本发明专利技术公开了一种用于诱导外周血单个核细胞产生结核相关细胞因子的混合多肽。混合多肽包括SEQ ID NO:1～18所述的多肽序列。本发明专利技术的混合多肽与常用的刺激蛋白CFP-10、ESAT-6及Rv1985c蛋白或三种蛋白的混合物相比，其诱导性能更高效、特异性更好。本发明专利技术的混合多肽只与结核杆菌感染人体后产的免疫记忆T细胞起反应，产生的细胞因子是结核杆菌抗原特异性的IFN-γ、IL-2、TNF-α等结核相关因子，同时这一刺激反应不受BCG的干扰。本发明专利技术提供的特异性抗原多肽对结核病致病及免疫预防机制的研究有重要意义，从而对结核病的控制具有积极的意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蛋白检测领域，具体涉及一种用于诱导外周血单个核细胞产生结核相关细胞因子的混合多肽。
技术介绍
结核病是一种常见的由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，可侵及许多脏器，以肺部结核感染最为常见。目前全球有近1/3的人已感染结核杆菌，统计数据表明在2013年有150万人死于结核病，900万新发病例，结核病已成为全世界成人因传染病而死亡的主要疾病之一。中国是全球22个结核病高负担国家之一，活动性肺结核病人数居世界第二位。结核病的传染主要是发生在病人未被发现并进行治疗之前，I名结核病患者一年中通过密切接触可传染多达10-15人。结核病的传播方式为经呼吸道传播，在肺结核病人的肺中有大量的结核杆菌，如果他对着健康人群咳嗽或打喷嚏的话就很有可能将病菌传播给健康人。而在未发现病患前，病人未采取任何预防手段，在与家庭成员、同事、同学等密切接触的过程中，接触者就容易被结核菌感染。现阶段结核病的主要治疗方法主为药物治疗，但是这样的治疗不能够完全阻止结核病的传播。接种卡介苗(BCG)是目前国际公认的最有效预防结核病的免疫方法，中国的计划免疫接种程序中规定新生儿须接种卡介苗，但是其保护效率也并未达到100%，因此，预防结核病的首要措施是尽早发现隐藏在人群中的新发病人。结核分枝杆菌是一种典型的胞内感染菌，人体对其免疫机制主要是以T细胞为主的细胞免疫。结核分枝杆菌侵入呼吸道后，原肺泡中未活化的树突状细胞(Dendriticcells，DC)抗菌活性弱，不能防止所吞.的结核分枝杆菌生长，但可将结核分枝杆菌吞.并带到他处，提呈抗原，使周围T淋巴细胞致敏，致敏的T淋巴细胞可产生多种细胞因子(INF-γ、IL-2、IL-4与TNF-α等)，这些细胞因子共同作用，杀死病灶中的结核分枝杆菌。根据这一免疫机制，通过对已感染结核分枝杆菌的患者及健康人血液中的细胞因子进行分析对比，发现感染结核分枝杆菌的患者其血液中INF- γ、IL-2、TNF-a的浓度明显升高。对于已经感染了结核分支杆菌的患者，当已经免疫过的特异性淋巴细胞再次接触结核杆菌时，仍然会分泌相应的细胞因子。为研究结核分枝杆菌的致病机制及免疫机制，研究人员使用体外诱导外周血单个核细胞(PBMC)产生结核相关细胞因子的方式。将已经感染了结核分枝杆菌的患者的外周血采出，提取其中的PBMC，并采用结核相关抗原对其进行刺激，PMBC中的T淋巴细胞即可对抗原发生免疫反应，产生相应的细胞因子。由于直接使用结核分枝杆菌进行实验具有相当的危险性，不利于进行大量研究，因此研究人员采用提取的结核分枝杆菌抗原蛋白进行研究实验。结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)是从结核分枝杆菌培养滤液中获得的活性物质，可以刺激T细胞产生IFN-γ、IL-2等细胞因子，但对于已经经过卡介苗(BCG)免疫个体的样本，Pro同样能够刺激其提取出来的τ细胞产生结核相关细胞因子，因此pro的特异性较低，还需寻找特异性更好的刺激物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于诱导外周血单个核细胞产生结核相关细胞因子的混合多肽。本专利技术所采取的技术方案是: 一种混合多肽，包括下列多肽序列:Dmaemktdaatlaqeagnferis⑶Useq id no:d；2)GNFERIS⑶LKTQIDQVESTAGSLQ(SEQID N0:2)；3)QVESTAGSLQGQffRGAAGTAAQAAV(SEQID NO:3);4)AAGTAAQAAVVRFQEAANKQKQELD(SEQID N0:4)；5)ANKQKQELDEISTNIRQAGVQYSR(SEQID N0:5)；6)IRQAGVQYSRADEEQQQALSSQMGFCSEQID N0:6)；7)MTEQQWNFAGIEAAASAIQGNVTSI(SEQID N0:7)；8)SAIQGNVTSIHSLLDEGKQSLTKLA(SEQID N0:8)；9)EGKQSLTKLAAAffGGSGSEAYQGVQ(SEQID N0:9)；10)SGSEAYQGVQQKffDATATELNNALQ(SEQID NO:10)；11)TATELNNALQNLARTISEAGQAMAS(SEQID NO:11);12)1SEAGQAMASTEGNVTGMFA(SEQID NO:12)；13)LAALAAVVELGSFDAAAERLHVTPS(SEQID NO:13)；14)AAAERLHVTPSAVSQRIKSLEQQVG(SEQID NO:14)；15)RIKSLEQQVGQVLVVREKPCRATTA(SEQID NO:15)；16)REKPCRATTAGIPLLRLAAQTALLE(SEQID NO:16)；17)RLAAQTALLESEALAEMGGNASLKRCSEQID NO:17)；18)MGGNASLKRTRITIAVNADSMATWF(SEQID NO:18)。