本发明专利技术涉及一种活跃链霉菌Streptomyces actuosus LB-16。本发明专利技术还涉及一种产生活跃链霉菌Streptomyces actuosus LB-16的方法，采用紫外和亚硝基胍对活跃链霉菌CN10联合诱变，筛选得到活跃链霉菌LB-16。本发明专利技术还涉及一种利用活跃链霉菌Streptomyces actuosus LB-16制备那西肽的方法，采取变温培养，通气流量采取分阶段控制，采用有机溶剂法、树脂分离、乙醇和水混合沉淀提取分离得到那西肽粗品，并采用离子交换层析法分离纯化得到那西肽精品。本发明专利技术具有生产成本低、产品提取率高和产品生物价效高的特点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种活跃链霉菌。更具体地说，本专利技术涉及一种活跃链霉菌LB-16及利用其制备那西肽的方法。
技术介绍
那西肽(Nosiheptide)又称诺西肽，是一种含有多个噻唑环并富含硫多肽类抗生素，与硫链丝菌肽(Thiostreton)、盐屋霉素(siomyein)、微球菌素(Mierococcins)、硫肽霉素(Tiopeptin)属于同一类化合物。那西肽作为一种新型的饲料添加剂，在国内外已得到了广泛的认可，它不但能促进动物生长，提高饲料效率，而且具有不易产生耐药性，无残留，安全性高，对环境友好等特点，该产品在日本、东南亚和中国台湾等地也在广泛使用。但目前国内企业所需的那西肽主要依赖进口。生产那西肽的方法主要为发酵法，申请号为201310027757.5的专利中给出了一种利用半光胺酸来提高那西肽产量的方法，但是该方法比较简单，也没有给出提取方法，作为工业化大生产有一定的难度。申请号为201210469137.2的专利公布一种利用活跃链酶菌接到斜面培养基中得到种子液，然后发酵培养得到那西肽的方法，该方法虽然操作简单，但是生产得到那西肽的收率低，同样也不适合工业化。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术还有一个目的是提供一种生产力强、菌丝产量高的活跃链霉菌StreptomycesactuosusLB-16；本专利技术又一目的是提供一种产生活跃链霉菌StreptomycesactuosusLB-16的方法，产品生成率和分离纯化效率均较高；本专利技术再一目的是提供一种利用活跃链霉菌StreptomycesactuosusLB-16制备那西肽的方法，提取率和生物效价均较高。为了实现本专利技术的这些目的和其它优点，提供了一种活跃链霉菌StreptomycesactuosusLB-16：其分类命名为活跃链霉菌Streptomycesactuosus，所述活跃链霉菌LB-16被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCCNo.11732，保藏时间为：2015年11月25日，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，本专利技术中称为活跃链霉菌LB-16。一种产生所述的活跃链霉菌LB-16的方法，包括如下步骤：步骤一、将活跃链霉菌单孢子液用紫外灯于距离所述单孢子液35cm处照射20～30s，稀释培养的温度为28℃，相对湿度为40～50％，24h后平皿倒置培养，然后培养6～7天后，选取长势较好的单个菌落，接种于斜面培养基，获得突变的活跃链霉菌CN10；步骤二、将步骤一得到的突变的活跃链霉菌CN10用pH6.0的Tris-Hcl溶液处理，得到第二孢子悬浮液，将亚硝基胍溶于pH6.0的Tris-Hcl溶液，得到亚硝基胍的原液，然后将第二孢子悬浮液和亚硝基胍的原液以体积比为1:1混合，使亚硝基胍的浓度为300～500μg/mL，以控制化学制剂的诱变强度，然后在26～30℃下诱变120～130min，筛选得到活跃链霉菌LB-16。采用了紫外和亚硝基胍联合诱变的方法，获得了生长力强、菌丝产量高的高产菌株，可有效满足生产需要，同时高产菌株的获得从根本上提高了产品的生成率，有利于分离纯化效率的提高。优选的是，所述的产生活跃链霉菌LB-16的方法中，所述步骤一中，将活跃链霉菌单孢子液用紫外灯照射后，稀释培养的温度为28℃，相对湿度为40～50％，24h后平皿倒置培养，然后继续培养6～7天。优选的是，所述的产生活跃链霉菌LB-16的方法中，所述步骤二中，诱变反应终止后，立即用冷的生理盐水稀释混合液100倍，然后再稀释相应梯度涂平板，培养6～7天后，筛选得到活跃链霉菌LB-16。优选的是，所述的产生活跃链霉菌LB-16的方法中，所述斜面培养基包括以重量百分比计的下述成分：可溶性淀粉1.0～2.0％、豆饼粉0.5～1.0％、KNO30.1～0.2％、NaCl0.05～0.01％、MgSO4·7H2O0.05～0.01％和琼脂2.0％-3.0％。一种利用所述的活跃链霉菌LB-16制备那西肽的方法，包括如下步骤：A、在种子培养基上接入所述活跃链霉菌LB-16，于温度为22～28℃，转速为120～150rpm下，振荡培养72～90h，作为一级种子；B、在种子培养基上接入上述一级种子，于温度为22～28℃，转速为120～150rpm下，振荡培养60～80h后，作为二级种子；C、将上述二级种子接入装有发酵培养基的发酵罐中，于温度为22～28℃，转速为150rpm，通气量以体积比为1:0.3～0.6，压力为0.6～1.0KPa下，发酵培养120～150h；D、将步骤C得到的那西肽发酵液加入发酵液体积6～8倍的有机溶剂中，于温度为60～80℃下提取2～4h，得到那西肽粗提液；E、将上述那西肽粗提液用质量浓度为10％的氢氧化钠溶液调节pH为6～8，搅拌2h，将析出的固体离心分离、水洗、干燥后得到那西肽粗品。