糖化血红蛋白质控物的制备方法技术

技术编号:13286536 阅读:140 留言:0更新日期:2016-07-09 02:33
本发明专利技术公开了一种糖化血红蛋白质控物的制备方法,该方法包括:对血液样本进行离心处理,获得红细胞;利用细胞洗涤液对所述红细胞进行洗涤,形成红细胞悬液;在洗涤后的红细胞加入反应液中进行糖基化;当糖基化过程中糖化血红蛋白的浓度达到所需的质控物浓度时,利用细胞洗涤液对糖基化处理后的红细胞悬液进行洗涤,进行去糖基化;在去糖基化的红细胞悬液中加入稳定剂、冻干保护剂,制成液体或冻干的糖化血红蛋白质控物。本发明专利技术可以获得稳定性高糖化血红蛋白质控物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学检验
,尤其涉及一种糖化血红蛋白质控物的制备方法
技术介绍
糖尿病治疗关键是血糖水平的控制与稳定,糖化血红蛋白是血红蛋白糖基化的产物,其能反映患者过去8~12周的平均血糖水平,且不受短期血糖浓度波动的影响。该糖化血红蛋白的准确测定需要一个稳定质控产品来监控仪器状态及试剂的好坏。而现有的质控产品稳定性差,从而使得糖化血红蛋白的测定存在偏差。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种糖化血红蛋白质控物的制备方法,旨在获得稳定性高糖化血红蛋白质控物。为实现上述目的,本专利技术提供一种糖化血红蛋白质控物的制备方法,包括以下步骤:S1,对血液样本进行离心处理,获得红细胞;S2,利用细胞洗涤液对所述红细胞进行洗涤,形成红细胞悬液;S3,在洗涤后的红细胞加入反应液中进行糖基化;S4,当糖基化过程中糖化血红蛋白的浓度达到所需的质控物浓度时,利用细胞洗涤液对所述步骤S3的红细胞悬液进行洗涤,进行去糖基化;S5,在去糖基化的红细胞悬液中加入稳定剂、冻干保护剂,制成液体或冻干的糖化血红蛋白质控物。优选地,所述步骤S1之前还包括:S0,在血液样本中加入抗氧化剂。优选地,所述细胞洗涤剂的成分为:聚乙烯乙二醇:0~3%;二钠:0~3%;葡萄糖酸镁:0-1%;Na2HPO4:0-2%;非葡萄糖六元醇六碳糖:0-8%;对羟基苯甲酸甲酯:0-0.2%;次黄嘌呤核苷:0-0.5%;新霉素:0-0.2%;氯霉素:0-0.2%;(NaOH):0-0.5%;(KCl):0-1.5%;摩尔渗透压:250-300mOsm/L;上述溶剂为去离子水。优选地,所述非葡萄糖六元醇六碳糖为甘露糖。优选地,所述含有甘露糖或葡萄糖的反应液的成分为:聚乙烯乙二醇(200-50000):0-3%;二钠:0-3%;葡萄糖酸镁:0-1%;Na2HPO4:0-2%;甘露糖或葡萄糖:0-8%;对羟基苯甲酸甲酯:0-0.2%;次黄嘌呤核苷:0-0.6%;新霉素:0-0.2%;氯霉素:0-0.2%;(NaOH):0-0.05%;(KCl):0-1.5%;NaF:0~0.5%;Ph:6.0~8.0;摩尔渗透压:250-300mOsm/L;上述溶剂为去离子水。优选地,所述反应液中还加入有牛血清白蛋白,且所述牛血清白蛋白在反应液中的质量浓度为1~6%。优选地,所述步骤S3中进行糖基化时的反应温度为18~23℃,反应时间为4~8天。优选地,所述血液样本中红细胞的浓度为:3.5*1012/L-5.0*1012/L,血红蛋白的浓度为:9g/L-12g/L。优选地,所述步骤S4中,将糖基化后的红细胞悬液加入细胞洗涤液,并进行离心除去沉淀,留取上清液。优选地,所述红细胞悬液与细胞洗涤液的比例最少为1:3。本专利技术实施例采用正常人的红细胞进行体外糖基化进行糖化血红蛋白质控物的制备,扩大了原料的来源。另外,本专利技术实施例利用非葡萄糖六元醇六碳糖作为体外糖基化的糖类,缩短了体外糖基化的时间。而且,本专利技术实施例还利用细胞洗涤液进行去糖基化处理,使得制备后的糖化血红蛋白质控物中不稳定的糖化血红蛋白的浓度降低,从而保证了糖化血红蛋白质控物的稳定性。附图说明图1为本专利技术糖化血红蛋白质控物的制备方法第一实施例的流程示意图;图2为本专利技术红细胞的血红蛋白进行糖基化的过程;图3为是本专利技术糖化血红蛋白质控物的制备方法第二实施例的流程示意图。本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例,参照附图做进一步说明。具体实施方式应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术,并不用于限定本专利技术。本专利技术提供一种糖化血红蛋白质控物的制备方法。如图1所示,该制方法可包括以下步骤:S1,对血液样本进行离心处理,获得红细胞;上述血液样本可来自没有糖尿病的健康人群,当然也可以为其他来源。收集到血液样本后,可对该血液样本进行离心处理,获得红细胞。采用的血液红细胞的浓度最好是与正常人的血液中的浓度一样。具体地,血液样本中红细胞的浓度为:3.5*1012/L-5.0*1012/L,血红蛋白的浓度为:9g/L-12g/L。S2,利用细胞洗涤液对所述红细胞进行洗涤,形成红细胞悬液;在红细胞中加入细胞洗涤液,获得红细胞混合物,即红细胞悬液。该红细胞与细胞洗涤液的比例可根据具体情况而灵活设置,而且洗涤次数也可以灵活设置,本实施例中,该洗涤次数为3次。上述细胞洗涤液的成分及浓度如下表1所示:表1.细胞洗涤液的成分及浓度细胞洗涤液成分浓度聚乙烯乙二醇0-3%乙二胺四乙酸(EDTA)0-3%葡萄糖酸镁0-1%Na2HPO40-2%甘露糖0-8%对羟基苯甲酸甲酯0-0.2%次黄嘌呤核苷0-0.5%新霉素0-0.2%氯霉素0-0.2%(NaOH)0-0.5%(KCl)0-1.5%摩尔渗透压250-300mOsm/L上述溶剂为去离子水。上表1中,甘露糖也可以用其他的非葡萄糖六元醇六碳糖或者葡萄糖代替,本实施例中,优选为甘露糖。本专利技术实施例中,该甘露糖的浓度尽量低,甚至为0%,以免红细胞的血红蛋白与甘露糖进行糖基化。上述Na2HPO4作为磷酸盐缓冲液使用,当然也可以由其他缓冲液代替,例如三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液等等。优选地,上述细胞洗涤液的成分的浓度示例如下表2所示:细胞洗涤液成分浓度聚乙烯乙二醇0.7%EDTA0.7%葡萄糖酸镁0.39%Na2HPO40.27%甘露糖0%对羟基苯甲酸甲酯0.04%次黄嘌呤核苷0.025%新霉素0.04%氯霉素0.015%(NaOH)0.08%(KCl)0.632%PH7.0摩尔渗透压300mOsm/LS3,在洗涤后的红细胞悬液中加入反应液中进行糖基化;上述反应液的成分及浓度如下表3所示:红细胞悬液与含有甘露糖的反应液混合后,红细胞中的血红蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种糖化血红蛋白质控物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1,对血液样本进行离心处理,获得红细胞;S2,利用细胞洗涤液对所述红细胞进行洗涤,形成红细胞悬液;S3,在洗涤后的红细胞加入反应液中进行糖基化;S4,当糖基化过程中糖化血红蛋白的浓度达到所需的质控物浓度时,利用细胞洗涤液对所述步骤S3的红细胞悬液进行洗涤,进行去糖基化;S5,在去糖基化的红细胞悬液中加入稳定剂、冻干保护剂,制成液体或冻干的糖化血红蛋白质控物。

