检测磺胺类药物的化学发光酶联免疫试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测磺胺类药物的化学发光酶联免疫试剂盒，其特征在于，试剂盒由磺胺类药物标准品溶液、化学发光板、酶标抗原浓缩液、酶标抗原稀释液、发光底物液、洗涤液、复溶液组成，其中化学发光板的各孔包被有抗磺胺类药物单克隆抗体。本发明专利技术建立的化学发光免疫法具有高通量、灵敏度高、特异性强、检测成本低、准确快速等优点，能够满足现场大规模检测的快速筛选检验的要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食品安全检测领域，具体涉及一种化学发光酶联免疫检测试剂盒，特别是检测猪肉、鸡肉、虾、鱼等样本中磺胺类药物残留量的化学发光酶联免疫检测试剂盒。
技术介绍
磺胺类药物是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学治疗药物，其抗菌谱较广，对大多数革兰阳性菌以及革兰氏阴性菌有抑制作用。磺胺类（SAs）药物在畜牧生产中应用十分广泛，主要在动物疾病防治方面有显著的疗效，可以治疗禽霍乱、禽伤寒、禽副伤寒、禽白痢、鸡传染性鼻炎、火鸡亚利桑那病等，此外对家禽各种球虫病、卡氏白细胞原虫病等，也有较好效果。磺胺类药物虽然应用广泛，但与此同时，这类药物显著的毒副作用也引起了人们的广泛关注。临床研究发现其可影响泌尿系统功能，引起结晶尿，血尿等反应及致癌性。磺胺类药物吸收后分布于全身各组织中，以血、肝、肾含量最高。且与血浆蛋白结合率高，所以在体内维持时间长。还能透入脑膜积液和其他积液，以及通过胎盘进入胎循环，对孕妇及婴儿及其不利，还易在尿中析出结晶，导致结石而损害肾脏。由于磺胺类药物存在严重副作用，人体中长期存在磺胺类药物会导致许多细菌对磺胺类药物产生耐药性，且有潜在的致癌性，我国农业部第235号文件规定其残留限量为100ug/kg。目前，检测磺胺类药物残留，主要采用高效液相色谱法、薄层色谱、免疫色谱法、毛细管电泳法。高效液相色谱法、液相色谱、气相色谱法等仪器方法，精准度高、灵敏度高，但<br>是大型仪器昂贵且需要专业检测技术人员，难以实现大样本现场筛查。酶联免疫方法检测价格低廉，快速，但是灵敏度不够，适用于微量物质的检测和鉴定，在痕量物质方面的检测，难以发挥优势。化学发光免疫分析（Chemiluminescenceanalysis，CLlA）技术将高灵敏的化学发光技术与高特异性的免疫反应结合起来，具有灵敏度高、特异性强、线性范围宽、操作简便、不需要十分昂贵的仪器设备等特点。CLIA不需要外来光源，具有比荧光免疫分析更高的信噪比，比常规的酶联免疫吸附检测方法的抗背景干扰能力强，其灵敏度比ELISA高1至2个数量级，检测范围可达6个数量级，自动化程度高，提高了分析方法的精密度，CLIA已经成为一种先进的痕量或超痕量物质的检测技术。CLIA在兽医学、医学、食品分析等方面，应用前景广阔。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种检测磺胺类药物化学发光酶联免疫试剂盒，采用该试剂盒进行磺胺类药物的检测时不仅具备较高的灵敏度、特异性，而且具有反应速度较快的特点。本专利技术的另一个目的在于提供一种磺胺类药物的检测方法，该方法特异性好、灵敏度高、操作简单的特点。实现上述目的，本专利技术提供一种磺胺类药物检测试剂盒，其包含的主要试剂有：包被有抗磺胺类药物单克隆抗体的聚苯乙烯化学发光板。所述的磺胺类药物标准品溶液6瓶，浓度分别为0ug/L、2ug/L、4ug/L、8ug/L、16ug/L、32ug/L。酶标抗原浓缩液：是由磺胺类药物与牛血清蛋白偶合制成的人工抗原与辣根过氧化物酶偶联制备得到。酶标抗原稀释液：0.01-0.02M磷酸盐缓冲液，pH7.0-8.0,0.5-1%的牛血清蛋白。发光底物液。发光底物液分为A、B液。A液为化学发光底物-鲁米诺和发光增强剂-对甲苯酚溶液，B液为过氧化氢脲溶液。复溶液。复溶液具体为2倍浓缩磷酸盐缓冲液，使用前用双蒸水稀释至工作浓度后使用，用于样品前处理。洗涤液。洗涤溶液具体为含有吐温-20（Tween-20）缓冲液的20倍浓缩磷酸盐缓冲液，使用前用双蒸水稀释至工作浓度后使用，用于实验过程中洗涤化学发光板。