水果中还原型、脱氢型和总抗坏血酸含量的同时测定方法技术

本发明专利技术公开了一种水果中还原型、脱氢型和总抗坏血酸含量的同时测定方法，包括：将新鲜果品加草酸提取总抗坏血酸，将提取液分成2份；一份加硫酸铜氧化，用2，4‑二硝基苯肼比色法测定总抗坏血酸的含量；另一份加抗氧化剂硫脲，用2，4‑二硝基苯肼比色法测定脱氢型抗坏血酸含量；将试样中还原型抗坏血酸经活性碳氧化为脱氢型抗坏血酸后，再加入2.4‑二硝基苯肼生成红色脎，在500nm处进行比色测定；将得到的总抗坏血酸的含量与得到的氧化前的脱氢型抗坏血酸含量相减得还原型抗坏血酸的含量。采用本发明专利技术测定了苹果、梨等水果中三种不同抗坏血酸含量，其标准曲线稳定，线型范围为1～10μg/mL，相关系数达到0.99以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于维生素检测
，尤其涉及一种水果中还原型、脱氢型和总抗坏血酸含量的同时测定方法。
技术介绍
维生素C又称L-型抗坏血酸，是一种抗氧化剂，由于可以治愈因缺乏维生素C会造成坏血病，所以命名为抗坏血酸，它主要来源新鲜水果和蔬菜，是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素，由于抗坏血酸在常态下不稳定，具有生理功能，还原型和氧化型都有生理活性。测定VC常用的方法有2，6-二氯靛酚靛酚滴定法、2，4-二硝基苯肼比色法、荧光法、电位法和高效液相色谱法等。2，6-二氯靛酚滴定法、电位滴定法和高效液相色谱法测定的都是还原型抗坏血酸。2，4-二硝基苯肼比色法和荧光法是先用氧化剂将还原型抗坏血酸氧化成脱氢型抗坏血酸，最后测定的是总坏血酸。这些方法只是对测定单个还原型抗坏血酸或总抗坏血酸含量，对面对大批样品，需要测样品中还原型抗坏血酸、脱氢型抗坏血酸和总抗坏血酸三种含量时，往往需要几种不同的方法一起使用，实验过程费时，实验结果误差较大。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种水果中还原型、脱氢型和总抗坏血酸含量的同时测定方法，旨在解决测定VC常用的方法只是对测定单个还原型抗坏血酸或总抗坏血酸含量，对面对大批样品，需要测样品中还原型抗坏血酸、脱氢型抗坏血酸和总抗坏血酸三种含量时，往往需要几种不同的方法一起使用，实验过程费时，实验结果误差较大的问题。本专利技术是这样实现的，一种水果中还原型、脱氢型和总抗坏血酸含量的测定方法，该水果中还原型、脱氢型和总抗坏血酸含量的测定方法包括以下步骤：将新鲜果品加草酸提取总抗坏血酸，得提取液，将提取液分成2份；一份加氧化剂硫酸铜氧化，得氧化后的总抗坏血酸混合液，用2，4-二硝基苯肼比色法测定总抗坏血酸的含量；另一份加抗氧化剂硫脲，得氧化前的脱氢型抗坏血酸混合液，用2，4-二硝基苯肼比色法测定氧化前的脱氢型抗坏血酸含量；将试样中还原型抗坏血酸经活性碳氧化为脱氢型抗坏血酸后，再加入2.4-二硝基苯肼作用生成红色脎，用1cm比色杯，以空白溶液调零点，于500nm波长处测定其吸收值；将得到的总抗坏血酸的含量与得到的氧化前的脱氢型抗坏血酸含量相减得还原型抗坏血酸的含量。进一步，所述总抗坏血酸包括还原型抗坏血酸、脱氢型抗坏血酸和二酮古乐糖酸。进一步，所述将试样中还原型抗坏血酸经活性碳氧化为脱氢型抗坏血酸后，再加入2.4-二硝基苯肼作用生成红色脎，根据脎在硫酸溶液中的含量与抗坏血酸含量成正比。采用本专利技术测定了苹果、梨等水果中三种不同抗坏血酸含量，其标准曲线稳定，线型范围为1～10μg/mL，相关系数达到0.99以上。附图说明图1是本专利技术实施例提供的水果中还原型、脱氢型和总抗坏血酸含量的测定方法流程图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。新鲜水果中同时含有还原型和脱氢型两种类型的抗坏血酸，现有的方法一般都是测定还原型抗坏血酸或者总抗坏血酸，忽略了脱氢型抗坏血酸的含量和活性，本专利技术通过一次提取，不同处理，同时测水果中脱氢型和总抗坏血酸的含量，通过差减法计算获得还原型抗坏血酸的含量。下面结合附图及具体实施例对本专利技术的应用原理作详细描述。