本发明专利技术属于检测技术领域，具体公开了一种定量分析壳聚糖的共振瑞利散射法。本发明专利技术研究发现，在弱酸性B-R缓冲体系中，活性红4与壳聚糖的离子缔合物于λ=342nm处产生强烈的共振瑞利散射特征峰，共振瑞利散射强度与壳聚糖浓度c呈良好线性关系，在0.050～6.00µg/mL的浓度范围内，线性方程为：ΔI=682.31c+114.95（c，μg/mL），R2=0.9991，检测限0.033μg/mL。据此，建立了以活性红4为探针定量分析壳聚糖的共振瑞利散射法，该方法的回收率为95.85～104.8%。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及检测
，更具体地，设及一种定量分析壳聚糖的共振瑞利散射 法。
技术介绍
壳聚糖(CTS)是甲壳素脱乙酷基产物，其化学名称为聚葡萄糖胺（1,4)-2-氨基-2-脱氧-D-葡聚糖，是自然界含量仅次于纤维素的第二大天然有机高分子化合物。它是甲壳类 (邮、蟹）动物、昆虫的外骨骼的主要成分。壳聚糖及其衍生物是重要的生物活性物质，具有 抗肿瘤，抗凝血，减肥降脂和增强免疫力等功能，可作为医药保健品、食品、化妆品等的添加 剂及制备人造皮肤和手术缝合线等的重要原料。因此，壳聚糖在生物医学，环境卫生和食品 等领域都有着广阔的应用前景。 随着壳聚糖广泛应用，壳聚糖的准确定量显得十分重要。目前，国内外用于壳聚糖 定量分析的方法主要集中在分光光度法和巧光法。目前，光谱法测定壳聚糖普遍忽略了壳 聚糖作为高分子天然产物，其分子量从几千到百万不等，当样品中壳聚糖分子量与标准品 差异较大时，可能会产生一定的系统误差，影响准确测定。
技术实现思路
本专利技术为了克服现有技术的上述不足，提供活性红4在作为定量分析壳聚糖的探 针中的应用。[000引本专利技术的另一个目的是提供一种W活性红4为探针的定量分析壳聚糖的方法。 本专利技术的再一个目的是提供。 为了实现上述目的，本专利技术是通过W下方案予W实现的： 本专利技术首先研究了弱酸环境下活性红4与壳聚糖缔合后的光谱特征，及其在壳聚糖定 量分析中的应用。结果表明在弱酸性B-R缓冲体系中，活性红4与壳聚糖的离子缔合物于λ= 342nm处产生强烈的共振瑞利散射特征峰，共振瑞利散射强度与壳聚糖浓度C呈良好线性关 系，在0.050 ~6.00yg/mL 的浓度范围内，线性方程为：ΔΙ = 682.31C+ 114.95(c，yg/mL)， R2=0.9991，检测限0.03化g/mL。据此，本专利技术要求保护活性红4在作为定量分析壳聚糖的探 针中的应用。 另外，本专利技术还保护一种W活性红4为探针的定量分析壳聚糖的方法。 -种定量分析壳聚糖的共振瑞利散射法，包括W下步骤： 标准曲线的绘制:配置η个成梯度浓度的壳聚糖溶液和1个空白试剂，向η个成梯度浓度 的壳聚糖溶液和1个空白试剂中分别加入2倍体积的B-R缓冲溶液，然后再分别加入等体积 的活性红4溶液，混合均匀后得到稀释后的成浓度梯度的壳聚糖待测溶液，静置，检测壳聚 糖待测溶液的共振瑞利散射强度，具体为Κλθχ=λθπι进行同步扫描，记录RRS光谱，并于 342nm处分别测量离子缔合物的Irr沸试剂空白的1〇,绘制标准曲线，进一步得线性方程：Δ I = 682.31C+ 114.95(c，yg/mL) 式中 Δ I = Irrs-Io; 样品检测：向经过初步处理后的待测样品的上清液中，加入2倍体积的B-R缓冲溶液，然 后再加入等体积的活性红4溶液，混合均匀后静置，检测共振瑞利散射强度，由上述线性方 程计算出待测样品中壳聚糖的浓度。 优选地，所述静置的时间为120分钟W内。 优选地，所述棘性红4溶液的浓度化.00乂1〇-4111〇1/1，8-1?缓冲溶液的抑为5.5。 优选地，待测样品初步处理的步骤如下:将待测样品用0.5mol/L的醋酸溶液溶解， 待完全溶解后离屯、，得上清液，上清液稀释后用于巧光巧灭检测。 更优选地，，包括W下步骤： 标准曲线的绘制:在一系列10.OOmL的比色管中，按先后顺序分别加入ImL浓度分别为 0.5、1、3、5、10、20、30、40、50、60yg/mL的壳聚糖溶液，P册.50的B-R缓冲液缓冲液2. OOmL， 1.00 X l(T4mol/L活性红4操作液1 .OOmL，W蒸馈水稀释至刻度线，摇匀得到浓度分别为 0.05、0.10、0.30、0. 