本发明专利技术属于生物技术制药技术领域，具体涉及一种抑制HER-2表达的核酸脂质体纳米药物及其制备方法和应用。本发明专利技术中阳离子脂质体能够包封大量的可转录表达HER-2干扰RNA的质粒药物，在动物水平上避免了核酸药物的降解，并将大量核酸药物靶向传输到荷瘤小鼠肿瘤部位富集，实现对肿瘤的显著生长抑制作用。本发明专利技术所述的核酸脂质体纳米药物在制备乳腺癌个性化治疗药物中具有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术制药
，具体涉及一种抑制HER-2表达的核酸脂质体纳米药物及其制备方法和应用。
技术介绍
近年来，乳腺癌已经成为全球女性发病率最高的恶性肿瘤之一，约占全身所患肿瘤的7%-10%，其中40%患者HER-2/neu(表皮生长因子家族成员)表达结果为阳性。目前，乳腺癌的治疗方法逐渐发展成为按肿瘤特征(如针对HER-2阳性患者)而进行个体化治疗。曲妥珠单抗是一种以HER-2受体细胞外位点为靶标的重组人源IgG单克隆抗体，它能够结合细胞膜上HER-2蛋白，抑制磷酸酰基肌醇-3-激酶和丝裂原活化蛋白激酶，从而抑制细胞周期和抑制肿瘤生长。曲妥珠单抗的临床治疗取得了较好效果，但同时也发现经曲妥珠单抗治疗的患者，产生较大的耐药性。开发高效低毒，靶向性好的基于抑制HER-2的核酸药物输送体系一直是广大科学家的努力方向。病毒载体在细胞中有很高的转染效率，然而，相关研究表明病毒载体可以引起非特异性免疫应答和炎症反应，并且病毒载体在细胞内的多拷贝复制有可能激活原癌基因，导致细胞发生转化，进而引发肿瘤。为了克服病毒载体在临床基因治疗中的缺陷，非病毒载体作为替代物，在将核酸药物传输进活体动物方面具有很大潜能。脂质体作为药物传输载体广泛应用于实验室和临床。但目前应用于乳腺癌治疗的脂质体大多半衰期较短，价格昂贵，药物包封率较低等缺点。
技术实现思路
本专利技术需要解决的问题就是公开了一种有效的治疗小鼠乳腺癌的基于抑制HER-2表达的核酸脂质体药物及其制备方法。本专利技术通过控制二十聚甘油单油酸酯与N，Y-羰基二咪唑(⑶I)的摩尔质量比，得到了不同程度氨基修饰的阳离子二十聚甘油单油酸酯，通过实验检测发现，其中阳离子脂质体(CDGMS-21)具有肿瘤靶向作用、缓释作用、降低药物毒性作用和提高药物稳定性的作用，与Lipofectamine 2000相比，这种新型的核酸脂质体具有较小的粒径和适当的表面电位，且细胞毒性明显较小，小鼠的耐受度较高，可以用于动物体内。本专利技术所述的核酸脂质体纳米药物，是由一种抑制HER-2表达的核酸药物和阳离子脂质体(CDGMS-21)构成的纳米复合物，其中抑制HER-2的核酸药物为一种可转录表达HER-2干扰RNA的质粒，该质粒在细胞内表达可高度特异性地导致HER_2mRNA基因沉默；阳离子脂质体是以二十聚甘油单硬脂酸酯为原料。本专利技术中使用的基于HER-2表达抑制的核酸药物包括:可转录表达HER-2干扰RNA的质粒，可转录表达HER-2干扰RNA的病毒载体，化学合成的HER-2 siRNA片段。本次实验中采用的基于HER-2表达抑制的核酸药物为可转录表达HER-2干扰RNA的质粒，但是不应视为对基于HER-2表达抑制的核酸药物使用种类的限制。本专利技术中核酸脂质体药物(即可转录表达HER-2干扰RNA的质粒和⑶GMS-21构成的脂质体给药体系)采用尾静脉给药给予合适剂量。该试剂的有效量是能导致乳腺癌症状明显降低的剂量。