本发明专利技术公开一种乌桕成熟胚乳离体直接再生植株的方法，包括如下步骤：(1)取乌桕成熟种子剪去种壳，经表面消毒后接种于添加生长调节剂的启培养基中，光照，进行胚乳启动培养；(2)把胚乳从乌桕种子上剥离，接种于不定芽诱导培养基中，光照，进行不定芽的诱导，获得嫩绿不定芽丛；(3)将不定芽丛切块，转接于增殖和伸长培养基中进行不定芽的增殖和伸长；(4)转入生根培养基进行生根，获得健壮的乌桕再生植株。本发明专利技术具有再生过程简单，不经过愈伤组织的诱导阶段，可以在胚乳周边表皮直接诱导出不定芽丛的优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，属于生物
技术介绍
乌桕(Sapiumsebiferum)为大戟科乌桕属多年生木本植物，广泛分布于我国热带和亚热带地区，为我国特有经济树种。乌桕树冠整齐，叶形秀丽，秋叶鲜红、紫色或鲜黄色，集观形、叶、果于一体，具有非常高的观赏价值，可作庭院绿化及行道树。此外，乌桕适应性较强，对土质要求不高，耐旱、涝、贫瘠、适宜边际土地种植，且种植模式多样，易于实现大面积规模化生产。因此，乌桕无论是作为观赏树种，还是荒山滩涂绿化树种均已引起广泛关注。但乌桕作为景观或滩涂绿化树种，普遍存在枝条稀疏，树型中空的问题，在一定程度上限制了乌桕的应用。三倍体育种培育是植物种质创新的重要途径，在其遗传学和育种学领域具有重要的意义。三倍体植物通常具有生长迅速、生长旺盛、抗逆性强、无籽等优良性状。相对于传统的借助杂交技术创制三倍体而言，通过胚乳离体再生三倍体具有周期短、效率高等优点；同时，由于胚乳细胞的染色体2/3来自母本，1/3来自父本，作为研究性状遗传规律的材料，也颇具价值;此外，胚乳细胞在形成三倍体植株的同时，可以产生大量不同倍性的混合体和非整倍体，可为育种提供丰富的不同倍性材料。因此，通过胚乳培养获得营养生长旺盛的乌桕多倍体植株，可以克服乌桕在景观和绿化应用上的不足。目前，关于利用乌桕胚乳为外植体，对乌桕进行离体再生的研究也有报道，但主要集中在通过愈伤组织的诱导和分化来进行植株再生研究，存在再生效率低，再生过程繁琐等问题，很难满足乌桕多倍体育种的需求。因此，针对当前乌桕胚乳倍性育种所存在的问题，急需开发，以满足乌桕倍性育种的需求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供。为实现乌桕的倍性育种和后期的遗传改良研究奠定基础。本专利技术是通过如下技术方案实现的:，包括如下步骤:(I)取乌桕成熟种子剪去种壳，经表面消毒后接种于添加生长调节剂的启培养基中，光照，进行胚乳启动培养；(2)把胚乳从乌桕种子上剥离，接种于不定芽诱导培养基中，光照，进行不定芽的诱导，获得嫩绿不定芽丛；(3)将不定芽丛切块，转接于增殖和伸长培养基中进行不定芽的增殖和伸长；(4)转入生根培养基进行生根，获得健壮的乌桕试管苗，驯化后进行移栽。优选地:所述步骤(I)的光照时间为6?9d;所述步骤(2)的光照时间为2?3周；所述步骤(4)中，培养3?4周后获得乌桕试管苗。优选地:所述步骤(4)中，待芽长至2?3cm并伴有2?3个叶片时，再转入生根培养基进彳丁生根。优选地:所述步骤(I)的表面消毒是指在无菌操作台中，用75%的无水乙醇消毒30?45 s，之后用20%的次氯酸钠溶液消毒8?12min，无菌水冲洗3?5遍，之后再经600W超声处理7?lOmin，种子表面消毒期间不停地摇动。优选地:所述步骤(I)的乌桕启动培养基为包括有2.0?8.0mg/L6_BA、0.2?1.0mg/L TDZ、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂的MS培养基。优选地:所述乌桕胚乳来源于经过预培养6?9d，处于萌动状态的乌桕种子。优选地:所述步骤(2)的不定芽诱导培养基为包括有3.0?6.0mg/L6_BA、0.05?0.5mg/L TDZ、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂的MS培养基。优选地:所述步骤(3)的切块是指将胚乳丛生芽增殖前切成(0.2?0.4)X (0.3?0.5)cm2大小的切块。优选地:所述步骤(3)的增殖和伸长培养基为包括有1.0?2.0mg/L 6_BA、0.05?0.lmg/L TDZ、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂的MS培养基。本专利技术相比现有技术具有以下有益效果:(I)再生过程简单，不经过愈伤组织的诱导阶段，可以在胚乳周边表皮直接诱导出不定芽丛；(2)进一步，本专利技术中采用次氯酸钠与超声结合的方法对乌桕种子进行消毒，具有消毒时间短，消毒效果好，污染率为0%;同时，可以促进种子的萌动和后期胚乳的再生等优势；(3)进一步，不定芽再生速度快，胚乳经过6?9d的启动培养和2?3周的诱导培养，即可再生出大量的不定芽(每个胚乳20?40个)；(4)再生频率高，胚乳不定芽的诱导率高达100%。