血浆前激肽释放酶结合蛋白制造技术

本发明专利技术描述了血浆前激肽释放酶结合蛋白和使用此类蛋白的方法。

【技术实现步骤摘要】
本申请是PCT申请号为PCT/US2012/020470，申请人为“戴埃克斯有限公司”，专利技术名称为“血浆前激肽释放酶结合蛋白”的PCT申请进入中国国家阶段后申请号为201280011286.2的中国国家阶段申请的分案申请。本申请要求2011年1月6日提交的美国专利申请序列号61/430,442的优先权。在先申请的公开内容被视为本申请公开内容的一部分(并以引用方式并入)。专利技术背景血浆前激肽释放酶一种丝氨酸蛋白酶。前激肽释放酶是血浆前激肽释放酶的前体。专利技术概要血浆前激肽释放酶是接触系统的丝氨酸蛋白酶组分并为不同炎性、心血管、感染性(败血病)和肿瘤疾病的潜在药物靶标(SainzI.M.等,ThrombHaemost98,77-83,2007)。接触系统通过因子XIIa在暴露于外来物或带负电表面时或在内皮细胞表面上通过脯氨酰羧肽酶而激活(图1)(SainzI.M.等,ThrombHaemost98,77-83,2007)。血浆前激肽释放酶的激活通过其因子XII的反馈激活而增强内源性凝血并通过产生促炎性九肽缓激肽而加重炎症。作为循环中的主要激肽原酶，血浆前激肽释放酶主要负责在脉管中生成缓激肽。C1-抑制剂蛋白(C1-INH)(血浆前激肽释放酶的主要天然抑制剂)中的遗传缺陷导致遗传性血管性水肿(HAE)。患有疼痛性水肿急性发作的HAE患者通常因未知的触发因素而促成(ZurawB.L.等,NEnglJMed359,1027-1036,2008)。通过在动物模型中使用药理学药剂或遗传研究，已发现血浆前激肽释放酶-激肽系统(血浆KKS)涉及多种疾病。血浆前激肽释放酶结合蛋白(例如抗体，例如抑制性抗体)是许多疾病和病状(例如涉及血浆前激肽释放酶活性的疾病和病状)的有用治疗剂，因为它们具有高效能、特异性和长期的血清停留。高效能可转化成疗效和低药物剂量，而高特异性则可因为抑制相关的脱靶丝氨酸蛋白酶而减少副作用。一般来讲，小分子丝氨酸蛋白酶的特异性不如抗体抑制剂。长期的血清停留可允许降低给药频率。在一些方面，本公开的特征在于结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式并且例如不结合前血浆前激肽释放酶(例如人类前血浆前激肽释放酶和/或小鼠前血浆前激肽释放酶)的分离的蛋白(例如抗体，例如人类抗体)。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合本文所述的激肽释放酶结合蛋白的相同表位或与其竞争结合。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合本文所述的蛋白(例如epi-Kal2)和/或小分子(例如AEBSF)的相同表位或与其竞争结合并且不结合前血浆前激肽释放酶。在一些实施方案中，本文所述的蛋白选自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01(在本文也称为DX-2922)、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01(在本文也称为DX-2930)、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X81-B01竞争或结合与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X67-D03竞争或结合与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X101-A01竞争或结合到与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与M162-A04竞争或结合到与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X115-F02竞争或结合到与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X124-G01竞争或结合到与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白与X63-G06竞争或结合到与其相同的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白不结合前激肽释放酶(例如人类前激肽释放酶和/或小鼠前激肽释放酶)，但结合到血浆前激肽释放酶(例如人类血浆前激肽释放酶和/或小鼠血浆前激肽释放酶)的活性形式。在某些实施方案中，该蛋白结合在血浆前激肽释放酶或其片段的催化结构域的活性位点处或附近，或结合重叠血浆前激肽释放酶活性位点的表位并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。在一些实施方案中，该蛋白结合到形成血浆前激肽释放酶的催化三元组的一个或多个氨基酸：His434、Asp483和/或Ser578(编号基于人类序列)并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。在一些实施方案中，该蛋白结合到以下一个或多个氨基酸：Ser479、Tyr563和/或Asp585(编号基于人类序列)并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合以下一个或多个氨基酸：Arg551、Gln553、Tyr555、Thr558和/或Arg560(编号基于人类激肽释放酶序列)。在其他实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合以下两个、三个、四个或五个(即所有)氨基酸：Arg551、Gln553、Tyr555、Thr558和/或Arg560(编号基于人类序列)并且例如不结合前血浆前激肽释放酶。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合以下一个或多个氨基酸：S478、N481、S525和K526(编号基于人类激肽释放酶序列)。在其他实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白结合以下两个、三个或四个(即所有)氨基酸：S478、N481、S525和K526(编号基于人类激肽释放酶序列)。在一些实施方案中，该血浆前激肽释放酶结合蛋白将因子XIIa和/或缓激肽的产生与标准(例如在相同条件下但不存在该蛋白时因子XIIa和/或缓激肽的产生)相比减少超过约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或约95％。在一些实施方案中，血浆前激肽释放酶结合蛋白具有小于1000、500、100、10、1、0.5或0.2nM的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结合人类血浆前激肽释放酶的活性形式的抗体或其功能片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含来自X115‑F02的重链可变结构域的三个CDR区和/或来自X115‑F02的轻链可变结构域的三个CDR区，或者其中所述抗体或其抗原结合片段包含来自X124‑G01的重链可变结构域的三个CDR区和/或来自X124‑G01的轻链可变结构域的三个CDR区。

【技术特征摘要】
2011.01.06 US 61/430,4421.一种结合人类血浆前激肽释放酶的活性形式的抗体或其功能片段，其中所述抗体或
其抗原结合片段包含来自X115-F02的重链可变结构域的三个CDR区和/或来自X115-F02的
轻链可变结构域的三个CDR区，或者其中所述抗体或其抗原结合片段包含来自X124-G01的
重链可变结构域的三个CDR区和/或来自X124-G01的轻链可变结构域的三个CDR区。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含X115-F02
的所述重链可变结构域，和/或所述轻链可变区包含X115-F02的所述轻链可变结构域。
3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含X124-G01
的所述重链可变结构域，和/或所述轻链可变区包含X124-G01的所述轻链可变结构域。
4.根据权利要求1所述的抗体或其功能片段，其中所述抗体或其功能片段结合并抑制
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【专利技术属性】
技术研发人员：D·J·塞克斯顿，M·维斯瓦纳坦，
申请(专利权)人：戴埃克斯有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US