本发明专利技术公开了一种区分反应性淋巴结节增生与淋巴瘤的miRNA测定方法，属于分子生物学领域，对细针穿刺、组织活检或福尔马林固定-石蜡包埋切片的样本中相关miRNA的数目进行定量测定，然后对所测得的miRNA数目进行分类对比分析，从而预测样本来自淋巴结节反应性增生还是淋巴瘤；采用本发明专利技术的方法预测样本是来反应性自淋巴结节增生或淋巴瘤，其预测准确度高，可达到97.77％。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种区分反应性淋巴结节增生与淋巴瘤的 miRNA测定方法。
技术介绍
淋巴瘤是一组起源于起源于淋巴造血系统中的B细胞、T细胞和NK细胞的全身性恶 性肿瘤，依据病理学特征分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。90%以上的淋巴瘤患者诊 断为非霍奇金淋巴瘤，各组织器官均可受累。临床上怀疑淋巴瘤时，可以做淋巴结或其他受 累组织或器官的病理切片检查(活检）以确诊。 淋巴瘤的诊断主要是通过淋巴结切除活检并结合免疫组化进行诊断及免疫分型， 是一种有创的检查手段。由于其发病部位可出现在全身淋巴结内或结外任何组织，有时会 造成病理标本的难于获得，另外，病变部位常伴有感染、坏死等情况，导致病理诊断困难，需 多次活检。根据NCCN2015年的推荐，细针穿刺(FNA)或空芯针活检不能作为淋巴瘤初始诊断 的依据，但在某些情况下(淋巴结不易切取或切除活检时），FNA或空芯针活检只要取到足够 组织，或结合恰当的辅助鉴别诊断技术(免疫组化、流式细胞学检查、PCR检测bcl2基因突 变、IgH、TCR基因重排、FISH检测可能的染色体易位)可以为诊断提供一定的信息，但由于辅 助鉴别诊断技术的局限，很难做出诊断。因此，寻找一种简单、快速、无创或微创、特异的诊 断方法对淋巴瘤进行诊断及分型极其重要。 microRNA是一类进化保守的内源性非编码单链RNA小分子，在细胞内起到调控细 胞分化、增殖、凋亡等多种生理功能。成熟miRNA是一类由22个碱基(nt)组成的单链RNA小分 子，镶嵌于一种特殊的Argonaute(Ago)蛋白质中，作用于特定的mRNA革巴点而影响到蛋白质 翻译，在转录水平或转录后水平调苄基因的表达，在生命过程中起着重要的调控作用。 miR-150参与造血过程中血干细胞的分化调控，在成熟、休眠期的B和T淋巴细胞中 均具有特征性的高表达。成熟B细胞从pro-到pre-B-细胞的转换受到miR-34a的调控。miR-34a调控的关键因子是F0XP1转录因子，成熟B-细胞中这个因子同时也受到miR-150的调控。 在pro/pre-B细胞中，miR-150还调控着MYB转录因子，通过对MYB表达水平的精细调控控制 的血细胞的生成及B-细胞的正常发育。miR-150的提前表达可以阻止pro-B细胞到pre-B细 胞的转化，进而影响B-细胞成熟。miR-150的减少能促进B1-细胞的扩增及抗体的生产。 miR-155由非编码RNA BIC所编码，其表达受到BCR活化的诱导。miR-155缺失导致 形成受损的GC B-细胞和亚型转换抗原特异性抗体的分泌减少。miR-155也调节造血转录因 子PU. 1的表达，miR-155缺陷的小鼠 PU. 1的表达上调，损伤IgG 1 +细胞的产生。miR-155在淋 巴瘤细胞中具有上调，参与促进癌症发生。使其成为最具潜力的无创诊断生物标记物。 Metzler等人发现，在BIC基因上具有一段138个核苷酸的保守序列，编码miR-155的发夹结 构。该研究组还发现在Burkitt淋巴瘤中，miR-155表达量上升了100倍，此外的研究也发现， Hodgkin淋巴瘤等肿瘤中miR-155水平也有提高。因此，mir-155可能是作为一个癌基因和 MYC协同作用，而其正常功能是在B细胞的分化中起作用，其可能的靶基因是那些对抗MYC信 号通路的基因。 很多miRNA基因位点位于和癌症相关的脆性位点的区域，在肿瘤发生过程中呈现 异常的表达。许多miRNA的表达与肿瘤的发病机理相关，具有肿瘤抑制因子及致癌基因的作 用。He等人发表的论文发现在散布的B细胞淋巴瘤、滤泡型淋巴瘤、套细胞淋瘤等肿瘤中常 常有13q31位点的扩增。