一种用于抑制腺病毒感染的制剂制造技术

本发明专利技术公开了一种用于抑制腺病毒感染的制剂。本发明专利技术提供了一种制剂在如下(1)或(2)中的应用：(1)制备用于抑制腺病毒感染的产品；(2)用于抑制腺病毒感染；所述制剂主要由表没食子儿茶素没食子酸酯、单宁酸和黄芪多糖混合而成；所述表没食子儿茶素没食子酸酯、所述单宁酸和所述黄芪多糖的质量配比为(0.5-1.0)：(0.5-1.0)：(0.5-1.5)。本发明专利技术所提供的复合配方制剂的细胞毒性不高于已经获得安全许可的对照样品利巴韦林，较为安全。在安全的使用浓度下，预防性使用本发明专利技术所提供的制剂可以有效的抑制5型腺病毒的感染，具有进一步研发为腺病毒感染抑制剂的商业价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，涉及一种用于抑制腺病毒感染的制剂。
技术介绍
腺病毒引起的急性传染病，易侵犯呼吸道及消化道黏膜、眼结膜、泌尿道和淋巴 结。主要表现为急性上呼吸道感染(急性呼吸道感染由腺病毒引起者占2%~4%)，其次为 眼部和胃肠道感染。人群普遍易感，多见于儿童。约半数患者为隐性感染。婴幼儿易患腺病 毒肺炎，病情重，病死率高。无特效治疗。根据人群血清特异性抗体调查和病毒分离，可知腺 病毒感染十分广泛。传染源为患者和隐性感染者，病毒由呼吸道和眼结膜分泌物、粪便及尿 排出体外，经空气飞沫、密切接触及粪口途径传播。 人类面临病毒性传染病的现实和潜在威胁日益严峻，人类应对突发传染病的防控 压力日感倍增，但愈来愈多的实际情况表明：当病毒发生突变或出现新型病毒而导致传染 病疫情暴发时，原来的特异性防治药物难以发挥应有防控效果，甚至毫无疗效，而人类认知 水平和科研周期的限制，又使具有显著疗效的新一代特异性预防和治疗药物难以在短时间 内推出，极易导致疫情的迅速扩散和局部地区的灾难性暴发，不仅对当地的公共卫生服务 造成极大的破坏，同时也对社会的政治和经济造成巨大的冲击。因此，依据病毒的基本生物 学特性，针对病毒侵染宿主细胞的共性靶点，研发新型病毒感染抑制剂，对于应对病毒性传 染病疫情的持续挑战具有重要意义。植物化合物被称为"第七类营养素"，广泛存在于日常食物，是一类对人体健康具 有特殊作用的非营养性化学物质。相关研究发现部分植物化合物具有抑制病毒感染的生物 活性，并逐渐成为抗病毒研究的热点之一。初步的研究结果显示:植物化合物的生物学效应 主要表现在其对细胞膜生物学特性的影响和局部微环境平衡的改变等方面，部分植物化合 物通过直接嵌入细胞膜脂质双层结构，改变细胞膜正常的功能性流动和电势电位差，进而 发挥一定的生物学效应。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种抑制腺病毒感染的制剂及其应用。 本专利技术所提供的应用具体为一种制剂在如下（1)或(2)中的应用： (1)制备用于抑制腺病毒感染的产品； (2)用于抑制腺病毒感染； 所述制剂主要由表没食子儿茶素没食子酸酯、单宁酸和黄芪多糖混合而成;所述 表没食子儿茶素没食子酸酯、所述单宁酸和所述黄芪多糖的质量配比为(〇. 5-1.0): (0.5-1.0)：(0.5-1.5)〇 在本专利技术的一个实施例中，所述用于抑制病毒感染的制剂具体由表没食子儿茶素 没食子酸酯(EGCG)、单宁酸和黄芪多糖混合而成;所述表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、 所述单宁酸和所述黄芪多糖的质量配比为1:1:1.5。 在本专利技术中，所述抑制腺病毒感染为如下(a)或(b): (a)预防腺病毒感染； (b)在与腺病毒同时作用于宿主或宿主细胞时，抑制所述腺病毒对所述宿主或所 述宿主细胞的感染。 更加具体的，在本专利技术的实施例中，所述制剂对所述腺病毒感染的抑制作用具体 体现为：以哺乳动物细胞作为腺病毒感染对象，在腺病毒感染细胞的同时或者在腺病毒感 染细胞前施用所述制剂，所述制剂对腺病毒的半数抑制浓度与抑制病毒感染的阳性对照药 物相比显著降低。所述阳性对照药物具体为利巴韦林(Ribavirin)。 在本专利技术中，所述哺乳动物细胞(或(b)中所述的宿主细胞)具体为人胚肾细胞株 (293细胞）。 在本专利技术中，所述腺病毒为5型腺病毒。更加具体的，所述5型腺病毒为5型腺病毒 dl309株。 