本专利技术通过动物体内实验对乳腺癌疗效进行例证。此处的动物包括但是不限于:小鼠，大鼠，驯养动物包括但是不限于猫，狗，以及其它一些动物包括但是不限于牛，羊，猪，马，灵长类动物包括但是不限于猴子和人。小鼠腋下植瘤的乳腺癌模型是被广泛认可和接受的体内药物活性检测模型，同时也可以为其它生物包括但是不局限人提供参考。下面的部分以描述这项专利技术的内容，但是不应该被视作对这项专利技术的功能范围的限定。本专利技术所述的由可转录表达HER-2干扰RNA的质粒/⑶GMS-21构成的核酸脂质体纳米药物的制备方法，在可转录表达HER-2干扰RNA的质粒溶液中加入适量CDGMS-21，搅拌混匀，室温静置20分钟，即可制得核酸脂质体纳米药物，通过Zeta电位仪测得电位和粒径。本专利技术所述的由可转录表达HER-2干扰RNA的质粒/⑶GMS-21构成的核酸脂质体纳米药物在小鼠乳腺癌肿瘤模型治疗中的应用:(I )BALB/C小鼠腋下4T1细胞植瘤(2)小鼠乳腺癌肿瘤模型建立5天后，肿瘤直径大约在0.3-0.5厘米左右，将预先制备好的核酸脂质体纳米药物通过尾静脉给药的方式注入小鼠体内(3)每隔三天给药一次，一共给药4次，15天后，分离肿瘤测量本专利技术的有益效果是:本专利技术首次采用阳离子脂质体(CDGMS-21)和一种可转录表达HER-2干扰RNA的质粒来制备一种新型核酸脂质体药物，并应用于小鼠乳腺癌治疗。该种新型的包裹核酸脂质体微粒，应用于活体实验动物而不致死，并且能显著减小小鼠实体瘤体积，实验动物生理机能有明显改善，该新型纳米药物大大提高了核酸药物在体内的稳定性;该核酸纳米药物通过尾静脉给药能直接下调小鼠乳腺癌肿瘤中HER-2的水平，明显缓解小鼠乳腺癌肿瘤症状。本专利技术为乳腺癌疾病开发了一种疗效显著的核酸纳米新药。【附图说明】图1核酸脂质体纳米复合物粒径图图2核酸脂质体纳米复合物电位图图3脂质体包裹GFP质粒细胞转染荧光照片图4核酸脂质体药物治疗小鼠乳腺癌的肿瘤实物图A.生理盐水组B.可转录表达HER-2干扰RNA组C.CDGMS-21组D.可转录表达 HER-2 干扰 RNA/CDGMS-21 组图5核酸脂质体药物治疗小鼠乳腺癌的肿瘤体积图A.生理盐水组B.可转录表达HER-2干扰RNA组C.CDGMS-21组D.可转录表达 HER-2 干扰 RNA/CDGMS-21 组图6核酸脂质体药物治疗小鼠乳腺癌的肿瘤重量图A.生理盐水组B.可转录表达HER-2干扰RNA组C.CDGMS-21组D.可转录表达 HER-2 干扰 RNA/CDGMS-21 组【具体实施方式】1.材料来源雌性BALB/c小鼠(16-18g)，购自北京军事医学院动物中心。小鼠乳腺癌细胞系4T1购自上海细胞研究院细胞资源中心。二十聚甘油单硬脂酸酯和N，Y-羰基二咪当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种核酸脂质体纳米药物，其特征是由一种抑制HER‑2表达的核酸药物和阳离子脂质体CDGMS‑21构成的纳米复合物，其中阳离子脂质体是以二十聚甘油单硬脂酸酯为原料。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张峻峰，付勇，蒋锋涛，陈江宁，黄振，马俊婷，梁宏伟，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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