一种小RNA分子及其在抗病毒中的应用制造技术

本发明专利技术涉及分子生物学领域，具体的说是一种小RNA分子及其在抗病毒中的应用。小RNA分子具有下列序列：5’‑UUCCGGGUGUUUUCGUGUCUUU‑3’。本发明专利技术小RNA分子注射鱼类后能够显著提高鱼类抗病毒免疫基因表达以及抑制病毒复制。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学领域，具体的说是一种小RNA分子及其在抗病毒中的应用。
技术介绍
非编码小RNA在动物和植物的生命过程中起重要作用。这些小RNA调控转录后基因表达，其通常作用机制是通过与靶mRNA特异性结合，阻止mRNA的翻译，从而调控发育、免疫、细胞凋亡、病原与宿主相互作用等各种生命活动。研究表明，许多病毒利用小RNA操纵宿主的基因表达以促进病毒侵染；与病毒蛋白相比，小RNA分子小，没有免疫原性，容易规避宿主的免疫防御。对宿主而言，许多动物能够合成病毒基因靶向性的小RNA，这些小RNA特异性识别并结合病毒靶mRNA，干扰病毒基因的表达，导致病毒复制被抑制。因此，小RNA在病毒病的免疫防御中具有巨大的应用潜能。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种小RNA分子及其在抗病毒中的应用。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种小RNA分子，小RNA分子具有下列序列：5’-UUCCGGGUGUUUUCGUGUCUUU-3’一种小RNA分子的应用，所述小RNA分子可应用于制备刺激抗病毒免疫基因表达或抑制病毒复制的制剂。所述病毒为细胞肿大病毒。本专利技术具有如下优点：本专利技术的小RNA分子注射鱼类后能够显著抑制病毒复制和提升鱼类抗病毒免疫基因表达。附图说明图1为本专利技术实施例提供的小RNA分子731A刺激牙鲆抗病毒免疫基因IFN、ISG15、Mx和viperin的表达(**P<0.01；*P<0.05)。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步说明。实施例旨在对本专利技术进行举例描述，而非以任何形式对本专利技术进行限制。实施例1小RNA分子731A刺激抗病毒免疫基因表达步骤1)小RNA分子稀释液制备本专利技术的小RNA分子731A的序列为5’-UUCCGGGUGUUUUCGUGUCUUU-3’。小RNA分子731A由上海Genepharma公司合成。731A在PBS中稀释至200ug/ml，即为小RNA分子稀释液。所述PBS组成成分按重量百分比计：0.8％NaCl,0.02％KCl,0.358％Na2HPO4.12H2O,0.024％NaH2PO4，余量为水。步骤2)病毒悬液制备将细胞肿大病毒RBIV-C1(具体制备方法见ZhangM,XiaoZ,HuY,SunL.Characterizationofamegalocytivirusfromculturedrockbream,Oplegnathusfasciatus(Temminck&Schlege),inChina.AquacRes.2012；43:556–64)于PBS中稀释至106copies/ml，即为病毒悬液。步骤3)小RNA分子混合液和对照混合液的制备将上述步骤1的小RNA分子稀释液与步骤2的病毒悬液等体积混合，即为小RNA分子混合液；将PBS与步骤2的病毒悬液等体积混合，即为对照混合液。步骤4)注射鱼类将10条牙鲆(重约12.2g)随机分为2组，每组5条。将这2组分别命名为A和B。将A组的每条鱼分别注射100ul步骤3)的小RNA分子混合液，将B组(对照组)的每条鱼分别注射100ul步骤3)的对照混合液。步骤5)基因表达检测在上述步骤4)注射后第4天，取鱼脾脏组织。利用EZNATotalRNA试剂盒(购于OmegaBio-tek,Doraville,美国)提取总RNA，用于cDNA制备和绝对荧光定量PCR(qRT-PCR)检测抗病毒相关免疫基因表达。具体参见文献ZhengWJ,SunL.EvaluationofhousekeepinggenesasreferencesforquantitativerealtimeRT-PCRanalysisofgeneexpressioninJapaneseflounder(Paralichthysolivaceus).FishShellfishImmunol.2011；30:638–45。所检测的抗病毒相关免疫基因为：typeIinterferon(IFN)，ISG15，Mx和viperin。结果表明，A组鱼的基因表达水平显著(P<0.01,P<0.05)高于对照组(见图1)。这些结果表明，小RNA分子731A能显著刺激抗病毒相关免疫基因表达。实施例2小RNA分子731A的抗病毒作用1)小RNA分子混合液和对照混合液的制备将上述实施例1步骤1的小RNA分子稀释液与上述实施例1步骤2的病毒悬液等体积混合，即为小RNA分子混合液；将PBS与步骤2的病毒悬液等体积混合，即为对照混合液。2)注射鱼类将10条牙鲆(重约12.2g)随机分为2组，每组5条。将这2组分别命名为A和B。将A组的每条鱼分别注射100ul步骤3)的小RNA分子混合液，将B组(对照组)的每条鱼分别注射100ul步骤3)的对照混合液。步骤3)病毒复制检测在上述步骤4注射后第4天，取鱼脾脏组织。利用DNA提取试剂盒(购于天根生化科技(北京)有限公司”)从组织中提取DNA，用绝对定量PCR法检测组织中病毒含量。具体方法见参考文献ZhangM,XiaoZ,HuY,SunL.Characterizationofamegalocytivirusfromculturedrockbream,Oplegnathusfasciatus(Temminck&Schlege),inChina.AquacRes.2012；43:556–64。结果表明，A组鱼脾脏的病毒数(9.5x103)显著(P<0.01)低于B组鱼脾脏的病毒数(2.7x104)。这些结果表明，小RNA分子731A能够显著抑制病毒复制。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种小RNA分子，其特征在于：小RNA分子具有下列序列：5’‑UUCCGGGUGUUUUCGUGUCUUU‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种小RNA分子，其特征在于：小RNA分子具有下列序列：
5’-UUCCGGGUGUUUUCGUGUCUUU-3’。
2.一种权利要求1所述的小RNA分子的应用，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙黎，张宝存，张健，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37