本发明专利技术公开了一种土壤过氧化物酶活性测定试剂盒及其方法，该试剂盒包括：由邻苯三酚组成的试剂一，由过氧化氢与蒸馏水混匀而成的试剂二，由一水合柠檬酸、十二水合磷酸氢二钠和蒸馏水混匀而成的试剂三，由乙醚组成的试剂四。本发明专利技术的试剂盒是目前市面上唯一的检测土壤过氧化物的试剂盒，具有独创性，灵敏度极高，最低检测限达到0.5U/g土样。本发明专利技术的方法操作步骤简便，快速，可以一次性测定96个样本，且所用的试剂均为常见试剂，成本极低，对设备和用品的要求也相对较低。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生命科学领域，设及一种试剂盒，具体设及一种±壤过氧化物酶活性 测定试剂盒及其方法。
技术介绍
过氧化物酶(S-P0D)主要来源于±壤微生物，能够氧化±壤有机物质产生过氧化 物，在腐殖质的形成过程中具有重要作用。 目前测定过氧化物酶活性最权威的方法是愈创木酪法。但该方法只能适用于测定 动物、植物和培养细胞中过氧化物酶活性，不能适用于±壤样本。目前市面上还没有一种有 效的±壤过氧化物活性的测定方法及其试剂盒。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术旨在提供一种±壤过氧化物酶活性测定试剂盒 及其方法，可快速准确的对±壤过氧化物酶活性进行测定。 为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本专利技术通过W下技术方案实现： 一种±壤过氧化物酶活性测定试剂盒，包括W下试剂： 试剂一，粉剂X 1瓶，4°c保存，由一定量的邻苯立酪组成，置于lOmL试剂瓶中； 试剂二，液体XI瓶，4°C保存，由一定量的过氧化氨与蒸馈水混匀而成，置于2mL试剂瓶 中； 试剂Ξ，液体X 1瓶，4°C保存，由巧樣酸-憐酸缓冲液组成，置于5mL试剂瓶中； 试剂四，液体X 1瓶，4°C保存，由乙酸组成，置于100血试剂瓶中。 进一步的，所述试剂一中的邻苯Ξ酪的质量为0.125g; 进一步的，所述试剂二中的过氧化氨的体积为50uL，蒸馈水的体积为1.95mL; 进一步的，所述试剂Ξ中的巧樣酸-憐酸缓冲液的抑=4.5,所述的巧樣酸-憐酸缓冲液 是由57.4mg-水合巧樣酸、162.6mg十二水合憐酸氨二钢和5m蒸馈水混匀而成； 进一步的，所述试剂四中的乙酸的体积为lOOmL。 ±壤过氧化物酶(S-P0D)催化有机物质氧化成紫色没食子素，后者在430nm有特征 光吸收。[000引一种采用上述试剂盒且基于分光光度法的±壤过氧化物酶活性测定方法，包括W 下步骤： 步骤1仪器和用品的准备； 可见分光光度计或酶标仪、台式离屯、机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿或96 孔板、50mL乙酸、研鉢、冰和蒸馈水； 步骤2试剂的配制； 所述试剂一在临用前加 lOmL蒸馈水充分溶解，制成试剂一水溶液； 步骤3分光光度计或酶标仪的预热； 分光光度计或酶标仪预热30min W上，调节波长至430nm，蒸馈水调零； 步骤4 ±壤过氧化物酶活性的测定操作； 取一支1.5mLEP管，作为测定管，在其中加入0.0?风干±样、100化所述试剂一水溶液、 20化所述试剂二，振荡混匀，30°C恒溫培养1 h;再加入50化所述试剂Ξ和43化L所述试剂 四，振荡数次，室溫静置30min，取20化L上层液，于430nm处测定吸光值A; 步骤5 ±壤过氧化物酶活性的计算； 1) 用微量石英比色皿测定，其计算公式如下： 标准条件下测定吸光值A的回归方程为y = 8.97x - 0.003; 其中，X为标准品浓度(mg/mL)，y为吸光值A; 单位的定义:每天每肖±样中产生Img紫色没食子素定义为一个酶活力单位； ±壤过氧化物酶活性化/g±样)=(A+0.003)今8.97XV反旨今W今T = 80X(A+0.003); 其中，T=lh=l/24d，表示反应时间； V反宮=0.6mL，表示反应体系总体积； W=0.02g，表示样本质量； 2) 用96孔板测定，其计算公式如下： 标准条件下测定吸光值A的回归方程为y = 4.485X - 0.003; 其中，X为标准品浓度(mg/mL)，y为吸光值A; 单位的定义:每天每肖±样中产生Img紫色没食子素定义为一个酶活力单位； ±壤过氧化物酶活性化/邑±样)=(4+0.003)今4.485 X V反旨今W今Τ=160 X (A+0.003); 其中，T=lh=l/24d，表示反应时间； V反宮=0.6mL，表示反应体系总体积； W=0.02g，表示样本质量。 