后蒴果，将种子分散于诱导培养基上培养至长出原球茎；c、增殖分化培养将步骤b中原球茎接种到增殖分化培养基上进行增殖分化培养至具2～4个叶片、高3～4cm的无根苗；d、生根培养将步骤c中无根苗移植到生根培养基上培养为高7～8cm、有5～10条根的幼苗；e、炼苗培养将步骤d中幼苗进行炼苗，炼苗后移栽大棚培养。

【技术特征摘要】
1.一种细叶石斛的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、外植体处理
采摘细叶石斛蒴果作为外植体材料，进行消毒处理；
b、诱导培养
剪开消毒后蒴果，将种子分散于诱导培养基上培养至长出原球茎；
c、增殖分化培养
将步骤b中原球茎接种到增殖分化培养基上进行增殖分化培养至具2～4个叶片、高3～
4cm的无根苗；
d、生根培养
将步骤c中无根苗移植到生根培养基上培养为高7～8cm、有5～10条根的幼苗；
e、炼苗培养
将步骤d中幼苗进行炼苗，炼苗后移栽大棚培养。
2.根据权利要求1所述的细叶石斛的组培快繁方法，其特征在于：步骤a中所述消毒处
理为：用73～75wt％的酒精浸泡15～30s后，再用0.09～0.1wt％氯化汞溶液或0.9～1wt％次
氯酸钠溶液浸泡10～20min，无菌水冲洗。
3.根据权利要求1所述的细叶石斛的组培快繁方法，其特征在于：步骤b中所述诱导培
养基组成为：VW基础培养基+蔗糖19～21g/l+琼脂5.3～5.5g/l+香蕉100～150g/l，PH为5.4～
5.6。
4.根据权利要求1所述的细叶石斛的组培快繁方法，其特征在于：步骤b中所述培养温
度为22±2℃，光照强度为1500～2000Lux，光照时间为11～13h/d，培养时间45～55天。
5.根据权利要求1所述的细叶石斛的组培快繁方法，其特征在于：步骤c中所述增殖分
化培养基组成为：VW基础培养基+萘乙酸0.05...

【专利技术属性】
技术研发人员：谷海燕，熊铁一，谢孔平，鲁松，李策宏，彭启新，余道平，
申请(专利权)人：四川省自然资源科学研究院，
类型：发明
国别省市：四川;51