如图1所示：一种水果中还原型、脱氢型和总抗坏血酸含量的测定方法，该水果中还原型、脱氢型和总抗坏血酸含量的测定方法包括以下步骤：S101：将新鲜果品加草酸提取总抗坏血酸，得提取液，将提取液分成2份；S102：一份加氧化剂硫酸铜氧化，得氧化后的总抗坏血酸混合液，用2，4-二硝基苯肼比色法测定总抗坏血酸的含量；S103：另一份加抗氧化剂硫脲，得氧化前的脱氢型抗坏血酸混合液，用2，4-二硝基苯肼比色法测定氧化前的脱氢型抗坏血酸含量；S104：将试样中还原型抗坏血酸经活性碳氧化为脱氢型抗坏血酸后，再加入2.4-二硝基苯肼作用生成红色脎，在500nm处进行比色测定；S105：将得到的总抗坏血酸的含量与得到的氧化前的脱氢型抗坏血酸含量相减得还原型抗坏血酸的含量。所述总抗坏血酸包括还原型抗坏血酸、脱氢型抗坏血酸和二酮古乐糖酸。所述将试样中还原型抗坏血酸经活性碳氧化为脱氢型抗坏血酸后，再加入2.4-二硝基苯肼作用生成红色脎，根据脎在硫酸溶液中的含量与抗坏血酸含量成正比。下面结合具体实施例对本专利技术的应用原理作进一步描述。方法测定过程及其效果：新鲜苹果样品，洗净切块，准确称取100g放入匀浆机，同时加入100mL草酸溶液匀浆，用纱布过滤后滤液备用。吸取20mL滤液2份放入100mL容量瓶，一份中加入10mL2％的硫酸铜溶液进行氧化处理，充分反应后，用5％的硫脲溶液定容，一份直接加入5％的硫脲溶液定容。吸取上述2种不同处理的溶液各4mL放入20mL的试管，加入1mL2.4-二硝基苯肼(空白不加)，放入37℃的水浴中保温3h。保温3h后取出，除空白管外，将其他试管放入冰水中。空白试管取出后冷却到室温，然后加入1mL1mL2.4-二硝基苯肼，室温下放置15min后移入冰水中。向冰水中的试管加入5mL85％的硫酸，控制加入时间每个试管不少于1min，边加边摇动试管，完成后将试管从冰水中取出，在室温下放置0.5h后，于500nm波长处测定其吸光值。仪器和试剂：紫外分光光度计；电子天平(密勒)；恒温箱；硫酸；草酸；硫脲；硫酸铜；活性碳；2.4-二硝基苯肼。采用本方法测定了苹果、梨等水果中三种不同抗坏血酸含量，其标准曲线稳定，线型范围为1～10μg/mL，相关系数达到0.99以上。序号拟合方程相关系数1248101Y＝0.0391x-0.00710.99690.0290.0740.1460.3190.3752Y＝0.0373x+0.01820.99130.0440.1090.1680.3010.4013Y＝0.0381x+0.00200.99920.0380.0840.1510.3040.3864Y＝0.0335x-0.00240.99220.0320.0630.12本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种水果中还原型、脱氢型和总抗坏血酸含量的同时测定方法，其特征在于，通过一次提取，不同处理，同时测水果中脱氢型和总抗坏血酸的含量，通过差减法计算获得还原型抗坏血酸的含量，包括以下步骤：将新鲜果品加草酸提取总抗坏血酸，得提取液，将提取液分成2份；一份加氧化剂硫酸铜氧化，得氧化后的总抗坏血酸混合液，用2，4‑二硝基苯肼比色法测定总抗坏血酸的含量；另一份加抗氧化剂硫脲，得氧化前的脱氢型抗坏血酸混合液，用2，4‑二硝基苯肼比色法测定氧化前的脱氢型抗坏血酸含量；将草酸提取液试样中还原型抗坏血酸经活性碳氧化为脱氢型抗坏血酸后，再加入2.4‑二硝基苯肼作用生成红色脎，用1cm比色杯，以空白溶液调零点，于500nm波长处测定其吸收值；将得到的总抗坏血酸的含量与得到的氧化前的脱氢型抗坏血酸含量相减得还原型抗坏血酸的含量。

【技术特征摘要】
1.一种水果中还原型、脱氢型和总抗坏血酸含量的同时测定方法，其特征
在于，通过一次提取，不同处理，同时测水果中脱氢型和总抗坏血酸的含量，
通过差减法计算获得还原型抗坏血酸的含量，包括以下步骤：
将新鲜果品加草酸提取总抗坏血酸，得提取液，将提取液分成2份；
一份加氧化剂硫酸铜氧化，得氧化后的总抗坏血酸混合液，用2，4-二硝
基苯肼比色法测定总抗坏血酸的含量；
另一份加抗氧化剂硫脲，得氧化前的脱氢型抗坏血酸混合液，用2，4-二
硝基苯肼比色法测定氧化前的脱氢型抗坏血酸含量；
将草酸提取液试样中还原型抗坏血酸经活性碳氧化为脱氢型抗坏血酸后，
再加入2.4-二硝基苯肼作...

【专利技术属性】
技术研发人员：毋永龙，聂继云，李静，李海飞，徐国锋，李志霞，闫震，匡立学，李明强，沈友明，程杨，关棣锴，
申请(专利权)人：中国农业科学院果树研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21