一种降钙素原单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种降钙素原单克隆抗体及其应用，该抗体由保藏编号为CGMCC NO：12035的杂交瘤细胞分泌产生。本发明专利技术提供的降钙素原单克隆抗体有方向性的识别降钙素原不同抗原表位区域。实验表明：本发明专利技术提供的降钙素原单克隆抗体可与降钙素原高度特异性的结合，且灵敏度高、稳定性好，用本发明专利技术提供的降钙素原抗体制备的检测试剂可以精确地测定血清中的降钙素原，具有高灵敏度和准确性，与市场上在售试剂检测结果具有高度相关性，与临床诊断具有较高的诊断一致性，可用于临床上对脓毒症或细菌性感染的辅助诊断。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种降钙素原单克隆抗体，具体涉及降钙素原单克隆抗体、降钙素原免疫原的制备及其应用，属于生物
本专利技术降钙素原单克隆抗体为由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的、编号为CGMCCNO：12035的杂交瘤细胞分泌产生；保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，电话：010-64807355，传真：010-64807288，电子邮件：cgmccim.ac.cn；保藏日期为：2016年01月28日。
技术介绍
PCT(降钙素原)是一种无激素活性的降钙素前肽物质，是由位于11号染色体上的Calc-I基因编码产生。PCT由116个氨基酸组成，相对分子量为13000，可在特殊的蛋白酶作用下被分解成3部分，分别为氨基末端的57个氨基酸多肽的降钙素，位于中央区域的33个氨基酸多肽的降钙素和羧基末端21个氨基酸多肽的抗钙素。正常情况下，PCT是由甲状腺C细胞和肝脏细胞产生，健康人体血清中PCT的含量很低(<0.1ng/ml)，几乎检测不到。当机体受到非甲状腺损伤，如烧伤、败血症、急性细菌感染等，血清中PCT浓度大量上升，而CT含量略有升高。说明除甲状腺C细胞能分泌PCT外，其它细胞也具有能分泌PCT的功能，只是这种功能须在一定条件下才能被诱发。有研究显示，在机体全身细菌感染1-3h开始升高，6h后PCT水平会急剧上升，12-48h上升至最高，2-3天后基本恢复正常，且它在6-24h内不会降解为降钙素，维持一定的稳定水平，在体内的半衰期大约为25～30h(TavaresE,FJ.Immunoneutralizationoftheaminoprocalcitoninpeptideofprocalcitoninprotectsratsfromlethalendotoxaemia:neuroendocrineandsystemicstudies[J].ClinSci.,2010Dec；119(12):519-34.)。PCT是区别细菌感染和非细菌性感染的重要指标，许多研究发现，在全身细菌、真菌感染时，血清PCT浓度会升高，而在非细菌性(如病毒)感染或是局部炎症反应时保持低水平。其它一些炎症指标如CRP和白细胞数目是炎症反应的标志物，对病毒感染或是细菌感染都有反应。后期研究表明，血清PCT浓度与脓毒症的严重程度呈正相关。健康人血清中PCT含量非常低，局部的细菌感染也只能使PCT水平微量升高，当PCT浓度>2.0ng/mL，并随着PCT浓度的升高，患者确诊为脓毒症的可能性也不断升高。因此，PCT与常规用于炎症诊断的指标相比，是较理想的诊断细菌性感染及脓毒性并发症的一项指标。临床实验室检测血清降钙素原常用的检测方法，如胶体金标记技术、双抗体夹心免疫化学发光法、胶乳增强免疫比浊法等，其检测试剂盒的研发对所需的单克隆抗体有一定要求，需要两种或两种以上的单克隆抗体，且必须能够识别不同抗原表位，以排除交叉反应、提高反应灵敏度。如果用PCT全抗原直接进行小鼠免疫，最后筛选出的能稳定分泌PCT单克隆抗体的细胞株，很可能是由抗原上免疫原性较强的同一位点刺激机体产生，或是只能识别降钙素或抗钙素，致使最终得到的单克隆抗体不能进行后续应用，导致有效抗体制备时间的延长，人力、财力资源的浪费。所以，我们需要设计一种免疫原，这种免疫原刺激机体产生的抗体针对不同的抗原区域，使制备的抗降钙素原抗体可以快速、有效的应用于特定降钙素原检测试剂盒的研制中。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的上述不足，提供一种可以快速、有效的应用于特定降钙素原检测试剂盒的降钙素原单克隆抗体。