咖啡酰苯乙醇苷类化合物及其制备方法与其在抗乙型病毒性肝炎药物中的应用技术

本发明专利技术提供结构式I‑V的咖啡酰苯乙醇苷类化合物：1'‑O‑β‑D‑(3,4‑二羟基苯乙基)‑4'‑O‑咖啡酰基‑β‑D‑芹糖‑(1→6')‑葡萄糖苷(I)、1'‑O‑β‑D‑(3,4‑二羟基苯乙基)‑3'‑O‑咖啡酰基‑β‑D‑芹糖‑(1→6')‑葡萄糖苷(II)、desrhamnosylverbascoside(III)、plantainoside A(IV)、式acteoside(V)，以及它们的制备方法；及化合物I‑V和用于治疗乙型病毒性肝炎的药物组合物在制备治疗或预防人类疾病或病症的药物中的应用。经试验结果表明，化合物I‑V在体外对HBsAg和HBeAg的分泌都具有较显著的抑制作用，而且在试验范围内对细胞没有毒害作用。其中化合物III和IV在第9天对HBsAg和HBeAg抑制率都达90.0％以上，且明显强于对照组的比拉米夫定(3TC)。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物
，具体地，涉及咖啡酰苯乙醇苷类化合物及其制备方法与其在抗乙型病毒性肝炎药物中的应用。
技术介绍
目前，乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）感染已经严重威胁着人类的健康。据统计，全球每年约有20多亿人感染HBV。感染HBV后，通常表现为无力、食欲不振、腹胀、腹泻和恶心呕吐，甚至发热和黄疸。但部分患者起病症状并不明显，只有在检查其血清HBV的表面抗原（HBsAg）、e抗原（HBeAg）和脱氧核糖核酸（HBV-DNA）为阳性时才发现肝功能异常，所以很多病例由于治疗不及时而转为慢性，甚至其中一部分患者还转化为肝硬化和肝癌。如今，由于HBV而导致的慢性乙型肝炎（chronichepatitisB,CHB）是一种严重的传染性疾病。有统计显示，全世界因感染HBV而导致约2.4亿人为CHB患者，而每年死于CHB的人数大概有60万。与世界上其他国家相比，我国是HBV感染的高发区，HBV感染率居全球第1位，目前有乙型肝炎病毒感染者达1.2亿以上，每年由于HBV感染而导致肝癌的死亡人数约有12万。因此，由于HBV引发的疾病已经成为全球性的问题，正严重威胁着人类的健康。当前在中国，CHB更是存在最广泛、危害最严重的一种疾病，所以目前我国对HBV感染的防治形势严峻。目前，治疗慢性乙型肝炎有抗病毒法、免疫调节法、抗肝纤维化和改善肝功能等方法。保肝降酶药物曾在干扰素（INF）出现之前，一直是治疗CHB的主要药物。随着干扰素问世后，CHB得到了很好的治疗，但经长期的临床应用发现干扰素也有不少不良反应，诸如白血球和血小板下降、流感样综合症状和儿童长期应用会影响生长发育等。随后随着拉米夫定、阿德福韦和恩替卡韦等核苷类药物的出现，CHB抗病毒治疗进入到了核苷类似物的新时代。这类药物主要是通过药物干预病毒复制过程或者针对宿主抗病毒的不同环节，抵抗和抑制病毒，保护机体，诱导疾病缓解，阻止肝硬化和肝癌细胞出现等。通过抗病毒治疗HBV感染是当前最主要和最有效的方法。核苷类似物相对于其它药物来说价格低、副作用小、服用方便、抑制病毒快，但随着临床应用的日趋普遍，这些药物的效果依然不理想，有长期服用的需要，并有不良反应，如过敏反应，停药反跳及肝功能衰竭，甲沟炎，脂肪代谢紊乱，引起血友病出血等。当然，乙肝疫苗虽然如今也已经广泛使用，在一定程度上也能够预防HBV的感染，但由于延误治疗以及HBV可以通过母婴、性接触、输血和共用针头等等多途径传播，所以HBV仍然严重影响人类的健康。因此，在慢性乙型病毒性肝炎预防和治疗中，寻找和开发出新的高效无毒的治疗药物依然迫切。当前，从天然药物中找寻和开发新药是一个研究热点。国内外大量的新药开发经验也已经证明，从中药、民族药中筛选新药的效率己经达到甚至高于现代生物医学的随机筛选，所以目前对传统中草药化学成分的抗HBV研究也日益重视。我国在这方面也做了不少工作，并已取得了较大进展。据统计，从上世纪九十年代至今，已从近20种中国传统中草药中发现了10多个单体化合物和约10种提取物体外对HBV的HBeAg、HBsAg和DNA有很强的抑制作用，但同时对细胞毒性低。至今，我国也已开发和生产出不少用于治疗肝炎的中成药，但由于中草药及其制剂起效慢或作用不明显，且一般存在着复杂的成分，其作用机制也难以清楚解释，所以至今也尚未有真正临床应用满意的用于治疗CHB的中成药。由于CHB的严重性，而我国中草药资源丰富，而且在中医独特的辨证论治理论指导下有长期的临床实践，部分中草药对CHB确有一定治疗作用。另外，大部分中草药有来源丰富，价格低，副作用小，可长期服用等优点。所以充分利用现代技术，加大力度对中草药进行挖掘，从中寻找新颖的抗HBV先导化合物，进一步结构优化和药理、药效及作用机制研究，开发安全、有效的新型抗HBV药，是目前抗病毒药物研发的有效途径和热点领域之一。旱田草Linderniaruellioides(Colsm.)Pennell为玄参科母草属植物，别名定经草、小号虎舌癀、虎舌蜈蚣草、田素馨、鸭嘴癀、调经草、锯镰草和田边草等；全草可以入药，夏秋季节采集，清洗干净，可鲜用或晒干后使用；该草性味甘、淡、平，主要用于理气活血，消肿止痛；用于痛经、闭经、胃痛、乳腺炎和颈淋巴结结核，外用可治跌打损伤、痈肿疼痛、狂犬咬伤和蛇咬伤等；在广西中南的部分地方，旱田草用于清肝明目，治疗头痛等；目前，尚未见有旱田草的化学成分和药理方面的研究报导。现有技术中也无化合物1-O-苯乙醇基-6-O-咖啡酰基-β-D-葡萄糖吡喃苷(1-O-phenylethanoid-6-O-caffeoyl-β-D-glucopyranose,1)和1-O-苯乙醇基-6-O-咖啡酰基-β-D-葡萄糖吡喃苷(1-O-phenylethanoid-6-O-caffeoyl-β-D-glucopyranose,1)的报道，也无含式（）的化合物1'-O-β-D-(3,4-二羟基苯乙基)-4'-O-咖啡酰基-β-D-芹糖-(1→6')-葡萄糖苷、式（）的化合物1'-O-β-D-(3,4-二羟基苯乙基)-3'-O-咖啡酰基-β-D-芹糖-(1→6')-葡萄糖苷、式（）的化合物desrhamnosylverbascoside、式（）的化合物plantainosideA、式（）的化合物acteoside的药物组合物在制备或治疗乙型病毒性肝炎药物中的应用报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一类新的具有药用价值的式I-的化合物1'-O-β-D-(3,4-二羟基苯乙基)-4'-O-咖啡酰基-β-D-芹糖-(1→6')-葡萄糖苷、式（）的化合物1'-O-β-D-(3,4-二羟基苯乙基)-3'-O-咖啡酰基-β-D-芹糖-(1→6')-葡萄糖苷、式（）的化合物desrhamnosylverbascoside、式（）的化合物plantainosideA、式（）的化合物acteoside的药物组合物。含有治疗乙型病毒性肝炎有效量的化合物I-及药用载体或赋形剂的药物组合物的制备方法，化合物I-及其药物组合物在制备抗乙型病毒性肝炎药物中的应用。为了达到上述目的，本专利技术是这样实现的：咖啡酰苯乙醇苷类化合物的制备方法，具体步骤如下：（1）取旱田草干燥全草，粉碎，用乙醇进行提取，然后过滤后回收溶剂，取提取液再浓缩；（2）将步骤（1）浓缩后的提取液，用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取物；（3）取乙酸乙酯萃取物采用硅胶柱色谱进行分离，用体积比为9-4:1的氯仿-甲醇梯度进行洗脱；（4）将上述用氯仿-甲醇梯度进行洗脱得到的组分本文档来自技高网...

