去泛素化酶USP13在制备预防或者治疗乳腺癌的药物中的用途制造技术

本发明专利技术提供了一种去泛素化酶USP13在制备预防或者治疗乳腺癌的药物中的用途，所述的去泛素化酶USP13的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明专利技术的去泛素化酶USP13通过对BRCA1基因的调控，从而有效的影响乳腺癌的发展，达到治疗和预防乳腺癌的效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，涉及一种治疗乳腺癌的药物，具体来说是一种去泛素化酶USP13在制备预防或者治疗乳腺癌的药物中的用途。
技术介绍
1990年，研究发现了一种直接与遗传性乳腺癌有关的基因BRCA1，它位于人体细胞核的第17号染色体上。如果BRCA1基因的结构发生突变，它所具有的抑制肿瘤发生的功能就会受影响，使人罹患乳腺癌和卵巢癌的风险增加。研究显示，BRCA1基因突变者，患乳腺癌和卵巢癌的风险分别是50%-85%和15%-45%，而在普通人群中，约12.0％的女性可能患乳腺癌，BRCA1基因突变让乳腺癌风险升高的4-7倍。卵巢癌方面，只有1.4％的普通女性有卵巢癌风险，BRCA1基因突变使卵巢癌风险增加10倍以上。BRCA1是一种具有抑制恶性肿瘤发生的基因，在调节人体细胞的复制、遗传物质DNA损伤修复、细胞的正常生长方面有重要作用，DNA损伤应答机制与癌症的发生发展密切相关。BRCA1或BRCA2的突变会显著削弱细胞的损伤应答的修复能力，引起基因组不稳定甚至癌变。泛素—蛋白酶体途径是细胞内重要的蛋白质降解调节系统，在细胞对损伤应答修复能力具有关键的调控作用。泛素通过对底物蛋白的多聚泛素化并经蛋白酶体降解，该途径也是一个被严格调控的可逆过程，泛素化的可逆过程即去泛素化主要通过去泛素化酶进行调节。去泛素化酶通过逆向调控泛素化参与泛素介导的多种生物学过程，包括肿瘤生长、炎症过程、细胞周期调节、免疫反应等众多疾病密切相关的过程。去泛素化酶也参与调控DNA损伤应答信号通路的多个方面。但迄今为止，尚无研究系统地阐述去泛素化酶如何调控BRCA1蛋白功能并影响乳腺癌发生发展。因此，深入剖析去泛素化酶调控DNA损伤应答，并对BRCA1基因进行调控，将有助于理解乳腺癌的发病机制，为乳腺癌治疗药物的开发提供理论基础。
技术实现思路
针对现有技术中的上述技术问题，本专利技术提供了一种去泛素化酶USP13在制备预防或者治疗乳腺癌的药物中的用途，所述的这种用途解决了现有技术中的药物治疗乳腺癌效果不佳的技术问题。本专利技术提供了一种去泛素化酶USP13在制备预防或者治疗乳腺癌的药物中的用途。进一步的，所述的去泛素化酶USP13的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。进一步的，编码所述的去泛素化酶USP13的碱基序列如SEQIDNO:1所示。本专利技术和已有技术相比，其技术进步是显著的。本专利技术的去泛素化酶USP13通过对BRCA1基因的调控，从而有效的影响乳腺癌的发展，达到治疗和预防乳腺癌的效果。附图说明图1A显示经过CRISPR-Cas9系统敲除USP13的U2OS细胞株经过筛选后，已稳定消减USP13。图1B显示敲除USP13对其他DNA损伤关键蛋白形成Foci的能力没有影响。图1C显示通过Western检测证明，敲除USP13的U2OS细胞株已经成功回补USP13野生型，和USP13泛素化突变缺失型。图1D显示在敲除USP13的细胞中回补USP13野生型后，BRCA1形成Foci的能力回复，但回补USP13去泛素化缺失突变型后，BRCA1在DNA损伤处的募集能力没有恢复。图2显示去泛素化酶USP13能被ATM磷酸化，使用ATM抑制剂和磷酸酶后完全抑制了USP13的磷酸化水平。图3显示了在乳腺癌细胞中消减USP13，显著增强肿瘤细胞对PARP抑制剂的敏感性，显著提高PARP抑制剂对乳腺癌的杀伤效果；其中，A为在乳腺癌细胞MDA-231中消减USP13，对PARA抑制剂的敏感性显著提高；B为在乳腺癌细胞MCF7中消减USP13，对PARA抑制剂的敏感性显著提高。图4显示通过Western检测证明，去泛素化酶USP13在乳腺癌组织中高表达。图5显示通过IHC检测证明，去泛素化酶USP13在乳腺癌组织中高表达，并且与预后数据高度相关；其中，A为在乳腺癌组织和正常组织中USP13的免疫组化染色分级情况，Score0-1为阴性，Score2-3为阳性；B为在乳腺癌组织和正常组织中USP13的免疫组化染色情况的数据统计；C为USP13在乳腺癌组织和正常组织中的表达情况与相对应样本的肿瘤分化情况显著相关；D为USP13在乳腺癌组织和正常组织中的表达情况与相对应样本的肿瘤TNM值显著相关。具体实施方式下述的实施例均采用以下的通用的实验方式：1、免疫荧光实验1）在培养板中将已生长好细胞的玻片用PBS浸洗3次；2）用4%的多聚甲醛室温固定10min，PBS浸洗玻片3次；3）0.2%TritonX-100(PBS配制)室温通透10min，PBS浸洗玻片3次；4）吸干PBS，在玻片上滴加10%羊血清，室温封闭30min；5）吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够的一抗，37℃孵育30min，PBS浸洗玻片3次；6）吸干PBS，滴加稀释好的荧光二抗，37℃孵育30min，PBS浸洗3次；7）滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBS浸洗4次，洗去多余的DAPI；8）吸干液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像。、克隆形成实验1）取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在培养液中备用。2）将细胞悬液作稀释，每孔加入1000个细胞，接种在6孔培养板中，终体积为2mL，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃细胞培养箱中培养2～3周。3）经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。每孔加入1mL甲醇固定后，固定15分钟。然后去固定液，加适量GIMSA应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。4）用肉眼直接计数克隆，最后计算克隆形成率。克隆形成率=（克隆数/接种细胞数）×100%5）接种后第二天加入药物，每种药物处理的细胞样本接种3个复孔，独立重复3次实验。3、WesternBlot实验1)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳a)配制分离胶，并将分离胶溶液混合均匀后平缓地注入两层玻璃板中，在液面上小心加入无水乙醇覆盖凝胶，室温静置，待胶完全聚合成线。b)按比例配制浓缩胶。吸去分离胶上面的无水乙醇，将浓缩胶溶液平缓地注入，小心插入梳子避免在齿尖留有气泡，室温静置待胶完全聚合。c)将聚合好的凝胶置于电泳槽中，小心拔出梳子，加入电泳缓冲液。按顺序依次加入分子量Marker和蛋白样品。无样品孔用1*SDS缓冲液填充。d)加样完毕，将电泳装置电源接通，恒压80V待溴酚蓝移出浓缩胶后，恒压150V电本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种去泛素化酶USP13在制备预防或者治疗乳腺癌的药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.一种去泛素化酶USP13在制备预防或者治疗乳腺癌的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的去泛素化酶USP13的氨基酸序列如<...

【专利技术属性】
技术研发人员：李昀辉，袁健，罗坤甜，吴晨明，尹玉娇，李磊，陈玉平，王艺朵，
申请(专利权)人：上海市东方医院，
类型：发明
国别省市：上海;31