本专利技术溶液的配制：本专利技术试剂盒中涉及的酶标磺胺类药物单克隆抗原溶液、化学发光溶液及洗涤溶液及其配方对本专利技术试剂盒检测的灵敏度影响很大；其中各溶液的主要成分及其配制方法如下。1、酶标磺胺类药物单克隆抗原溶液：用磺胺类药物与偶联蛋白偶联制备的人工抗原与辣根过氧化物酶偶联制备得到，将所得酶标磺胺类药物抗原稀释成1:5000的工作浓度。2、酶标抗原稀释液：0.01-0.02M磷酸盐缓冲液，pH7.0-8.0,0.5-1%的牛血清蛋白。3、发光底物液：A液为鲁米诺含量为0.01M、对甲苯酚含量为0.001MpH8.8的三(羟甲基)氨基甲烷溶液，B液为每100mL溶液含柠檬酸2.1g，无水Na2HPO42.82g，0.75%的过氧化氢脲0.64mL的水溶液。4、复溶工作液：pH值为7.5-7.8，含有2-4%酪蛋白，0.1-0.2mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积比。5、洗涤液：pH值为7.2-7.5、含有0.8-1.2%吐温-20,0.3-0.6‰叠氮化钠，0.1-0.2mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为质量体积比。6、包被缓冲液：pH值为9.2-9.6、0.1-0.2mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积比。7、封闭溶液配制：含有5-8%脱脂奶粉，pH值7.2-7.6、0.1-0.2mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为质量体积比。本专利技术化学发光板的包被：本专利技术中包被化学发光板采用将抗磺胺类药物单克隆抗体置于设定的包被溶液中，以设定的浓度，在37℃恒温箱中反应包被。本专利技术采用的是pH9.2-9.6磷酸盐缓冲液。本专利技术中微孔板中所包被的抗磺胺类药物在碱性环境下可以很好的结合在微孔板塑料表面上，可以经受多次洗板，采用的抗体包被浓度可以从10mg/ml-20mg/ml。包被好的微孔板可以用封闭溶液封闭，封闭液中惰性蛋白优选BSA，需加入NaN3防止变质。酶标磺胺类药物抗原溶液的制备：本专利技术中酶标磺胺类药物抗原溶液浓度是决定本专利技术中磺胺类药物化学发光酶联免疫检测试剂盒测定范围及灵敏度的重要因素。本专利技术中涉及的酶标磺胺类药物抗原溶液可以用酶标磺胺类药物稀释液稀释成1:4000的工作浓度。按照上述酶标磺胺类药物抗原溶液浓度制备的试剂盒可以达到很好的线性范围(标准线范围可以达到2-32ug/L)。化学发光溶液的配制：本专利技术采用辣根过氧化酶标记底物发光系统，主要是鲁米诺-过氧化氢系统。所述发光底物液A液为鲁米诺含量为0.01M、对甲苯酚含量为0.001MpH8.8的三(羟甲基)氨基甲烷溶液，B液为100mL溶液含柠檬酸2.1g,无水Na2HPO42.82g，0.75%的过氧化氢脲0.64mL的水溶液，所述百分比为质量百分比。所述鲁米诺为化学发光底物，对甲苯酚为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测磺胺类药物的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括磺胺类药物标准品溶液、化学发光板、酶标抗原浓缩液、酶标抗原稀释液、发光底物液、洗涤液、复溶液，所述化学发光板的各孔包被有抗磺胺类药物的单克隆抗体。

【技术特征摘要】
1.一种检测磺胺类药物的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括磺胺类药物标准品溶
液、化学发光板、酶标抗原浓缩液、酶标抗原稀释液、发光底物液、洗涤液、复溶液，所述化学
发光板的各孔包被有抗磺胺类药物的单克隆抗体。
2.如权利要求1所述的检测磺胺类药物的化学...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢体波，陆苇，刘红，李平，王大敏，党娟，汪善良，牛志存，冯才伟，何方洋，
申请(专利权)人：贵州勤邦食品安全科学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州;52