【技术保护点】
咖啡酰苯乙醇苷类化合物的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）取旱田草干燥全草，粉碎，用乙醇进行提取，然后过滤后回收溶剂，取提取液再浓缩；（2）将步骤（1）浓缩后的提取液，用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取物；（3）取乙酸乙酯萃取物采用硅胶柱色谱进行分离，用体积比为9‑4:1的氯仿‑甲醇梯度进行洗脱；（4）将上述用氯仿‑甲醇梯度进行洗脱得到的组分用MCI柱层析，然后用质量浓度为30‑60%的甲醇水溶液进行脱色，将脱色后的组分用制备型反相硅胶色谱柱进行分离，再依次用质量浓度为10%、20%、30%、50%和100%的甲醇溶液进行洗脱，然后用RP‑HPLC半制备色谱进行分析与分离，得到化合物I 、化合物、化合物、化合物和和化合物；所述化合物I‑的结构式分别为：、、、、。

【技术特征摘要】
1.咖啡酰苯乙醇苷类化合物的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
（1）取旱田草干燥全草，粉碎，用乙醇进行提取，然后过滤后回收溶剂，取提取液再浓
缩；
（2）将步骤（1）浓缩后的提取液，用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取物；
（3）取乙酸乙酯萃取物采用硅胶柱色谱进行分离，用体积比为9-4:1的氯仿-甲醇梯度
进行洗脱；
（4）将上述用氯仿-甲醇梯度进行洗脱得到的组分用MCI柱层析，然后用质量浓度为30-
60%的甲醇水溶液进行脱色，将脱色后的组分用制备型反相硅胶色谱柱进行分离，再依次用
质量浓度为10%、20%、30%、50%和100%的甲醇溶液进行洗脱，然后用RP-HPLC半制备色谱进行
分析与分离，得到化合物I、化合物、化合物、化合物和和化合物；所述化合物I-的结构式分别为：
、
、
、
、
。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述乙醇的质量浓度为40%-85%。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述乙醇提取的次数为3-5次，每次提
取的时间为0.5-2小时。
4.权利要求1所制备的...

【专利技术属性】
技术研发人员：周先丽，陈旭，梁成钦，韦京辰，徐庆，
申请(专利权)人：桂林医学院，
类型：发明
国别省市：广西;45