50、1.00、2. 00、3.00、4, 00、5.00、6.00yg/mL的壳聚糖待测溶液，静 置15~120分钟，WAex=Aem进行同步扫描，记录RRS光谱，并于34化m处分别测量离子缔合 物的Irrs和试剂空白的1〇,绘制标准曲线，进一步得线性方程：ΔΙ = 682.31C+ 114.95(c，y g/mL) 式中 Δ I = Irrs-Io; 样品检测：将〇.4g待测样品用0.5mol/L的醋酸溶液溶解，定容至lOOmL，待完全溶解后 离屯、，取2.5mL上清液，并定容至lOOmL，作为样品操作液，取1血样品操作液，加入2mL的抑为 5.5的B-R缓冲溶液，再加入1血的1.00 X l〇-4mol/L活性红4溶液，用水定容至10血，混合均匀 后，静置15~120分钟，检测共振瑞利散射强度，由线性方程计算出待测样品中壳聚糖的浓 度。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果： 本专利技术首次研究了弱酸环境下活性红4与壳聚糖缔合后的光谱特征，及其在壳聚糖定 量分析中的应用。研究结果显示，在弱酸性B-R缓冲体系中，活性红4与壳聚糖的离子缔合物 于λ=342ηπι处产生强烈的共振瑞利散射特征峰，共振瑞利散射强度与壳聚糖浓度C呈良好线 性关系，在0.050~6.00yg/mL的浓度范围内，线性方程为：ΔΙ = 682.31C+ 114.95(c，yg/ mL)，R2=0.9991，检测限0.03化g/mL。据此本专利技术利用壳聚糖与活性红4的结合，建立了分析 壳聚糖的共振瑞利散射，该方法具有操作简单，快速，准确，灵敏度高等特点。【附图说明】 图1为紫外吸收光谱、巧光光谱W及共振瑞利散射光谱。 图2为不同浓度壳聚糖的共振瑞利散射图谱；1.壳聚糖（2.Oyg /mL);2.活性红4 (1.0Xl〇-5mol/L); 3~7.活性红4 (1.0Xl〇-5mol/L)-壳聚糖（1.0，2.0，3.0，4.0， 5.化g /mL)复合物。[001引图3为活性红浓度的影响。 图4为缓冲溶液用量的影响。 图5为低、中、高分子量壳聚糖的标准曲线W及模拟样品曲线；（)低分子量；（?) 中分子量;（▲)高分子量;（▼)中分子量模拟样品。【具体实施方式】 下面结合说明书附图和具体实施例对本专利技术作出进一步地详细阐述，所述实施例 只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特 殊说明，均为常规方法;所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂 和材料。 壳聚糖（CTS)标准（20°C时，1%溶解在1%醋酸溶液中）：低分子量为< 200 mPa. S;中分子量为200~400mPa. S;高分子量为400~lOOOmPa. S。壳聚糖(CTS)标准溶液:配 置方法为准确称取0.0400g壳聚糖溶于0.5mol/L醋酸溶液中，于容量瓶定容至lOOmL，得到 浓度为400.化g/mL的标准胆备液;吸取储备液2.50mL于100 mL的容量瓶中，W水定容到刻 度，得到10.0化g/mL的壳聚糖标准溶液，现配现用。 活性红4操作液（1.00 X l〇-4mol/L):精密称取0.0250g活性红4(Sigma公司）染料， 用水溶解，于250mL容量瓶中定容，摇匀，备用。 Britton-Robinson(B-R)缓冲溶液：由0.04mol/L 混合酸与0.2mol/L NaOH溶液按不同比例配制而成。 实施例1 一、光谱分析:在lOmL的比色管中，加入本文档来自技高网...
【技术保护点】
活性红4在作为定量分析壳聚糖的探针中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：白研，苏政权，张伟爱，马彩娟，李建强，
申请(专利权)人：广东药学院，
类型：发明
国别省市：广东;44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。