本专利技术的降钙素原单克隆抗体为由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的、编号为CGMCCNo：12035的、分类命名为杂交瘤细胞株(参据的生物材料(株)：N-PCT-A3)分泌产生。本专利技术的另一目的在于提供一种用于制备降钙素原单克隆抗体的免疫原。本专利技术所采用的降钙素原免疫原包括独立的降钙素原多肽片段、或者是降钙素原多肽片段偶联载体蛋白得到的偶联物、或者是降钙素原多肽片段与上述的偶联物。作为一种优选方案，降钙素原多肽片段包括N-PCT(其氨基酸序列如SEQIDNO：1所示：APFRSALESSPADPATLSEDEARLLLAALVQDYVQMKASELEQEQEREGSSLDSPRS)、降钙素、抗钙素(其氨基酸序列如SEQIDNO：2所示：DMSSDLERDHRPHVSMPQNAN)。作为一种优选方案，载体蛋白为具有免疫原性的蛋白质；作为进一步优选方案，所述的载体蛋白为血蓝蛋白、血清蛋白、病毒肽中的一种。本专利技术提供的降钙素原抗体是由上述的降钙素原免疫原制备得到的。作为一种优选方案，所述的降钙素原单克隆抗体可识别的抗原区域包括N-PCT、降钙素、抗钙素。作为一种优选方案，所述的单克隆抗体为采用单一的降钙素原免疫原对动物进行加强免疫后，经过细胞融合获得的单克隆抗体。作为一种优选方案，免疫的动物为小鼠、大鼠、豚鼠、兔子中的一种。一种本专利技术得到的降钙素原单克隆抗体在对人血清中降钙素原进行检测、该检测是利用胶乳增强免疫比浊法、制作降钙素原检测试剂盒中的应用，在体外测定血清标本中降钙素原含量。本专利技术的优点在于：有方向性的提供一种针对降钙素原不同区域的单克隆抗体(创造性的从降钙素原这个完整的免疫原上取出一部分作为免疫原，得到的抗体是针对这一部分的，对后期应用提供了方便)，该单克隆抗体不仅可以与降钙素原高度特异性的结合，无需两种或两种以上的抗体同时使用，而且灵敏度高、特异性好，缩短了有效抗体制备的时间，节省了人力、财力资源。用该专利技术提供的单克隆抗体制备的检测试剂盒，可以快速、准确地检测人血清中的降钙素原浓度。附图说明图1：本专利技术提供的降钙素原抗体的特异性。图2：本专利技术提供的降钙素原抗体分泌的稳定性。图3：本专利技术提供的抗体的灵敏度。图4：本专利技术提供的抗体制备的试剂与血清样本反应的线性关系。具体实施方式下面通过实施例进一步详细描述本专利技术，但本专利技术不仅仅局限于以下实施例：本专利技术所提供的降钙素原免疫原是由降钙素原多肽片段偶联载体蛋白得到的。优选的，降钙素原多肽片段包括N-PCT、降钙素、抗钙素。优选的，载体蛋白为具有免疫原性的蛋白质。虽然其他足够大的具备免疫原性的物质也可以作为载体，但是通常情况下选用蛋白质或多肽作为载体，最常用的免疫原性载体包括血蓝蛋白、血清蛋白、病毒肽。本专利技术中的载体优选为血蓝蛋白。本专利技术提供的降钙素原抗体是由上述的降钙素原免疫原制备得到的。优选的，所述的单克隆抗体为采用单一的降钙素原免疫原对动物进行加强免疫后，经过细胞融合获得的单克隆抗体。下面结合具体实施例，进一步阐明本专利技术。这些实施例仅为说明本专利技术的，而并非用来限制本专利技术的专利范围的。其他对本专利技术所做的各种改动或修改，同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围内。下面实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种降钙素原单克隆抗体，其特征在于：所述的单克隆抗体为采用免疫原对动物进行加强免疫后，经过细胞融合获得的单克隆抗体；该抗体由保藏编号为CGMCC NO：12035的杂交瘤细胞分泌产生。

【技术特征摘要】
1.一种降钙素原单克隆抗体，其特征在于：所述的单克隆抗体为采用免疫原对动物
进行加强免疫后，经过细胞融合获得的单克隆抗体；该抗体由保藏编号为CGMCCNO：
12035的杂交瘤细胞分泌产生。
2.根据权利要求1所述的降钙素原单克隆抗体，其特征在于：所述的单克隆抗体可
识别的抗原区域包括N-PCT、降钙素、抗钙素。
3.根据权利要求1所述的降钙素原单克隆抗体，其特征在于：所述的动物为小鼠、
大鼠、豚鼠、兔子中的一种。
4.一种用于制备权利要求1所述的降钙素原单克隆抗体的免疫原。
5...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹炳德，邹继华，赵金华，祝快昌，张吉燕，
申请(专利权)人：宁波美康生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33