因此，本专利技术所提供的，不仅为乌桕倍性育种和遗传改良提供了技术支撑，而且对于开展乌桕性状遗传规律等基础研究具有重要意义。【附图说明】图1启动培养后剥离的乌桕成熟胚乳图2胚乳丛生芽诱导图3接种于增殖培养基上的胚乳丛生芽切块图4丛生芽的增殖和伸长图5丛生芽的生根图6乌桕无菌苗的移栽【具体实施方式】下面对本专利技术的实施例作详细说明，本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。实施例1—种乌桕成熟胚乳离体直接再生植株的方法，具体如下:(I)取乌桕成熟种子剪去种壳，于无菌操作台内进行表面消毒；表面消毒是指用75%的无水乙醇消毒30s，之后用20%的次氯酸钠溶液消毒8min，无菌水冲洗3遍，之后再经600W超声处理7min，种子表面消毒期间不停地摇动。(2)将步骤(I)中消毒后的种子接种于添加有2.0mg/L 6_BA、0.2mg/L TDZ、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂的MS培养基中进行胚乳启动培养。(3)光照培养6?9d后，把胚乳从处于萌动状态乌桕种子上剥离，接种于添加有3.0mg/L 6-BA、0.05mg/L TDZ、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂的MS培养基种进行不定芽诱导。(4)光照培养2?3周后，获得嫩绿不定芽丛;将不定芽丛切成0.2 X0.3cm2大小的切块，接种于添加有1.0mg/L 6-BA、0.05mg/L TDZ、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂的MS培养基中进行不定芽的增殖和伸长。(5)待芽长至2?3cm并伴有2?3个叶片时，转入添加有0.3mg/L IBA的1/4MS固体生根培养基中进行生根，3?4周后获得根系健壮的乌桕试管苗，驯化后进行移栽。实施例2—种乌桕成熟胚乳离体直接再生植株的方法，具体如下:(I)取乌桕成熟种子剪去种壳，于无菌操作台内进行表面消毒；表面消毒是指用75%的无水乙醇消毒40s，之后用20%的次氯酸钠溶液消毒lOmin，无菌水冲洗4遍，之后再经600W超声处理I Omin，种子表面消毒期间不停地摇动。(2)将步骤(I)中消毒后的种子接种于添加有5.0mg/L 6_BA、0.5mg/L TDZ、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂的MS培养基中进行胚乳启动培养。(3)光照培养6?9d后，把胚乳从处于萌动状态乌桕种子上剥离(图1)，接种于添加有4.5mg/L 6-BA、0.2mg/L 102、3(^/1蔗糖和7.(^/1琼脂的13培养基种进行不定芽诱导。(4)光照培养2?3周后，获得嫩绿不定芽丛(图2);将不定芽丛切成0.3X0.4cm2大小的切块(图3)，接种于添加有1.5mg/L 6-BA、0.07mg/L TDZ、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂的MS培养基中进行不定芽的增殖和伸长(图4)。(5)待芽长至2?3cm并伴有2?3个叶片时，转入添加有0.3mg/L IBA的1/4MS固体生根培养基进行生根(图5)，3?4周后获得根系健壮的乌桕试管苗，驯化后进行移栽(图6)。实施例3—种乌桕成熟胚乳离体直接再生植株的方法，具体如下:(I本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种乌桕成熟胚乳离体直接再生植株的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)取乌桕成熟种子剪去种壳，经表面消毒后接种于添加生长调节剂的启培养基中，光照，进行胚乳启动培养；(2)把胚乳从乌桕种子上剥离，接种于不定芽诱导培养基中，光照，进行不定芽的诱导，获得嫩绿不定芽丛；(3)将不定芽丛切块，转接于增殖和伸长培养基中进行不定芽的增殖和伸长；(4)转入生根培养基进行生根，获得健壮的乌桕试管苗，驯化后进行移栽。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：侯金艳，吴丽芳，赵华，
申请(专利权)人：中国科学院合肥物质科学研究院，
类型：发明
国别省市：安徽;34
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