一种右归丸中多种成分含量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种右归丸中多种成分含量的检测方法。所述检测方法包括如下步骤：1)利用甲醇超声提取右归丸，然后进行滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液；2)向所述供试品溶液中加入内标溶液，作为待测样品；3)采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱检测所述待测样品，即得到右归丸中下述任一种成分的含量。本发明专利技术建立的LC-ESI-MS/MS(high-performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry)检测方法具有灵敏度高和专属性强的特点，并对20批不同来源的市售右归丸成药中的16种成分进行了定量测定，覆盖范围广，以期建立系统、全面的右归丸质量评定方法。

【技术实现步骤摘要】
一种右归丸中多种成分含量的检测方法
本专利技术涉及一种右归丸中多种成分含量的检测方法，属于成分检测领域。
技术介绍
右归丸出自《景岳全书》，其组成和制备方法为“大怀熟地八两，山药(炒)四两，山茱萸(微炒)三两，枸杞(微炒)四两，鹿角胶(炒珠)四两，菟丝子(制)四两，杜仲(姜汤炒)四两，当归三两(便溏勿用)，肉桂二两(渐可加至四两)，制附子二两(渐可加至五六两)。上先将熟地蒸烂杵膏，加炼蜜为丸，如梧桐子大”。右归丸被后世广泛应用临床治疗肾阳虚的病证，并具有确切疗效。目前对右归丸化学成分报道较少，杜丽霞等(杜丽霞，何文智，刘晓阳，王智民，任艳玲.左_右归丸及其拆方中马钱苷的变化规律.中国实验方剂学杂志，2014，20(21)：56-59)采用HPLC法测定了右归丸中马钱苷的含量，为右归丸的质量控制提供了标准；刘加宝(刘加宝.HPLC法测定右归丸中桂皮醛的含量.黑龙江科学，2014，5(8)：15-16)通过HPLC法建立了快速测定右归丸中桂皮醛含量的方法；王丽双(王丽双.中药复方左归丸、右归丸和济生肾气丸的鉴别和质量评价研究：[硕士学位论文]，山东大学，2011年)建立了红外指纹图谱、HPLC指纹图谱鉴定方法，对右归丸的质量进行评价。但以上研究仅选取了右归丸中一个活性成分测定或仅进行定性分析，覆盖范围相对局限，右归丸中其他化学成分尚不清楚，应用于右归丸的质量评价难免相对片面。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种右归丸中多种成分含量的检测方法。本专利技术所提供的检测方法，包括如下步骤：1)利用甲醇超声提取右归丸，然后进行滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液；2)向所述供试品溶液中加入内标溶液，作为待测样品；3)采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱检测所述待测样品，即得到右归丸中下述任一种成分的含量：a)新乌头原碱、b)山茱萸新苷、c)地黄苷A、d)附子灵、e)宋果灵、f)金丝桃苷、g)苯甲酰次乌头原碱、h)松果菊苷、i)苯甲酰乌头原碱、j)地黄苷D、k)苯甲酰中乌头原碱、l)尼奥灵、m)马钱苷、n)多根乌头碱、o)獐芽菜苷和p)莫诺苷。上述的检测方法中，步骤1)中，过滤时得到的前几滴滤液作为初滤液，常弃去，取0.1～0.2mL即可，后续所得滤液为续滤液，用于测定。上述的检测方法中，步骤1)中，所述甲醇的用量可为：0.1g所述右归丸需要添加1～5mL甲醇。上述的检测方法中，步骤1)中，所述超声提取的频率可为20～80KHz，具体可为45KHz，所述超声提取的时间可为30～60min，具体可为30min；所述滤膜可为尼龙66膜，所述滤膜的孔径可为0.22μm或0.45μm。上述的检测方法中，步骤2)中，所述内标溶液为丁螺环酮的甲醇水溶液；所述丁螺环酮的用量为：1～5ng/mL所述待测样品。