一种人患鼠伤寒沙门氏菌肠炎病动物模型制备方法技术

本发明专利技术提供了一种人患鼠伤寒沙门氏菌肠炎病动物模型制备方法，该方法采用病原微生物直接灌胃的方式进行造模，操作方式较为简便；在此基础上，本发明专利技术进一步针对病原微生物浓度、接触量以及接触频次进行了创新性设计，有效提升了疾病模型效果。此外，本发明专利技术发现当接触病菌前控制小鼠的进水、进食状况一方面能够促进鼠伤寒病向胃肠炎分型发展，同时有助于统一动物模型的病理反应。本发明专利技术以严谨的技术构思实现了突出的技术效果，同时成本较低、易于实现，因此具有良好的应用前景，为人患鼠伤寒沙门氏菌肠炎病的临床用药提供了可靠的研究对象。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及传染病防治
，进一步涉及人类传染病动物模型的建立方法，具体涉及一种人患鼠伤寒沙门氏菌肠炎病动物模型制备方法。
技术介绍
鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)属于沙门氏菌B群，是一群非适应性或泛嗜性的沙门氏菌，具有广泛的宿主。鼠伤寒沙门氏菌能引起各种家禽和哺乳动物的传染病，也可引起人类感染，其临床表现可分为四型，即胃肠炎型、败血症型、病灶感染型和无症状带菌型。其中胃肠炎型最常见，约占80％。潜伏期8～24小时，发病较急，主要症状为发热、腹泻、厌食、呕吐、腹痛、腹胀等，大便次数增多，严重者每日可达数十次，大便性状多样易变，为黄绿色或深绿色水样、粘液样或脓血便。新生儿可间歇排出白色胶冻样便，重症腹泻患儿可迅速出现脱水、电解质紊乱和酸中毒，甚至发生休克。大便显微镜检查可见多数白细胞和红细胞。绝大多数病人大便可培养出鼠伤寒沙门氏菌，为确诊鼠伤寒的主要依据。由于该疾病症状复杂，而且与其他传染性肠道疾病存在相似的临床表现，因此诊断较为困难；而且由于患病人群多为小儿，因此治疗手段受到一定的限制，再加之不同患者间症状差异较大，因此相关治疗方法普适性较低，疗效难以保证。在这种情况下，为获得更好的治疗手段，现有技术的研究者尝试建立动物模型作为研究对象。在此环节中，首先，所建立的动物模型应当与人类该疾病的病理特征尽可能相似；此外，造模方法应当具有良好的可重复性；同时，动物模型作为该疾病研究对象的性能指标应当明确，并具有确切的评价方法。然而现有技术的造模方法普遍存在缺陷：在动物与病原微生物的接触过程中难以保证得到胃肠炎分型，同时又缺乏明确的筛选手段，因此所得的病患动物很可能不具有人患鼠伤寒沙门氏菌肠炎病的病理特征、无法作为该疾病的研究对象。
技术实现思路
本专利技术旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种人患鼠伤寒沙门氏菌肠炎病动物模型制备方法，以解决现有技术的造模方法难以保证获得可用动物模型的技术问题。本专利技术要解决的另一技术问题是现有技术的人患鼠伤寒沙门氏菌肠炎病动物模型造模方法可重复性较低。为实现以上技术目的，本专利技术采用以下技术方案：一种人患鼠伤寒沙门氏菌肠炎病动物模型制备方法，包括以下步骤：1)取体重13～16g、3～5周龄的小鼠，以浓度为0.5～1.5×109cfu/mL的鼠伤寒沙门氏菌菌液灌胃处理，每次灌胃280～320uL菌液，每天灌胃2次，持续3天；每次灌胃前小鼠禁食不禁水2小时；2)步骤1)结束后，在所述小鼠中选取：较步骤1)开始前体重下降10％以上、且较步骤1)开始前血清中IL-6含量升高50％以上、且较步骤1)开始前血清中IL-10含量升高100％以上的个体，即为所述人患鼠伤寒沙门氏菌肠炎病动物模型。作为优选，所述小鼠的品种是昆明小鼠。作为优选，步骤2)中所述个体还满足以下条件：其小肠组织中IL-6含量较步骤1)开始前升高200％以上、且其小肠组织中MPO含量较步骤1)开始前下降30％以上。作为优选，步骤2)中所述个体还满足以下条件：其血清中白细胞含量较步骤1)开始前升高100％以上、且其血清中中性粒细胞含量较步骤1)开始前升高100％以上、且其血清中淋巴细胞含量较步骤1)开始前升高50％以上、且其血清中单核细胞含量较步骤1)开始前升高50％以上。作为优选，步骤2)中所述个体还可以满足以下任一条件：精神倦怠；毛色失去光泽；腹泻；体重下降；小肠充气肠壁变薄；肠管内充满黄色稀薄的内容物。在以上技术方案中，采用病原微生物直接灌胃的方式进行造模，操作方式较为简便；在此基础上，本专利技术进一步针对病原微生物浓度、接触量以及接触频次进行了创新性设计，有效提升了疾病模型效果。此外，本专利技术发现当接触病菌前控制小鼠的进水、进食状况一方面能够促进鼠伤寒病向胃肠炎分型发展，同时有助于统一动物模型的病理反应。本专利技术以严谨的技术构思实现了突出的技术效果，同时成本较低、易于实现，因此具有良好的应用前景，为人患鼠伤寒沙门氏菌肠炎病的临床用药提供了可靠的研究对象。