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肝癌相关的基因特异性siRNA、包含所述siRNA的双链寡RNA分子和包含它们的用于预防或治疗癌症的组合物制造技术

技术编号:13324435 阅读:101 留言:0更新日期:2016-07-11 12:40
本文提供肝癌相关的特异性siRNA和包含所述siRNA的高效双链寡RNA分子。所述双链寡RNA分子具有如下结构:其中亲水和疏水化合物通过简单的共价键或接头介导的共价键与双链寡RNA分子的两末端缀合,进而使其有效递送入细胞且可通过双链寡RNA分子的疏水相互作用在水溶液中转化成纳米颗粒。在双链寡RNA分子中包含的siRNA可以为肝癌相关基因,特别是ZBTB7A、YAP1或CHD1L特异性siRNA。此外,本发明专利技术涉及制备双链寡RNA分子的方法,和用于预防和治疗癌症特别是肝癌的药物组合物,其包含双链寡RNA分子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术设及肝癌相关的特异性SiRNA和包含所述SiRNA的高效双链寡RNA分子。所 述双链寡RNA分子具有如下结构:其中亲水和疏水化合物通过简单的共价键或接头介导的 共价键与双链寡RNA分子的两末端缀合W有效递送入细胞且可通过双链寡RNA分子的疏水 相互作用在水溶液中转化成纳米颗粒。在双链寡RNA分子中包含的SiRNA可优选为肝癌相关 基因,特别是ZBTB7A、YAP1或CHD1L特异性S iRNA。 此外,本专利技术设及制备双链寡RNA分子的方法,和用于预防和治疗癌症特别是肝癌 的药物组合物,其包含双链寡RNA分子。
技术介绍
抑制基因表达的技术是开发用于治疗疾病治疗剂和证实祀标中的重要工具。在运 些技术中,自从发现了RNA干扰作用(此后称作'RNAi'),已发现RNAi可作用于多种哺乳动物 细胞中的序列特异性mRNA(Silence of the Transcripts = RNA Inte;rference in Medicine,J.Mol.Med. 83:764-773,2005)。当长链双链RNA递送入细胞时,递送的双链RNA转 换成小干扰RNA(此后称为' siRNA'),由称为Dicer的内切酶加工成为21-23个碱基对(bp), 其中所述SiRNA与RNA-诱导的沉默复合物(RISC)结合,然后引导(反义)链识别并降解祀 mRNA,由此所述SiRNA序列特异性抑制勒!基因的表达(Nucleic-Acid Hierapeutics: BasiC Principles and Recent Applications,Nature Reviews Drug Discovery 1:503-514, 2002)O 根据Bedrand等,已发现siRNA在体内和体外与反义寡核巧酸(ASO)相比对相同的 革己基因具有更出色的抑制mRNA表达的效果(Comparison of Antisense Oligonucleotides and siRNAs in Cell Culture and in Vivo,Biochem.Biophys.Res.Commun.,296:1000-1004,2002)。此外,由于SiRNA的作用机制是SiRNA与祀mRNA互补结合W序列特异性控制祀 基因的表达,因此SiRNA所应用的祀标与现有基于抗体的药物或小分子药物相比可显著扩 大(Progress towards in Vivo Use of siRNAs,Molecular Therapy 13(4):664-670, 2006) O 尽管SiRNA具有出色的效果和多种用途,为将SiRNA开发为治疗剂,应将所述SiRNA 通过改进SiRNA在体内的稳定性和细胞递送效率有效递送入祀细胞巧arnessing in vivo SiRNA delivery for drug discovery and therapeutic development,Drug Discov.Today 11(1-2):67-73,Jan.2006)。 为解决上述问题,已积极实施了对一些核巧酸或SiRNA骨架修饰的技术用于改进 其体内稳定性进而对核酶具有抗性或使用载剂如病毒载体、脂质体、纳米颗粒等的研究。 在使用病毒载体如腺病毒、逆转录病毒等的递送系统中,转染效率高但免疫原性 和致癌性同样很高。