【技术特征摘要】
1.一种糖化血红蛋白质控物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1,对血液样本进行离心处理,获得红细胞;
S2,利用细胞洗涤液对所述红细胞进行洗涤,形成红细胞悬液;
S3,在洗涤后的红细胞加入反应液中进行糖基化;
S4,当糖基化过程中糖化血红蛋白的浓度达到所需的质控物浓度时,利
用细胞洗涤液对所述步骤S3的红细胞悬液进行洗涤,进行去糖基化;
S5,在去糖基化的红细胞悬液中加入稳定剂、冻干保护剂,制成液体或
冻干的糖化血红蛋白质控物。
2.如权利要求1所述的糖化血红蛋白质控物的制备方法,其特征在于,
所述步骤S1之前还包括:
S0,在血液样本中加入抗氧化剂。
3.如权利要求1所述的糖化血红蛋白质控物的制备方法,其特征在于,
所述细胞洗涤剂的成分为:
聚乙烯乙二醇:0~3%;
二钠:0~3%;
葡萄糖酸镁:0-1%;
Na2HPO4:0-2%;
非葡萄糖六元醇六碳糖:0-8%;
对羟基苯甲酸甲酯:0-0.2%;
次黄嘌呤核苷:0-0.5%;
新霉素:0-0.2%;
氯霉素:0-0.2%;
(NaOH):0-0.5%;
(KCl):0-1.5%;
摩尔渗透压:250-300mOsm/L;
上述溶剂为去离子水。
4.如权利要求3所示的糖化血红蛋白质控物的制备方法,其特征在于,
所述非葡萄糖六元醇六碳糖为甘露糖。
5.如权利要求1所述的糖化血红蛋白质控物的制备方法,其特征在于,
所述含有甘露糖或葡萄糖的...

【专利技术属性】
技术研发人员:张继明董婷杨凤
申请(专利权)人:深圳市雷诺华科技实业有限公司
类型:发明
国别省市:广东;44

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