菌株发酵过程中，考察了菌种的发酵代谢特性和菌种生产能力，通过对种子罐和发酵罐培养工艺的优化，确定了能挖潜菌种生产能力的培养工艺，采取变温培养，通气流量采取分阶段控制，发酵单位不低于21231mg/L。优选的是，所述的利用活跃链霉菌LB-16生产那西肽的方法中，还包括：F、将上述那西肽粗品装填在树脂层析柱中，先用浓度为0.2mol/L的磷酸氢二钠缓冲液平衡所述树脂层析柱，然后用浓度为0.1～0.2mol/L的氢氧化钠溶液梯度洗脱，洗脱液干燥后溶于其3倍体积的乙醇中，加热到80℃完全溶解，然后加入乙醇体积7～10倍的清水，室温下搅拌3h，抽滤出固体，固体用1倍体积的水淋洗，50℃下真空干燥后，得到那西肽精品。采用有机溶剂法、树脂分离、乙醇和水混合沉淀提取分离得到那西肽粗品，并进一步采用离子交换层析法分离纯化得到那西肽精品，整个提取工艺中那西肽的提取率不低于85.1％，生物效价不低于750U/mg。优选的是，所述的利用活跃链霉菌LB-16制备那西肽的方法中，所述步骤C中，在发酵培养时用质量浓度为10％的氨水进行补料，控制发酵罐中的pH为6.0，并通过调整转速控制发酵罐中的溶氧值为60～70％，由于培养过程为耗氧过程，控制发酵罐中的溶氧值有助于菌种的生长。优选的是，所述的利用活跃链霉菌LB-16制备那西肽的方法中，所述步骤D中的有机溶剂为乙醇、异丙醇、氯仿或二氯甲烷中的任一种。优选的是，所述的利用活跃链霉菌LB-16制备那西肽的方法中，所述种子培养基包括以重量百分比计的下述成分：豆饼粉2.0～3.0％、葡萄糖3.0～4.0％、玉米浆2.0～3.0％、MgSO4·7H2O0.05～0.1％、(NH4)2SO4·7H2O0.3～0.5％和轻质碳酸钙0.5％，所述发酵培养基包括以重量百分比计的下述成分：淀粉6.0～7.0％、蛋白胨0.3～0.5％、黄豆粉7.0～8.0％、NaCl0.3～0.4％、(NH4)2SO4·7H本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种活跃链霉菌Streptomyces actuosus LB‑16，其特征在于，所述活跃链霉菌LB‑16被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.11732，保藏时间为：2015年11月25日。
【技术特征摘要】
1.一种活跃链霉菌StreptomycesactuosusLB-16，其特征在于，所述活跃链霉菌LB-16被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCCNo.11732，保藏时间为：2015年11月25日。
2.一种产生如权利要求1所述的活跃链霉菌LB-16的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、将活跃链霉菌单孢子液用紫外灯于距离所述单孢子液35cm处照射20～30s，并稀释培养6～7天后，选取长势较好的单个菌落，接种于斜面培养基，获得突变的活跃链霉菌CN10；
步骤二、将步骤一得到的突变的活跃链霉菌CN10用pH6.0的Tris-Hcl溶液处理，得到第二孢子悬浮液，将亚硝基胍溶于pH6.0的Tris-Hcl溶液，得到亚硝基胍的原液，然后将第二孢子悬浮液和亚硝基胍的原液以体积比为1:1混合，使亚硝基胍的浓度为300～500μg/mL，然后在26～30℃下诱变120～130min，筛选得到活跃链霉菌LB-16。
3.如权利要求2所述的产生活跃链霉菌LB-16的方法，其特征在于，所述步骤一中，将活跃链霉菌单孢子液用紫外灯照射后，稀释培养的温度为28℃，相对湿度为40～50％，24h后平皿倒置培养，然后继续培养6～7天。
4.如权利要求2所述的产生活跃链霉菌LB-16的方法，其特征在于，所述步骤二中，诱变反应终止后，立即用冷的生理盐水稀释混合液100倍，然后再稀释相应梯度涂平板，培养6～7天后，筛选得到活跃链霉菌LB-16。
5.如权利要求2所述的产生活跃链霉菌LB-16的方法，其特征在于，所述斜面培养基包括以重量百分比计的下述成分：可溶性淀粉1.0～2.0％、豆饼粉0.5～1.0％、KNO30.1～0.2％、NaCl0.05～0.01％、MgSO4·7H2O0.05～0.01％和琼脂2.0％-3.0％。
6.一种利用如权利要求1所述的活跃链霉菌LB-16制备那西肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：
A、在种子培养基上接入所述活跃链霉菌LB-16，于温度为22～28℃，转速为120～150rpm下，振荡培养72～90h，作为一级种子；
B、在种子培养基上接入上述一级种子，于温度为2...
【专利技术属性】
技术研发人员：张春颖，
申请(专利权)人：西藏天虹科技股份有限责任公司，
类型：发明
国别省市：西藏;54
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