一种采用Sema3A基因促进脂肪干细胞成骨分化、抑制成脂分化的方法技术

本发明专利技术公开了一种采用Sema3A基因促进脂肪干细胞成骨分化、抑制成脂分化的方法，属于细胞生物学技术领域。本发明专利技术构建了含有Sema3A基因序列的重组质粒，通过将Sema3A重组质粒和辅助包装质粒转染进入293T细胞获得Sema3A慢病毒载体，慢病毒载体在polybrene的协助下将Sema3A基因导入脂肪干细胞，显著地促进了脂肪干细胞的成骨分化，同时也抑制了脂肪干细胞向成脂方向的分化，导入Sema3A基因可以更好地将脂肪干细胞应用于促进骨缺损愈合和种植体骨结合，充分发挥脂肪干细胞来源广泛，易于获取的优点。

【技术实现步骤摘要】
201610231687

【技术保护点】
一种采用Sema3A基因促进脂肪干细胞成骨分化、抑制成脂分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将Sema3A的基因序列克隆到质粒上，获取Sema3A重组质粒；2)将Sema3A重组质粒转化进入细菌，并对Sema3A重组质粒基因进行测序验证；3)将测序验证过的含有Sema3A重组质粒的细菌进行扩增培养，然后提取扩增培养后细菌内含有的Sema3A重组质粒；4)将Sema3A重组质粒和辅助包装质粒共转入293T细胞，获取Sema3A慢病毒表达载体；5)将获取的Sema3A慢病毒表达载体感染脂肪干细胞，促进脂肪干细胞成骨分化、抑制成脂分化。

【技术特征摘要】
1.一种采用Sema3A基因促进脂肪干细胞成骨分化、抑制成脂分化的方
法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将Sema3A的基因序列克隆到质粒上，获取Sema3A重组质粒；
2)将Sema3A重组质粒转化进入细菌，并对Sema3A重组质粒基因进行
测序验证；
3)将测序验证过的含有Sema3A重组质粒的细菌进行扩增培养，然后提
取扩增培养后细菌内含有的Sema3A重组质粒；
4)将Sema3A重组质粒和辅助包装质粒共转入293T细胞，获取Sema3A
慢病毒表达载体；
5)将获取的Sema3A慢病毒表达载体感染脂肪干细胞，促进脂肪干细胞
成骨分化、抑制成脂分化。
2.根据权利要求1所述的采用Sema3A基因促进脂肪干细胞成骨分化、
抑制成脂分化的方法，其特征在于，步骤1)中通过设计Sema3A基因的引物
序列，以PCR的方法获得大量的Sema3A基因序列；其中，Sema3A引物序
列为：
上游引物序列5'TATGAGTGATGTAAGAAGGGTG3'；
下游引物序列5'CTGGTCGTGGATAAGGGA3'。
3.根据权利要求2所述的采用Sema3A基因促进脂肪干细胞分化、抑制
成脂分化的方法，其特征在于，PCR反应体系共计20ul，包括：
2×TaqPCRMasterMix10ul；
浓度0.5uM/L的上下游引物混合物0.5ul；
灭菌双蒸水8.5ul；
合成的cDNA1ul。
4.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋应亮，刘向伟，周宇超，谭乃文，张思佳，许晓茹，任帅，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61