一种鱼类早期生活史耳石样品制备方法技术

本发明专利技术涉及生物标本制备领域，具体而言，涉及一种鱼类早期生活史耳石样品制备方法，该方法为：于镜下滴加腐蚀性溶液以暴露耳石；用纯化水清洗暴露的耳石多次，同时吸除清洗后的液体和/或组织残余；待耳石室温干燥后用封片剂将耳石包埋，待封片剂铺平后烘干；鱼类早期生活史中后期耳石封片前还需要进行磨片处理。本发明专利技术提供的方法降低了鱼类早期生活史阶段耳石获取的难度，即便样品组织不透明也可以使用本方法，且制得的标本更洁净，杂质更少，更有利于标本的长期保存。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物标本制备领域，具体而言，涉及一种鱼类早期生活史耳石样品制备方法。
技术介绍
鱼类生态学研究主要包括年龄、生长、食性、死亡以及种群数量变动等。由于鱼类种群数量变动一大部分取决于早期生活史阶段(胚胎期、仔稚鱼期以及幼鱼期)的存活率，所以早期生活史的生态学研究对于生物种类成体种群的补充、种群结构及种群规模具有十分重大的意义。带有编年信息，并且在整个生命过程中连续生长的，具有坚固解剖结构的鱼类骨骼结构诸如鱼鳞，鳃盖骨，鳍条，椎骨等通常可用于鱼类年龄与生长状况判定的参考。硬骨鱼类中最先钙化的结构通常是耳石，鱼类耳石位于内耳内，一般由矢耳石、微耳石和星耳石各1对组成。相比其他骨骼结构，耳石的特殊性在于生长具有连续性，受外界环境影响相对小，在野外采集所得的鱼类从来未发现耳石被重新吸收现象，并且一旦形成便保持不变，因而成为生活史事件永久记录的良好载体。自Pannella(1971)首次描述了鱼类耳石日沉积增长变化以来，鱼类耳石的研究得到了广泛的开展，随着相关理论和技术的发展，它已称为一种揭示鱼类生活史、生活史重建以及水体环境域变的关键技术。早期生活史阶段的鱼类相关生态学研究目前在耳石形态发育、日轮鉴定日龄以及日轮增长等有较多报道。耳石微结构检测与分析技术主要用于鉴别仔鱼种群、推测产卵时间、仔鱼早期发育条件和评估死亡率，目前已经成为研究鱼类早期生活史的重要手段。因此，制备好耳石样品是要检测分析耳石微结构重要一环。然而，现有的耳石制备方法多是针对的成年鱼，将其直接套用在仔稚鱼耳石的制备上，存在摘取耳石困难的问题。此外现有技术还存在标本不洁净、不易长久保存的问题。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种鱼类早期生活史耳石样品制备方法，所述的制备方法操作易于掌握，可解决处于早期生活史的鱼类摘取耳石困难、制得的标本不洁净、不易长久保存的问题。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种鱼类早期生活史耳石样品制备方法，包括以下步骤：1)、将处于早期生活史的鱼样本置于解剖镜或者体视显微镜下，向所述鱼样本上滴加腐蚀性溶液以暴露耳石；所述腐蚀性溶液为弱酸、弱碱或强碱弱酸盐的溶液；2)、用纯化水清洗暴露的耳石多次，同时吸除清洗后的液体和/或组织残余；3)、待耳石室温干燥后用封片剂将耳石包埋，待封片剂铺平后烘干。鱼类早期生活史阶段作为鱼类整个生活史中的一个重要的环节，早期发育阶段成活率直接关系到鱼类的实际补充量的大小，是引起种群数量变动和年龄结构变化的主要原因，并与渔业资源开发利用尺度以及鱼类资源保护政策的制定等密切相关。一般情况下，鱼类早期生活史阶段主要包括胚胎(卵)、仔鱼期、稚鱼期及幼鱼期。这种分期的方法是根据鱼类器官结构的发育、营养和摄食等特征进行划分的。处于早期生活史阶段的鱼耳石较小，且样本本身体积也很小，因而耳石的摘取非常困难，本申请通过使用腐蚀性溶液腐蚀掉耳石周围的组织，使得耳石摘取变的很容易。此外，本申请没有采用常规的压片法，而是在将封片剂烘干后即可观察。这样制得的标本更洁净，杂质更少，更有利于标本的长期保存，且适用于体透明消失后时期的鱼样品。用纯化水清洗暴露的耳石的次数一般为3～4次。优选的，如上所述的鱼类早期生活史耳石样品制备方法，在滴加腐蚀性溶液以暴露耳石的步骤中，具体包括：滴加腐蚀性溶液再滴加纯化水减缓鱼样本被腐蚀的速度。由于生物样本的多样性和复杂性，不同鱼类的外层组织厚度，组织的构成等都可能有所差别，为了使得鱼体的溶解速度变的可控，所以可选的，需要用纯化水来稀释腐蚀性液体的浓度。优选的，如上所述的鱼类早期生活史耳石样品制备方法，所述包埋的步骤具体包括：将封片剂滴在耳石样品附近，再于所述封片剂上滴加有机溶剂使封片剂自由扩散将耳石包埋。这种包埋方式，封片剂以有机溶剂为载体，在表面张力的作用下缓缓扩散铺满整个载玻片，避免气泡的产生。有机溶剂还可起到透明耳石、稀释封片剂的作用，使其不至于太过黏稠。优选的，如上所述的样品制备方法，所述鱼样本包括处于胚胎期、仔鱼期、稚鱼期或幼鱼期的新鲜样本、低温保存样本或无水乙醇固定的样本。其中胚胎期具体为耳石已经形成后的胚胎期。优选的，如上所述的鱼类早期生活史耳石样品制备方法，当所述鱼样本为胚胎期或仔鱼期样本时，在步骤1)～2)中，耳石的暴露及清洗方法具体为：待腐蚀性溶液将耳石周围的鱼体腐蚀的洁净、透明时就开始用水清洗，并留下残存的鱼体作为耳石位置参照。这么做一方面是由于耳石过小、过轻、易滑动，很容易在清洗时，滤纸将其吸走；另一方面，对于胚胎期或仔鱼期样本，由于耳石过小，没有位置参照物，在显微镜下观察分析时很难找到耳石，因而需要在鱼体未被完全溶解之前，根据残存的鱼体作为耳石位置的参照，不要等鱼体完全溶解掉只剩下耳石再清洗。优选的，如上所述的鱼类早期生活史耳石样品制备方法，当所述鱼样本为稚鱼期或幼鱼期样本时，步骤1)包括：将所述鱼样本的鱼头剪下，弃鱼身；将腐蚀性溶液滴加在所述鱼样本的鱼头上以浸没鱼头，鱼头松软后在耳囊处将耳石挑出并移除多余的组织。通常稚鱼期和幼鱼期的鱼身就已经比较大，为了操作方便，应当将鱼头单独取下。稚鱼期的鱼身组织也比较厚实，所以用腐蚀性溶液将样本软化后，将耳石挑出之后就可以。进一步优选的，对于30日龄后耳石样品，在包埋之后封片之前，还包括磨片；所述磨片的操作具体包括：用2000～3000目水砂纸打磨包埋好的耳石至其核心暴露，再用5000～10000目的水砂纸将暴露出的核心抛光，用纯化水清洗2～3次，用有机溶剂将封片剂溶解，将未打磨的一侧朝外放置并烘干。通常前30日龄之前的耳石不需要进行打磨，而30日龄后的耳石已经有一定厚度，无法辨别轮纹，需要进行打磨抛光。优选的，如上所述的样品制备方法，所述腐蚀性溶液为次氯酸钠溶液。次氯酸钠为一种强碱弱酸盐，其溶液具有腐蚀性。进一步优选的，当所述鱼样本为胚胎期或仔鱼期样本时：当所述鱼样本为胚胎期或仔鱼期样本时，所述次氯酸钠为5.5～6.5％的次氯酸钠溶液；当所述鱼样本为稚鱼期或者幼鱼期样本时，所述次氯酸钠为10～13％的次氯酸钠溶液；所述次氯酸钠浓度以有效氯计。优选的，如上所述的鱼类早期生活史耳石样品制备方法：<本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鱼类早期生活史耳石样品制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)、将处于早期生活史的鱼样本置于解剖镜或者体视显微镜下，向所述鱼样本上滴加腐蚀性溶液以暴露耳石；所述腐蚀性溶液为弱酸、弱碱或强碱弱酸盐的溶液；2)、用纯化水清洗暴露的耳石多次，同时吸除清洗后的液体和/或组织残余；3)、待耳石室温干燥后用封片剂将耳石包埋，待封片剂铺平后烘干。