本专利技术的有益效果是： 1、本专利技术的试剂盒是目前市面上唯一的检测±壤过氧化物的试剂盒，具有独创性。 2、本专利技术的试剂盒检测灵敏度极高，最低检测限达到0.抓/肖±样。 3、本专利技术的方法操作步骤简便，快速，可W-次性测定96个样本。 4、本专利技术的方法所用的试剂均为常见试剂，成本极低，对设备和用品的要求也相 对较低。 上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段， 并可依照说明书的内容予W实施，W下W本专利技术的较佳实施例详细说明。本专利技术的具体实 施方式由W下实施例详细给出。【具体实施方式】 下面将结合实施例，来详细说明本专利技术。 -种±壤过氧化物酶活性测定试剂盒，包括W下试剂： 试剂一，粉剂X 1瓶，4°C保存，由0.125g的邻苯立酪组成，置于10血试剂瓶中； 试剂二，液体X 1瓶，4°C保存，由50uL过氧化氨与1.95血蒸馈水混匀而成，置于2mL试剂 瓶中； 试剂立，液体X 1瓶，4°C保存，由pH=4.5的巧樣酸-憐酸缓冲液组成，置于5mL试剂瓶中； 所述的巧樣酸-憐酸缓冲液是由57.4mg-水合巧樣酸、162.6mg十二水合憐酸氨二钢和5m蒸 馈水混匀而成； 试剂四，液体X 1瓶，4°C保存，由100血乙酸组成，置于100血试剂瓶中。 ±壤过氧化物酶(S-P0D)催化有机物质氧化成紫色没食子素，后者在430nm有特征 光吸收。 -种采用上述试剂盒且基于分光光度法的±壤过氧化物酶活性测定方法，包括W 下步骤： 步骤1仪器和用品的准备； 可见分光光度计或酶标仪、台式离屯、机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿或96 孔板、50mL乙酸、研鉢、冰和蒸馈水； 步骤2试剂的配制； 所述试剂一在临用前加 lOmL蒸馈水充分溶解，制成试剂一水溶液； 步骤3分光光度计或酶标仪的预热； 分光光度计或酶标仪预热30min W上，调节波长至430nm，蒸馈水调零； 步骤4 ±壤过氧化物酶活性的测定操作；参见上表所示，取一支1.5mLEP管，作为测定管，在其中加入0.0?风干±样、lOOiiL所述 试剂一水溶液、2化L所述试剂二，振荡混匀，30°C恒溫培养1 h;再加入50化所述试剂Ξ和 43化L所述试剂四，振荡数次，室溫静置30min，取20化L上层液，于430nm处测定吸光值A; 步骤5 ±壤过氧化物酶活性的计算； 1) 用微量石英比色皿测定，其计算公式如下： 标准条件下测定吸光值A的回归方程为y = 8.97x - 0.003; 其中，X为标准品浓度(mg/mL)，y为吸光值A; 单位的定义:每天每肖±样中产生Img紫色没食子素定义为一个酶活力单位； ±壤过氧化物酶活性化/g±样)=(A+0.003)今8.97XV反旨今W今T = 80X(A+0.003); 其中，T=lh=l/24d，表示反应时间； V反宮=0.6mL，表示反应体系总体积； W=0.02g，表示样本质量； 2) 用96孔板测定，其计算公式如下： 标准条件下测定吸光值A的回归方程为y = 4.485X - 0.003; 其中，X为标准品浓度(mg/mL)，y为吸光值A; 单位的定义:每天每肖±样中产生Img紫色没食子素定义为一个酶活力单位； ±壤过氧化物酶活性化/邑±样)=(4+0.003)今4.485 X V反旨今W今Τ=160 X (A+0.003); 其中，T=lh=l/24d，表示本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种土壤过氧化物酶活性测定试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：试剂一，粉剂×1瓶，4℃保存，由一定量的邻苯三酚组成，置于10mL试剂瓶中；试剂二，液体×1瓶，4℃保存，由一定量的过氧化氢与蒸馏水混匀而成，置于2mL试剂瓶中；试剂三，液体×1瓶，4℃保存，由柠檬酸‑磷酸缓冲液组成，置于5mL试剂瓶中；试剂四，液体×1瓶，4℃保存，由乙醚组成，置于100mL试剂瓶中。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：赵林川，
申请(专利权)人：苏州科铭生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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