【技术实现步骤摘要】
201410752441
【技术保护点】
一种用于检测样品中两个或两个以上靶核酸的方法，其包括以下步骤：(a)向含有样品和聚合酶的循环扩增反应混合物中提供上游外引物、下游外引物、探针和两组或两组以上上游内引物和下游内引物，其中，每组上游内引物和下游内引物中:所述上游内引物的3’端为上游内引物靶序列识别片段，所述靶序列识别片段可特异性与对应的靶核酸杂交，另外，所述上游内引物的5’端为上游外引物重叠片段，所述外引物重叠片段的序列与对应的靶核酸的序列不互补；在所述靶序列识别片段和所述外引物重叠片段之间具有探针结合片段；所述下游内引物的3’端为下游引物靶序列识别片段，其核苷酸序列与对应的靶核酸的序列互补，所述下游引物的5’端为下游外引物重叠片段，其序列与靶核酸的序列不互补；其中所述两组或两组以上的上游内引物和下游内引物中各组的上游外引物重叠片段的序列相同，各组的探针结合片段的序列相同，以及各组的下游外引物重叠片段的序列相同；其中所述上游外引物的3’端为上游引物重叠片段，其与所述上游内引物的5’端的所述上游外引物重叠片段相同，所述上游外引物的5’端的片段与靶核酸不互补；所述下游外引物的3’端为下游引物重叠片段，其与所述下游内引物的5’端...
【技术特征摘要】
1.一种用于检测样品中两个或两个以上靶核酸的方法，其包括以下步
骤：
(a)向含有样品和聚合酶的循环扩增反应混合物中提供上游外引物、
下游外引物、探针和两组或两组以上上游内引物和下游内引物，
其中，每组上游内引物和下游内引物中:
所述上游内引物的3’端为上游内引物靶序列识别片段，所述靶序列识
别片段可特异性与对应的靶核酸杂交，另外，所述上游内引物的5’端为上
游外引物重叠片段，所述外引物重叠片段的序列与对应的靶核酸的序列不互
补；在所述靶序列识别片段和所述外引物重叠片段之间具有探针结合片段；
所述下游内引物的3’端为下游引物靶序列识别片段，其核苷酸序列与
对应的靶核酸的序列互补，所述下游引物的5’端为下游外引物重叠片段，
其序列与靶核酸的序列不互补；
其中所述两组或两组以上的上游内引物和下游内引物中各组的上游外
引物重叠片段的序列相同，各组的探针结合片段的序列相同，以及各组的下
游外引物重叠片段的序列相同；
其中所述上游外引物的3’端为上游引物重叠片段，其与所述上游内引
物的5’端的所述上游外引物重叠片段相同，所述上游外引物的5’端的片段
与靶核酸不互补；
所述下游外引物的3’端为下游引物重叠片段，其与所述下游内引物的
5’端的所述下游外引物重叠片段相同，所述下游外引物的5’端与靶核酸不
互补，
以及
其中所述探针的核苷酸序列与所述上游内引物的探针结合片段相同或
少一个或数个核苷酸，并且所述探针的3’和5’端分别标记了报告基团和淬
灭基团，所述报告基团的信号可被淬灭基团淬灭；
(b)实施多个循环扩增步骤，所述循环扩增步骤包括杂交步骤和核酸延
长步骤；测量报告基团的信号，由此对靶核酸进行检测。
2.权利要求1的方法，其中步骤a)中所述含有样品和聚合酶的循环扩
增反应混合物是一个混合物。
3.权利要求1的方法，其中步骤a)中所述含有样品和聚合酶的循环扩
增反应混合物是两个或两个以上混合物。
4.权利要求1的方法，其中步骤(b)中所述多个循环扩增步骤包括第
一扩增阶段和第二扩增阶段，在第一扩增阶段中可得到以靶核酸为模板，由
对应的上游内引物与下游内引物限定的扩增产物，第二扩增阶段中可得到以
第一扩增阶段得到的扩增产...
【专利技术属性】
技术研发人员：许越琰，赵海峰，
申请(专利权)人：常州金麦格生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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