LC‑MS/MS联用测定拉帕替尼中杂质含量的方法技术

本发明专利技术提供了LC‑MS/MS联用检测拉帕替尼中4‑(3‑氟苯甲氧基)3‑氯苯胺和2‑(甲砜基)乙胺盐酸盐杂质含量的方法。通过本发明专利技术所述的方法，能够快速有效地检测拉帕替尼原料药中的4‑(3‑氟苯甲氧基)3‑氯苯胺和2‑(甲砜基)乙胺盐酸盐杂质，且可同时定量检测分析这2种杂质的含量。应用本发明专利技术所述的方法，检测结果准确可靠，操作简便，快速，专属性强，重复性好，且无残留效应，可用于拉帕替尼药物生产的质量控制。

【技术实现步骤摘要】


本专利技术涉及药物分析
，具体地，涉及LC-MS/MS联用检测抗肿瘤药拉帕替尼中杂质含量的方法。

技术介绍

拉帕替尼是一种能够同时靶向人表皮生长因子受体(EGFR)和人表皮生长因子受体-2(HER2)的小分子激酶抑制剂，由GSK公司开发，于2007年3月获得美国FDA批准，用于联合用药：合用卡培他滨治疗过度表达HER2的晚期或转移性乳腺癌，合用来曲唑治疗过度表达HER2、激素受体阳性的转移性乳腺癌绝经期妇女。
4-(3-氟苯甲氧基)3-氯苯胺(化合物4)和2-(甲砜基)乙胺盐酸盐(化合物9)分别是制备拉帕替尼原料药的两种生产用中间体原料(两者的结构见下式)，通常最终的拉帕替尼成品原料药中会含有少量的化合物4以及化合物9杂质，为了提高拉帕替尼的质量和稳定性、以及降低供临床用拉帕替尼的药物毒副作用，故在生产中需要对化合物4和化合物9进行含量分析测定，并在拉帕替尼原料药中对化合物4和化合物9杂质的含量进行限量。
现有技术中，只有针对化合物4进行杂质限量的方法，但是目前没有针对化合物4和化合物9同时进行含量测定的方法见诸报道，因而，关于拉帕替尼的杂质含量分析测定方法仍有待改进。

技术实现思路

本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种结果准确可靠，简便，快速，专属性强，重复性好，可同时定量分析化合物4和化合物9的含量的LC-MS/MS(液相色谱-质谱/质谱)联用检测方法，用于拉帕替尼药物生产的质量控制。
本专利技术是基于专利技术人的以下发现而完成的：
专利技术人在制定拉帕替尼原料药的药品标准中，化合物4杂质的含量限度为不高于4μg/1g(即4ppm)，化合物9杂质的含量限度为不高于0.02％，普通的高效液相色谱法检测化合物4的检测限很低，只能测定0.1％及以上的杂质。化合物9因无紫外吸收，无法用液相测定。专利技术人尝试用蒸发光散射虽然可以检测到，但其检测限很低，只能测定2％及以上的杂质。专利技术人在研究过程中，使用C8(sunfireC850*4.6mm，5μm)色谱柱优化分析拉帕替尼原料药及化合物4、化合物9的色谱条件，用甲醇(B)-水(A)作为流动相，进样体积为10.0μL，在实验过程中发现，在如表1所示的梯度条件、以及在这种类型的色谱柱上，化合物4及拉帕替尼原料药的保留较好，但化合物9并没有表现出良好的保留行为(化合物9基本在死时间位置出峰，该条件下的死体积约为0.5mL，而化合物9的出峰时间为1.5min)。
表1：sunfireC8的梯度条件
时间(min) 流动相B(％) 流速(ml/min) 0 30 0.3 0.4 30 0.3 2.0 60 —— 6.0 95 0.8 9.0 95 0.8 9.1 30 0.3 11 30 0.3 在LC-MS/MS分析过程中化合物的保留太弱，容易受其他极性大的化合物的干扰，从而影响化合物定量的准确性。为了能够同时准确的定量分析化合物4和化合物9，需增强化合物9的保留。所以为了增强化合物9的保留，本研究在现有的实验条件下进行方法开发，旨在建立一个简便，快速，专属性强，适用于拉帕替尼中化合物4和化合物9的杂质限量分析方法。
在研究过程中，经过大量反复试验，专利技术人发现采用AquasilC18色谱柱、流动相B(有机相)使用乙腈时，效果较佳。
进一步的，为了使化合物4和化合物9在色谱柱上都有一定的保留，且没有残留效应(残留，即在注射高浓度样品之后的空白样品(溶剂)中会在相应的出峰时间出现色谱峰。在定量分析过程中，如果化合物有残留会影响定量的准确性，一般要求残留不超过定量下限的20％)，本专利技术的专利技术人经过艰苦卓绝的努力和实验研究，意外地发现采用AquasilC18色谱柱，使用表2所示的梯度条件，有机相(B)为乙腈，水相(A)为水(含5mM甲酸铵)，进样体积为5.00μL时效果较佳，典型的色谱图如图1所示，拉帕替尼，化合物4，化合物9以及利多卡因(内标)的出峰时间分别为2.09min，0.54min，0.81min，1.21min。由于原料药的浓度较高，所以通过六通阀从1.5分钟将其切换至废液瓶中，以免影响质谱。
表2：AquasilC18的梯度条件
时间(min) 流动相B(％) 流速(ml/min) 0 55 0.6 1.0 55 0.6 1.5 95 0.6 2.5 95 0.6 2.6 55 0.6 3.6 55 0.6 因此，本专利技术提供了一种检测拉帕替尼中4-(3-氟苯甲氧基)3-氯苯胺和2-(甲砜基)乙胺盐酸盐杂质含量的方法。根据本专利技术的实施例，该方法是利用LC-MS/MS联用检测方法进行的。
根据本专利技术的实施例，其中色谱条件为：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂；流动相由流动相A和流动相B组成，其中，所述流动相A为甲酸铵水溶液，所述流动相B为乙腈；洗脱方式为梯度洗脱。由此，可同时对拉帕替尼原料药中的化合物4和化合物9进行定量检测，化合物4和化合物9均有较好的保留，且操作简单，方便快捷。
根据本专利技术的实施例，其中色谱条件为：以十八烷基键合硅胶为填充剂；流动相由流动相A和流动相B组成，其中，所述流动相A为浓度为5毫摩尔/升的甲酸铵水溶液，所述流动相B为乙腈；流速0.5ml/min～0.7ml/min；柱温25摄氏度～35摄氏度；进样量5μl，检测波长261nm，洗脱方式为梯度洗脱。专利技术人发现，利用本专利技术的该方法，能够快速有效的检测拉帕替尼原料药中的杂质，且可同时定量分析化合物4和化合物9，检测结果准确可靠，操作简便，快速，专属性强，重复性好。
根据本专利技术的实施例，其中质谱条件为：离子源为ESI源，采用正离子方式检测、多重反应监测MRM模式；拉帕替尼的检测离子对为m/z581—365；4-(3-氟苯甲氧基)3-氯苯胺的检测离子对为m/z252—143；2-(甲砜基)乙胺的检测离子对为m/z124—79；以及利多卡因的检测离子对为m/z235—86；离子源参数为：气帘气(CUR)30psi；离子喷射电压(IS)5500V；温度(TEM)550℃；离子源GS150psi；离子源GS2260psi。由此，能够准确定量检测拉帕替尼原料药中的杂质化合物4和化合物9的含量，并对其进行限量，灵敏度高，准确性好，重复性好。
根据本专利技术的实施例，色谱柱的柱温为25摄氏度～35摄氏度。由此，有利于同时定量分析化合物4和化合物9，温度过高或过低检测效果均不理想。
根据本专利技术的实施例，所述流动相的流速为0.5ml/min～0.7ml/min。由此，化合物4、化合物9和拉帕替尼的分离效果理想，检测时间短，检测效率高。
根据本专利技术的实施例，在所述流动相A中，所述甲酸铵的浓度为5毫摩尔/升。由此，化合物4、化合物9和拉帕替尼的分离效果好，专属性强，检测准确度高。
根据本专利技术的实施例，所述梯度洗脱的条件为：
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％) 0 40～50 60～50 1.0 40～50 60～50 1.5 2～8 98～92 2.5 2～8 98～92 2.6 40～50 60～50 3.6 40～50 60～50 由此，化合物4、化合物9和拉帕替尼本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测拉帕替尼中4‑(3‑氟苯甲氧基)3‑氯苯胺和2‑(甲砜基)乙胺盐酸盐杂质含量的方法，其特征在于，所述方法是利用LC‑MS/MS联用检测方法进行的。