附图说明图1是本专利技术实施例1中模型组小鼠与正常组小鼠平均体重变化图；图2是本专利技术实施例1中正常组小鼠小肠组织HE染色图；图3是本专利技术实施例1中模型组小鼠小肠组织HE染色图。具体实施方式以下将对本专利技术的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。因此，用“大约”、“左右”等语言所修正的数值不限于该准确数值本身。在一些实施例中，“大约”表示允许其修正的数值在正负百分之十(10％)的范围内变化，比如，“大约100”表示的可以是90到110之间的任何数值。此外，在“大约第一数值到第二数值”的表述中，大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下，近似性语言可能与测量仪器的精度有关。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂耗材，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值；以下实施例中的％，如无特别说明，均为质量百分含量。实施例1本专利技术模拟人的鼠伤寒病的小鼠细菌性肠炎模型的建立方法，包括以下步骤：1)通过灌胃法给小鼠喂食鼠伤寒沙门氏菌。2)通过检测小鼠的体表特征和临床指标来判断小鼠模型是否成功建立。所述的鼠伤寒沙门氏菌购自中国微生物菌种保藏管理中心菌种编号1.1194。所述的喂食小鼠的鼠伤寒沙门菌浓度控制在109个/ml左右。所述检测小鼠的大体指征是指：精神倦怠、毛色失去光泽、腹泻、体重下降，小肠充气肠壁变薄，肠管内充满黄色稀薄的内容物。所述进行临床指标检测是指：血常规测定、血清中细胞炎症因子含量测定、小肠组织中炎症因子含量测定、小肠组织病理性切片检测。所述的临床指标数据均用SPSS17.0软件进行统计，数据用±s表示，数据先做正态性检验和方差齐性检验，组间比较采用方差分析(正态性)或秩和检验(非正态资料)，以P＜0.05为差异有统计学意义。上述方法的具体操作步骤如下：一、鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠细菌性肠炎模型建立：1、取本实验室冻存的鼠伤寒沙门氏菌(购自中国微生物菌种保藏管理中心菌种编号1.1194)。吸取菌悬液移植于BPY液体培养基试管中，菌液置于恒温培养箱中37℃，220rpm振荡培养过夜。得到鼠伤寒沙门氏菌菌液浓度控制在109个/ml。2、实验动物选用14g左右的4周龄雌性昆明小鼠，军购自天津解放军四所，许可证号SCXK-(军)2009-003，生产合格证号0001906。小鼠在SPF洁净级动物空调房内饲养，实验室适应性饲养两天后用于后续实验。3、把实验室小鼠随机分组，每组10只。模型组通过灌胃法用12号弯灌胃将本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人患鼠伤寒沙门氏菌肠炎病动物模型制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)取体重13～16g、3～5周龄的小鼠，以浓度为0.5～1.5×109cfu/mL的鼠伤寒沙门氏菌菌液灌胃处理，每次灌胃280～320uL菌液，每天灌胃2次，持续3天；每次灌胃前小鼠禁食不禁水2小时；2)步骤1)结束后，在所述小鼠中选取：较步骤1)开始前体重下降10％以上、且较步骤1)开始前血清中IL‑6含量升高50％以上、且较步骤1)开始前血清中IL‑10含量升高100％以上的个体，即为所述人患鼠伤寒沙门氏菌肠炎病动物模型。

【技术特征摘要】
1.一种人患鼠伤寒沙门氏菌肠炎病动物模型制备方法，其特征在于包括以
下步骤：
1)取体重13～16g、3～5周龄的小鼠，以浓度为0.5～1.5×109cfu/mL的鼠伤寒
沙门氏菌菌液灌胃处理，每次灌胃280～320uL菌液，每天灌胃2次，持续3天；
每次灌胃前小鼠禁食不禁水2小时；
2)步骤1)结束后，在所述小鼠中选取：较步骤1)开始前体重下降10％
以上、且较步骤1)开始前血清中IL-6含量升高50％以上、且较步骤1)开始前
血清中IL-10含量升高100％以上的个体，即为所述人患鼠伤寒沙门氏菌肠炎病
动物模型。
2.根据权利要求1所述的人患鼠伤寒沙门氏菌肠炎病动物模型制备方法，
其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊翠，吕茂杰，杨保收，付旭彬，梁武，李守军，
申请(专利权)人：天津瑞普生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12