本发明专利技术涉及血清总胆固醇酶法检测技术领域，特别涉及一种血清总胆固醇检测试剂，试剂R中含有假单胞菌、奴卡菌CHOD、辣根POD、胆酸钠、4-氨基安替比林、酚、聚氧乙烯辛基乙基醚、牛血清白蛋白、4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧自由基和磷酸盐缓冲液，该试剂适合与各种全自动生化分析仪配套使用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及血清总胆固醇检测
，特别涉及一种适合全自动生化分析仪的 血清总胆固醇检测试剂。
技术介绍
血清总胆固醇是指血液中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。总胆固醇包括游离胆固 醇和胆固醇酯，肝脏是合成和贮存的主要器官。胆固醇是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆 汁酸及维生素 D等生理活性物质的重要原料，也是构成细胞膜的主要成分，其血清浓度可作 为脂代谢的指标。 临床上常用的血清总胆固醇检测方法有化学法和酶法。 1.化学法-LB反应显色法 用氢氧化钾乙醇液使血清蛋白变性及水解血清中的胆固醇酯，加水后用正己烷分溶抽 提，可从碱性乙醇液中定量地提取胆固醇（达99.7%)，分溶抽提达到抽提与纯化的双重目 的。提取的胆固醇溶液中除少量其他甾醇（人血清中约占 CH0的1%)以外，基本上不含干扰 物。抽提液挥发干后，以Li eberman-Bur chard (L-B)试剂与胆固醇显色，实际中醋酸与醋酸 酐作为胆固醇的溶剂与脱水剂，所生成的绿色产物主要是五烯胆留醇正离子，最大吸收 620nm。该方法操作复杂，显色条件要求高，且不适合全自动生化分析仪。 2.酶法 血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Choi)，后者被胆 固醇氧化酶(CH0D)氧化成胆留烯酮并产生过氧化氢，在经过过氧化物酶(P0D)催化4-氨基 安替比林与酚，生成红色醌亚胺色素。最大吸收在500nm左右，吸光度与标本中CH0含量成正 比，鉴于此，本专利技术在酶法的基础上，设计适合与全自动生化分析仪配套使用的试剂，优化 反应体系，添加多种稳定剂，显著改善了试剂的稳定性。
技术实现思路
针对于血清总胆固醇检测，本专利技术提供了一种适合与全自动生化分析仪配套使用 的血清总胆固醇检测试剂盒，该试剂盒与常规检测方法相比，使用简单、方便，具有很好的 准确度、重复性及良好的检测范围，有利于试剂在临床上的推广应用。 基本原理 血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Choi)，后者被胆 固醇氧化酶(CH0D)氧化成胆留烯酮并产生过氧化氢，在经过过氧化物酶(POD)催化4-氨基 安替比林与酚，生成红色醌亚胺色素。最大吸收在500nm左右，吸光度与标本中TC含量成正 比。本专利技术是通过以下步骤得到的： 1. 一种适合全自动生化分析仪的血清总胆固醇检测试剂盒，由R单试剂组成，R试剂的 组分为： 假单胞菌 2 800U/L 奴卡菌CH0D > 400U/L 辣根 POD > 1000U/L 胆酸钠 3mmol/L 4-氨基安替比林 0.5mmol/L 酸 3.5mmol/L 聚氧乙烯辛基乙基醚 3ml/L 牛血清白蛋白 3g/L 4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧自由基 4mmol/L 磷酸盐缓冲液PH7.7 0.4mol/L 2. 试剂R在使用时的用量为R= 300yL。本专利技术的有益效果是： 1.本专利技术选择酶法设计试剂配方用于检测血清总胆固醇，该试剂适用于多种全自动生 化分析仪。 2.本专利技术采用了 4-氨基_2,2,6,6_四甲基哌啶-1-氧自由基去除血清总胆固醇检 测中抗坏血酸的干扰。【附图说明】 图1为两种试剂的相关性曲线图； 图2为本专利技术试剂开瓶稳定性。【具体实施方式】下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步说明： 实施例1 R:假单胞菌 2 800U/L 奴卡菌CHOD > 400U/L 辣根 POD > 1000U/L 胆酸钠 3mmol/L 4-氨基安替比林 0.5mmol/L 酸 3.5mmol/L 聚氧乙烯辛基乙基醚 3ml/L 牛血清白蛋白 3g/L 4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧自由基 4mmol/L 磷酸盐缓冲液PH7.7 0.4mol/L 本实施例试剂的使用方法： 本实施例描述的血清总胆固醇检测试剂，在使用时采用全自动生化分析仪，如日立 7180全自动分析仪等，利用一点终点法进行测定。