【技术特征摘要】
1.一种检测拉帕替尼中4-(3-氟苯甲氧基)3-氯苯胺和2-(甲砜基)乙胺盐酸盐杂质
含量的方法，其特征在于，所述方法是利用LC-MS/MS联用检测方法进行的。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，
色谱条件为：
色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流动相由流动相A和流动相B组成，其中，所述流动相A为甲酸铵水溶液，所述流动
相B为乙腈；
洗脱方式为梯度洗脱，
质谱条件为：
离子源为ESI源，采用正离子方式检测、多重反应监测MRM模式；
拉帕替尼的检测离子对为m/z581—365；4-(3-氟苯甲氧基)3-氯苯胺的检测离子对为
m/z252—143；2-(甲砜基)乙胺的检测离子对为m/z124—79；以及利多卡因的检测离子
对为m/z235—86；
离子源参数为：
气帘气30psi；
离子喷射电压5500V；
温度550℃；
离子源GS150psi；
离子源GS260psi。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为25摄氏度～35摄
氏度。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.5ml/min～0.7
ml/min。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述流动相A中，所述甲酸铵的浓
度为5毫摩尔/升。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的条件为：
时间(分钟)
流动相A(％)
流动相B(％)
0
40～50
60～50
1
40～50
60～50
1.5
2～8
98～92
2.5
2～8
98～92
2.6
40～50
60～50
3.6
40～50
60～50
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为C18色谱柱。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括：
(1)色谱条件：以十八烷基键合硅胶为填充剂；所述流动相A为浓度为5毫摩尔/升
的甲酸铵水溶液，所述流动相B为乙腈；流速0.5ml/min～0.7ml/min；柱温25摄氏度～35
摄氏度；进样量5μl，检测波长261nm，按照下表进行梯度洗脱：
时间(分钟)
流动相A(％)
流动相B(％)
0
40～50
60～50
1.0
40～50
60～50
1.5
2～8
98～92
2.5
2～8
98～92
2.6
40～50
60～50
3.6
40～50
60～50
(2)质谱条件：离子源为ESI源，采用正离子方式检测、多重反应监测MRM模式；
4-(3-氟苯甲氧基)-3-氯苯胺的检测离子对为m/z:252—143；2-(甲砜基)乙胺的检测离子对
为m/z:124—79；利多卡因内标的检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：许勇，王学海，李莉娥，夏亚子，郭涤亮，乐洋，黄璐，杨仲文，余艳平，胡斌，胡虹，田华，冯权武，朱垒，肖强，黄松，于静，
申请(专利权)人：人福医药集团股份公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42