【技术特征摘要】
1.一种鱼类早期生活史耳石样品制备方法，其特征在于，包括
以下步骤：
1)、将处于早期生活史的鱼样本置于解剖镜或者体视显微镜下，
向所述鱼样本上滴加腐蚀性溶液以暴露耳石；所述腐蚀性溶液为弱
酸、弱碱或强碱弱酸盐的溶液；
2)、用纯化水清洗暴露的耳石多次，同时吸除清洗后的液体和/
或组织残余；
3)、待耳石室温干燥后用封片剂将耳石包埋，待封片剂铺平后
烘干。
2.如权利要求1所述的鱼类早期生活史耳石样品制备方法，其
特征在于，在滴加腐蚀性溶液以暴露耳石的步骤中，具体包括：
滴加腐蚀性溶液再滴加纯化水减缓鱼样本被腐蚀的速度。
3.如权利要求1所述的鱼类早期生活史耳石样品制备方法，其
特征在于，所述包埋的步骤具体包括：
将封片剂滴在耳石样品附近，再于所述封片剂上滴加有机溶剂
使封片剂自由扩散将耳石包埋。
4.如权利要求1所述的鱼类早期生活史耳石样品制备方法，其
特征在于，所述鱼样本包括处于胚胎期、仔鱼期、稚鱼期或幼鱼期
的新鲜样本、低温保存样本或无水乙醇固定的样本。
5.如权利要求4所述的鱼类早期生活史耳石样品制备方法，其
特征在于，当所述鱼样本为胚胎期或仔鱼期样本时，在步骤1)～2)
中，耳石的暴露及清洗方法具体为：
待腐蚀性溶液将耳石周围的鱼体腐蚀的洁净、透明时就开始用
水清洗，并留下残存的鱼体作为耳石位置参照。

【专利技术属性】
技术研发人员：任玉芹，周勤，王玉芬，王青林，司飞，姜秀凤，于清海，张红涛，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院北戴河中心实验站，
类型：发明
国别省市：河北;13