上述的检测方法中，步骤3)中，所述高效液相色谱-电喷雾串联质谱检测方法中的色谱条件如下：流动相A：体积分数为0.05％～0.2％的甲酸的乙腈溶液，具体可为0.1％；流动相B：体积分数为0.05％～0.2％的甲酸的水溶液，具体可为0.1％；色谱柱：AgilentEclipsePlus-C18色谱柱，柱长为100mm、柱径为2.1mm和填料粒径为3.5μm；柱温：20～30℃，具体可为25℃；流速：0.45mL/min；进样体积：10或20μL；每个样品的运行时间：12.0min；洗脱梯度如下：0-1.5min：流动相A体积分数为98％，流动相B体积分数为2％；1.5-4min：流动相A体积分数从98％降至55％，流动相B体积分数从2％升至45％；4-8min：流动相A体积分数从55％降至15％，流动相B体积分数从45％升至85％；8-9min：流动相A体积分数为15％，流动相B体积分数为85％；9-9.01min：流动相A体积分数从15％升至98％，流动相B体积分数从85％降至2％；9-12min：流动相A体积分数为98％，流动相B体积分数为2％。所述高效液相色谱-电喷雾串联质谱检测步骤中的质谱条件如下：离子源：电喷雾离子化源；质谱工作模式：正离子扫描的MRM检测模式；气帘气、雾化气和涡流加热气均使用氮气，其设定值分别为20～30psi、50～60psi和50～60psi，具体可为20psi、55psi和55psi；离子源温度为350～500℃，具体可为500℃；离子源喷射电压为4500～5500V，具体可为5500V。所述右归丸中的16种化合物按编号1-编号16依次为新乌头原碱、山茱萸新苷、地黄苷A、附子灵、宋果灵、金丝桃苷、苯甲酰次乌头原碱、松果菊苷、苯甲酰乌头原碱、地黄苷D、苯甲酰中乌头原碱、尼奥灵、马钱苷、多根乌头碱、獐芽菜苷和莫诺苷，此16种化合物均具有很强的正离子信号。其中，编号为1的新乌头原碱的质谱工作参数如下：母离子(m/z)为486.2；产品离子定量值(m/z)为436.2；产品离子定性值(m/z)为454.2448，404.2079；去簇电压为250V；碰撞电压为44eV；碰撞室射出电压为25V。编号为2的山茱萸新苷的质谱工作参数如下：母离子(m/z)为565.1；产品离子定量值(m/z)为163.3；产品离子定性值(m/z)为403.1011，255.0845；去簇电压为250V；碰撞电压为39eV；碰撞室射出电压为12V。编号为3的地黄苷A的质谱工作参数如下：母离子(m/z)为547.1；产品离子定量值(m/z)为203.1；产品离子定性值(m/z)为385.1115，203.0532；去簇电压为151V；碰撞电压为44eV；碰撞室射出电压为15V。编号为4的附子灵的质谱工作参数如下：母离子(m/z)为454.1；产品离子定量值(m/z)为436.2；产品离子定性值(m/z)为436.2707，418.2600；去簇电压为89V；碰撞电压为41eV；碰撞室射出电压为25V。编号为5的宋果灵的质谱工作参数如下：母离子(m/z)为358.2；产品离子定量值(m/z)为340.2；产品离子定性值(m/z)为340.2280；去簇电压为98V；碰撞电压为35eV；碰撞室射出电压为20V。编号为6的金丝桃苷的质谱工作参数如下：母离子(m/z)为487.1；产品离子定量值(m/z)为185.1；产品离子定性值(m/z)为325.0329，185.0425；去簇电压为100V；碰撞电压为33eV；碰撞室射出电压为10V。编号为7的苯甲酰次乌头原碱的质谱工作参数如下：母离子(m/z)为574.2；产品离子定量值(m/z)为542.2；产品离子定性值(m/z)为542.2766，510.2499；去簇电压为150V；碰撞电压为41eV；碰撞室射出电压为15V。编号为8的松果菊苷的质谱工作参数如下：母离子(m/z)为809.2；产品离子定量值(m/z)为663.2；产品离子定性值(m/z)为663.1917，501.1384；去簇电压为50V；碰撞电压为62eV；碰撞室射出电压为15V。编号为9的苯甲酰乌头原碱的质谱工作参数如下：母离子(m/z)为604.3；产品离子定量值(m/z)为572.3；产品离子定性值(m/z)为572.2868，554.2764；去簇电压为150V；碰撞电压为49eV；碰撞室射出电压为15本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种右归丸中多种成分含量的检测方法，包括如下步骤：1)利用甲醇超声提取右归丸，然后进行滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液；2)向所述供试品溶液中加入内标溶液，作为待测样品；3)采用高效液相色谱‑电喷雾串联质谱检测所述待测样品，即得到右归丸中下述任一种成分的含量：a)新乌头原碱、b)山茱萸新苷、c)地黄苷A、d)附子灵、e)宋果灵、f)金丝桃苷、g)苯甲酰次乌头原碱、h)松果菊苷、i)苯甲酰乌头原碱、j)地黄苷D、k)苯甲酰中乌头原碱、l)尼奥灵、m)马钱苷、n)多根乌头碱、o)獐芽菜苷和p)莫诺苷。