另一方面,包括纳米颗粒的非病毒递送系统与病毒递送系统相比具有 低细胞递送效率但具有优势,其中非病毒递送系统在体内可具有高度的稳定性、可祀向特 异性递送、通过将包含其中的RNAi寡核甘酸摄入或内化入细胞或组织改进递送效率等,且 几乎不导致细胞毒性和免疫刺激,因此,目前与病毒递送系统相比已将非病毒递送系统评 估为潜在的递送系统(Nonviral Delivery of Synthetic SiRNA in vivo, J.Cl in.Invest.,117(12):3623-3632,December 3,2007)。 在非病毒递送系统中,在使用纳米载剂的方法中,纳米颗粒通过使用多种多聚物 如脂质体、阳离子多聚复合物等形成,然后将iRNA于运些纳米颗粒上支持,即由此将纳米载 剂递送入细胞。在使用纳米载剂的方法中,主要使用多聚纳米颗粒、多聚胶束、脂质复合物 等。其中,脂质复合物由阳离子脂质组成且与细胞中内涵体的阴离子脂质相互作用W将内 涵体去稳定化,由此发挥将iRNA递送入细胞的作用(Proc.化tl. Acad. Sci. 15; 93(21): 11493-8,1996)O 此外,已知SiRM在体内的效率可通过将化学化合物等与SiRNA的过客 (passenger)(有义)链末端位点缀合W允许SiRNA具有改进的药物动力学特征(Na化re 11; 432(7014): 173-8,2004)。在运种情况中,SiRNA的稳定性可根据与SiRNA的有义(过客)或反 义(引导)链的末端缀合的化学化合物的性质改变。例如,阳离子化合物存在时,与多聚化合 物如聚乙二醇(PEG)缀合的SiRNA与SiRNA的阴离子憐酸基团相互作用W形成复合物,由此 获得包含改进的SiRNA稳定性的载剂(J.Control Release 129(2): 107-16,2008)。具体地, 由于由多聚复合物组成的胶束具有显著的均匀分布,且与微球、纳米颗粒等相比包含显著 小的尺寸时其具有自发形成的结构,因此其为用作药物递送载剂的另一系统,其在产品的 质量易于管理且再现性易于保障方面存在优势。 此外,为改进SiRNA细胞内的递送效率,使用通过将为生物兼容多聚物的亲水化合 物(例如聚乙二醇(PEG))与SiRNA经由简单共价键或接头介导的共价键缀合获得的SiRNA缀 合物开发了用于保障SiRNA的稳定性和实施有效细胞膜通透性的技术(韩国专利登记号 883471)。然而,即使SiRNA是化学修饰的且与聚乙二醇(PEC)缀合,缺点如在体内的低稳定 性和将SiRNA递送入祀器官的难度仍存在。为克服运些缺点,开发了亲水和疏水化合物在其 中与寡核巧酸结合的双链寡RNA分子,特别是双链寡RNA如siRNA。所述分子通过疏水化合物 的疏水相互作用形成自组装的纳米颗粒(其也称作自组装的胶束抑制性RNA(SAMiRNA?)) (参见韩国专利登记号1224828)。SAMiRNA?技术具有优势,其可获得包含与现有递送技术相 比包含显著小尺寸的均质纳米颗粒。 同时,四分之一的韩国人死于癌症(死亡的首要原因),且对应诊断方法的建立和 日期采集方法、年龄群体、环境变化等,死于癌症的患者数目每年显著增加。此外,癌症的生 成和由于癌症的死亡在全球也已增加,由此预防、诊断和治疗癌症的方法对于人类来说是 普遍且急需的任务(Bio-Technology(BT)Trends Report,Qirrent Development Trend of New Drug for Major Diseases,Biotechnology Policy 民esearch Center,2007,Edition No .72)D 癌症是全球导致最大数目人类死亡的疾病之一,且创新性癌症治疗剂的开发可减 少在治疗癌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ZBTB7A、YAP1或CHD1L特异性siRNA,其包含含有选自SEQ ID NO.1‑300的任一序列的有义链和含有与其互补的序列的反义链。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员:蔡济旭尹坪伍金翰娜朴翰浯韩宝兰高映浩磪基恩金宰恩
申请(专利权)人:柏业公司赛诺菲安万特韩国有限公司
类型:发明
国别省市:韩国;KR

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