优选的，上述混合多肽是由以下氨基酸序列编码: DatggcagagatgaagaccgatgccgctaccctcgcgcaggaggcaggtaatttcgagcggatctccggcgaCCTGCSEQ ID NO:19)；2)GGTAATTTCGAGCGGATCTCCGGCGACCTGAAAACCCAGATCGACCAGGTGGAGTCGACGGCAGGTTCGTTGCAGCSEQ ID NO:20)；3)CAGGTGGAGTCGACGGCAGGTTCGTTGCAGGGCCAGTGGCGCGGCGCGGCGGGGACGGCCGCCCAGGCCGCGGTGCSEQ ID NO:21);4)GCGGGGACGGCCGCCCAGGCCGCGGTGGTGCGCTTCCAAGAAGCAGCCAATAAGCAGAAGCAGGAACTCGACGAGCSEQ ID NO:22)；5)GCCAATAAGCAGAAGCAGGAACTCGACGAGATCTCGACGAATATTCGTCAGGCCGGCGTCCAATACTCGAGGGCCCSEQ ID NO:23)；6)CGTCAGGCCGGCGTCCAATACTCGAGGGCCGACGAGGAGCAGCAGCAGGCGCTGTCCTCGCAAATGGGCTTCCSEQ ID NO:24)；7)AGCATGACAGAGCAGCAGTGGAATTTCGCGGGTATCGAGGCCGCGGCAAGCGCAATCCAGGGAAATGTCACGTCCCSEQ ID NO:25)；8)GCAAGCGCAATCCAGGGAAATGTCACGTCCATTCATTCCCTCCTTGACGAGGGGAAGCAGTCCCTGACCAAGCTCCSEQ ID NO:26)；9)GACGAGGGGAAGCAGTCCCTGACCAAGCTCGCAGCGGCCTGGGGCGGTAGCGGTTCGGAGGCGTACCAGGGTGTCCSEQ ID NO:27)；10)GGTAGCGGTTCGGAGGCGTACCAGGGTGTCCAGCAAAAATGGGACGCCACGGCTACCGAGCTGAACAACGCGCTGCSEQ ID NO:28)；11)GCCACGGCTACCGAGCTGAACAA本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种混合多肽，其特征在于，包括下列多肽序列：1）MAEMKTDAATLAQEAGNFERISGDL（SEQ ID NO：1）；2）GNFERISGDLKTQIDQVESTAGSLQ（SEQ ID NO：2）；3）QVESTAGSLQGQWRGAAGTAAQAAV（SEQ ID NO：3）；4）AAGTAAQAAVVRFQEAANKQKQELD（SEQ ID NO：4）；5）ANKQKQELDEISTNIRQAGVQYSR（SEQ ID NO：5）；6）IRQAGVQYSRADEEQQQALSSQMGF（SEQ ID NO：6）；7）MTEQQWNFAGIEAAASAIQGNVTSI（SEQ ID NO：7）；8）SAIQGNVTSIHSLLDEGKQSLTKLA（SEQ ID NO：8）；9）EGKQSLTKLAAAWGGSGSEAYQGVQ（SEQ ID NO：9）；10）SGSEAYQGVQQKWDATATELNNALQ（SEQ ID NO：10）；11）TATELNNALQNLARTISEAGQAMAS（SEQ ID NO：11）；12）ISEAGQAMASTEGNVTGMFA（SEQ ID NO：12）；13）LAALAAVVELGSFDAAAERLHVTPS（SEQ ID NO：13）；14）AAAERLHVTPSAVSQRIKSLEQQVG（SEQ ID NO：14）；15）RIKSLEQQVGQVLVVREKPCRATTA（SEQ ID NO：15）；16）REKPCRATTAGIPLLRLAAQTALLE（SEQ ID NO：16）；17）RLAAQTALLESEALAEMGGNASLKR（SEQ ID NO：17）；18）MGGNASLKRTRITIAVNADSMATWF（SEQ ID NO：18）。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄曦，胡鹏男，李妍，
申请(专利权)人：广州迪澳医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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