【技术特征摘要】
1.一种右归丸中多种成分含量的检测方法，包括如下步骤：1)利用甲醇超声提取右归丸，然后进行滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液；所述甲醇的用量为：0.1g所述右归丸需要添加1～5mL甲醇；所述超声提取的频率为20～80KHz，所述超声提取的时间为30～60min；所述滤膜为尼龙66膜，所述滤膜的孔径为0.22μm或0.45μm；2)向所述供试品溶液中加入内标溶液，作为待测样品；所述内标溶液为丁螺环酮的甲醇水溶液；所述丁螺环酮的用量为：1～5ng/mL所述待测样品；3)采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱检测所述待测样品，即同时得到右归丸中下述16种成分的含量：a)新乌头原碱、b)山茱萸新苷、c)地黄苷A、d)附子灵、e)宋果灵、f)金丝桃苷、g)苯甲酰次乌头原碱、h)松果菊苷、i)苯甲酰乌头原碱、j)地黄苷D、k)苯甲酰中乌头原碱、l)尼奥灵、m)马钱苷、n)多根乌头碱、o)獐芽菜苷和p)莫诺苷；所述高效液相色谱-电喷雾串联质谱检测步骤中的色谱条件如下：流动相A：体积分数为0.05％～0.2％的甲酸的乙腈溶液；流动相B：体积分数为0.05％～0.2％的甲酸的水溶液；色谱柱：AgilentEclipsePlus-C18色谱柱，柱长为100mm、柱径为2.1mm和填料粒径为3.5μm；柱温：20～30℃；流速：0.45mL/min；进样体积：10或20μL；每个样品的运行时间：12.0min；洗脱梯度如下：0-1.5min：流动相A体积分数为98％，流动相B体积分数为2％；1.5-4min：流动相A体积分数从98％降至55％，流动相B体积分数从2％升至45％；4-8min：流动相A体积分数从55％降至15％，流动相B体积分数从45％升至85％；8-9min：流动相A体积分数为15％，流动相B体积分数为85％；9-9.01min：流动相A体积分数从15％升至98％，流动相B体积分数从85％降至2％；9-12min：流动相A体积分数为98％，流动相B体积分数为2％；所述高效液相色谱-电喷雾串联质谱检测步骤中的质谱条件如下：离子源：电喷雾离子化源；质谱工作模式：正离子扫描的MRM检测模式；气帘气、雾化气和涡流加热气均使用氮气，其设定值分别为20～30psi、50～60psi和50～60psi；离子源温度为350～500℃；离子源喷射电压为4500～5500V。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤3)中，所述高效液相色谱-电喷雾串联质谱检测步骤中，各成分的质谱条件如下：1)所述新乌头原碱的质谱工作参数如下：母离子(m/z)为486.2；产品离子定量值(m/z)为436.2；产品离子定性值(m/z)为454.2448，404.2079；去簇电压为250V；碰撞电压为44eV；碰撞室射出电压为25V；2)所述山茱萸新苷的质谱工作参数如下：母离子(m/z)为565.1；产品离子定量值(m/z)为163.3；产品离子定性值(m/z)为403.1011，255.0845；去簇电压为250V；碰撞电压为39eV；碰撞室射出电压为12V；3)所述地黄苷A的质谱工作参数如下：母离子(m/z)为547.1；产品离子定量值(m/z)为203.1；产品离子定性值(m/z)为385.1115，203.0532；去簇电压为151V；碰撞电压为44eV；碰撞室射出电压为15V；4)所述附子灵的质谱工作参数如下：母离子(m/z)为454.1；产品离子定量值(m/z)为...

【专利技术属性】
技术研发人员：王蕾，刘浩龙，仇峰，赵晖，邹海艳，杨鑫伟，
申请(专利权)人：首都医科大学，
类型：发明
国别省市：北京;11