而在这一扩增区域的唯一的基因就是一个非编码蛋白的RNA， (：13〇"25，这个转录本编码了111丨1?-17~92簇，其中包含了7个111丨1?熟8 :111丨1?-17-5口，111丨1?-17-3p，miR-18a，miR-19a，miR-20a，miR-19b-l，and miR-92-l。他们由此推断，这个基因族的过 表达与肿瘤形成有关，而后通过实验研究证明，过表达Myc和miR-17~92簇的淋巴癌与仅有 Myc过表达肿瘤相比较，具有更强的增殖能力，更低的细胞死亡率。这些实验证实，miR-17~ 92簇中的miRNAs可以协同地行使癌基因的功能，其靶基因可能是在MYC过表达条件下激活 的凋亡蛋白。当凋亡途径被miR-17~92簇去除，MYC可以诱导细胞不受控制地增殖，这导致 了肿瘤发生。miR-21是公认的与细胞生长促进因子，在众多实验中miR-21的表达水平的升 高是唯一能得到重复的结论之一。总之，各种miRNA已被证明行事一样直接监管机构的B细 胞发育和分化。因此，B细胞恶性肿瘤出现miR-34a、miR-155、miR-150和miR-17~92簇异常 表达并不奇怪。 miRNA表达差异谱可以用来对淋巴瘤进行分期和分型分析。新近研究显示，采用9 种miRNA标记可以对DLBCL(GCB-DLBCL)，活化B细胞样DLBCL(ABC-DLBCL)，原发性纵隔DLBCL (PMBCL)亚型进行细分，这9 种miRNA 分别是111丨1?-14613-5口、111丨1?-1463、111丨1?-21、111丨1?-155、11^1?-100、111丨1?-222、111丨1?-363、111丨1?-574-3口、111丨1?-574-5口 ；采用111丨1?-17~92簇16种111丨1?祖也可对这3 种亚型进行细分，分别是 miR-17-5p，miR-17-3p，miR-18a，miR-19a，miR-20a，miR-20b，miR-92，miR-106a，miR-29a/c，miR-100，miR-199a，miR-140，miR-630，miR-16;其他细分 DLBCL 的 miRNA 标记分别为:miR-125b(GCB-DLBCL 高表达），miR-100，miR-125b，miR-130a(ABC. DLBCL 和PMBCL的高表达），miR-222和let-7f (3种淋巴瘤均出现缺失或低表达），miR-13和miR-223 (与免疫调节和其他B细胞肿瘤关联），miR-424(造血系统相关）miR-155通常在DLBCL表达 显著降低，靶基因通常包括PU. 1、AID和S0CS1在DLBCL表达显著增高。伯基特淋巴瘤 (Burkitt Lymphoma，BL)是可能来源于滤泡生发中心细胞的高度恶性B细胞肿瘤，miR-143， miR-145，miR-9和miR-34b呈现低表达状态，且其表达水平与细胞增殖呈负相关，而miR-17-5p和miR_20a则表达上调。滤泡性淋巴瘤(Follicular Lymphoma，FL)是最常见的惰性NHL， 被认为是生发中心起源B细胞肿瘤，其进展缓慢通常需要数年或数十年才能进展成为临床 肿瘤，90% 该型淋巴瘤最终转换成 DLBCI^miR-UAamiR-lSS，miR-328，miR-326，miR-302c， miR-345，miR-373，miR-210 在 FL 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种区分反应性淋巴结节增生与淋巴瘤的miRNA测定方法，其特征在于：对细针穿刺、组织活检或福尔马林固定‑石蜡包埋切片的样本中相关miRNA的数目进行定量测定，然后对所测得的miRNA数目进行分类对比分析，从而预测样本来自淋巴结节反应性增生还是淋巴瘤。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐凯，黄健，康娟娟，吴秀锦，唐放，罗德伦，杨莉，
申请(专利权)人：成都诺恩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。