将样本和试剂R的比例设定为3:300,在样 品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作如表1: 表1实施例1试剂检测方法血清总胆固醇的含量(mg/dL)=(测定+标准）X C标准。 实施例2 干扰性试验:取新鲜混合血清，分成2等份，然后将每等份再分成5等份，加入不同的干 扰物质，使其在血清中的浓度达到表2的要求。然后分别用实施例1所得试剂，与市场常见并 认可的血清总胆固醇试剂同时对比测定血清总胆固醇的含量，对照组测定结果与加入不同 干扰物质后各组的测定结果见表2。相对偏差(％) =(干扰样本的测定均值一对照样本的测定 均值)/对照样本的测定均值X 100%。 表2实施例试剂抗干扰性能比较由表2可以看出，实施例1试剂在抗坏血酸< 20mmol/L、胆红素< 100mg/L、血红蛋白< 200mg/L、甘油三酯<22.6mmol/L对测试结果没有明显干扰。与对照试剂检测结果一致，说 明实施例1的试剂在准确度和抗干扰能力上达标。 实施例3 相关性实验:利用实施例1配方配制试剂，与市场常见的国家食品药品监督管理局认可 的某公司的血清总胆固醇试剂盒进行对照检测，同时检测了 20个临床血清样本，检测结果 如表3所示。并获得了两种试剂的相关性曲线(如图1所示），通过检测结果显示，两个试剂盒 的相关系数为〇. 999，说明了两者有极大的相关性。表3实施例1试剂与市场常见并得到认可的血清总胆固醇测定试剂盒对比检测结 果试验所用校准品和质控品分别为： 校准品:RAND0X938血清总胆固醇的含量为4.10 mmol/L。 质控品：RAND OX 10 0 5血清总胆固醇的靶值为4 · 0 7mmo 1 / L，靶值范围：3 · 5 4~ 4.60mmol/L〇 实施例4 试剂稳定性验证试验的具体操作方法： 将本专利技术实施例卜3中所得检测试剂作为试验组，取一种市售血清总胆固醇检测试剂 盒作为对照组，试验组与对照组试剂每组各自取相同的两份，一份做15天开瓶稳定性试验， 将试剂开瓶放置在仪器的2_8°C冷藏箱中（15天不取出），作为15天开瓶稳定性检测；另一份 做37°C热稳定性检测试验，封闭放置在37°C恒温水浴锅中（每天仅在检测的时候取出，检测 完毕后，依然封口放回37°C水浴锅中，连续7天），作为7天37°C热稳定性验证。将试剂同时在 日立7180全自动生化分析仪器上，按照如下表1方法进行检测，并在仪器上建立标准曲线。 取冻干粉质控品，溶解均匀后，平均分成15份，_20°C储存，每天质控一个，并且跟踪检测结 果，其开瓶跟踪监测趋势如图2。【主权项】1. 一种适合全自动生化分析仪的血清总胆固醇检测试剂盒，由R单试剂组成，其特征在 于，R试剂组分为： 假单胞菌 2 800U/L 奴卡菌CHOD > 400U/L 辣根 POD > 1000U/L 胆酸钠 3mmol/L 4-氨基安替比林 0.5mmol/L 酸 3.5mmol/L 聚氧乙烯辛基乙基醚 3ml/L 牛血清白蛋白 3g/L 4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧自由基 4mmol/L 磷酸盐缓冲液PH7.7 0.4mol/L〇2. 根据权利要求1所述本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种适合全自动生化分析仪的血清总胆固醇检测试剂盒，由R单试剂组成，其特征在于，R试剂组分为：假单胞菌 ≥800U/L奴卡菌CHOD ≥400U/L辣根POD ≥1000U/L胆酸钠 3mmol/L4‑氨基安替比林 0.5mmol/L酚 3.5mmol/L聚氧乙烯辛基乙基醚 3ml/L牛血清白蛋白 3g/L4‑氨基‑2，2，6，6‑四甲基哌啶‑1‑氧自由基 4mmol/L磷酸盐缓冲液pH7.7 0.4mol/L。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：甘宜梧，李家朋，谭柏清，
申请(专利权)人：济南观韬医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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