本专利技术以5型腺病毒(Ad-5)为实验对象，采用观察细胞病变的方法，在不同的感染 条件下，分别分析了表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、单宁酸和黄芪多糖这三种植物化 合物单体及其混合制剂抑制病毒感染的规律和特点。结果证实:本专利技术所提供的三种植物 化合物单体和复合配方混合物的细胞毒性均不高于已经获得安全许可的对照样品利巴韦 林，较为安全。在安全的使用浓度下，预防性使用EGCG和单宁酸等植物化合物单体以及植物 提取物复合配方混合物，可以有效的抑制5型腺病毒的感染。本专利技术所提供的制剂具有进一 步研发为腺病毒感染抑制剂的商业价值。【具体实施方式】 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中涉及的定量实验数据以均数土标准差（土s)表示，采用SPSS 17.0统 计软件运用单因素水平方差分析的方法对组间比较数据进行统计处理。 细胞株:人胚肾细胞株(293细胞)为ATCC产品，编号为ATCC CRL-1573。细胞按常规 方法传代培养。 病毒：5型腺病毒（dl309株），记载于 "Radko S，Jung R，Olanubi 0，PeIka P.Effects of Adenovirus Type 5E1A Isoforms on Viral Replication in Arrested Human Cells.PLoS One.20 150ct 8 ; I 0 ( I 0 ) : e0 I 40 I 24 · doi : I 0 · I 37 I / journal .pone .0140124. eCoIIection 2015一文，公众可从申请人处获得，仅用于重复本 专利技术实验使用。 培养液：1 )、细胞生长培养液：以DMEM培养基(G1 ibo公司产品）为母液，分别加入 10 % (体积分数)胎牛血清(Sigma公司产品），0 · 2mg/ml谷氨酰胺(G1 ibo公司产品），100U/ml 青霉素，链霉素。2)、细胞维持培养液，胎牛血清含量为2% (体积分数），其余与1)均相同。 3)、病毒增殖培养液:与细胞生长培养液相同。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)=Sigma公司产品（分析纯度>95%)，产品编号 为E4143，CAS#989-51-5。 单宁酸（Tannin):Sigma公司产品（分析纯度>99%)，产品编号为V900190;CAS# 1401-55-4。 黄芪多糖（APS):上海金穗生物科技有限公司产品^-(ChloromethyD-fU- nitrophenyD-lJ-thiazole)(分析纯度 >70%)，产品编号为 JS11328;CAS#89250-26-0。 阳性对照药物:利巴韦林(Ribavirin)，美仑生物公司产品。因目前还未有通过改 变宿主细胞膜特性抑制病毒感染的标准阳性对照药物。本研究以目前抗病毒最常用药物利 巴韦林作为对照。实验前以PBS缓冲液溶解，制成2560μg/ml过滤，除菌后，-20 °C保存。 倒置相差显微镜：日本Olympus公司产品。 细胞培养箱:美国Thermo公司产品。 多功能酶仪:美国Molecular Devices公司SpectraMax M5型多功能酶标仪。 1、细胞复苏与传代 液氮中取出293细胞，37 °C水浴，融化后，以1000 rpm离心、5min，弃上清，加入适当的 细胞生长培养液，反复吹打均匀，使细胞密度约为2 X IO5个/ml，以IOml/瓶，于T25细胞培养 瓶中，细胞培养箱中常规培养。24h后于镜下观察，细胞的贴壁情况，48-72h后，或待细胞生 长到密度大约为95 %时，弃原培养液，加入I3BS缓冲液，漂洗两次，0.5ml本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制剂在如下(1)或(2)中的应用：(1)制备用于抑制腺病毒感染的产品；(2)用于抑制腺病毒感染；所述制剂主要由表没食子儿茶素没食子酸酯、单宁酸和黄芪多糖混合而成；所述表没食子儿茶素没食子酸酯、所述单宁酸和所述黄芪多糖的质量配比为(0.5‑1.0)：(0.5‑1.0)：(0.5‑1.5)。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：常国辉，刘京梅，杨益，黄留玉，罗丽晓，李瑾惠，罗彦军，孙走南，唐玥，苏文莉，张洁，刘璇，
申请(专利权)人：中国人民解放军疾病预防控制所，
类型：发明
国别省市：北京;11