本发明专利技术提供一种5’-核苷酸酶检测试剂盒及其制备方法，属于体外诊断试剂领域。解决现有的5’-核苷酸酶检测试剂盒精密度和稳定性低的问题。所述的试剂盒由试剂R1和试剂R2组成。本发明专利技术还提供一种5’-核苷酸酶检测试剂盒的制备方法。所述试剂R1中含有AES和TritonX-305组成的复合稳定剂，在提高试剂稳定性的同时能够提高试剂的分散度，减小两次空白定标之间的吸光度差异，提高试剂盒精密度；R1中含有A90可有效防止磷酸镁沉淀的产生，替换了价格昂贵的18-冠醚-6，既提高了试剂的稳定性、降低了试剂空白吸光度变化率，又极大地降低了成本；试剂R2中添加甘氨酸和EDTA·2K来提高试剂盒检测灵敏度和精密度，同时甘氨酸的加入可以降低试剂空白吸光度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及体外诊断试剂领域，具体设及一种5'-核巧酸酶检测试剂盒及其制备 方法。
技术介绍
5'-核巧酸酶（5'-Nucleotidase, 5'-NT)测定主要用于肝胆系统疾病的诊断和骨 骼疾病的鉴别诊断。血清5'-NT活性升高主要见于肝胆系统疾病，如阻塞性黄痘、肝癌、肝炎 等，其活性增高可达2~6倍，且与病情严重程度呈正相关，且其活性变化与ALP-致。但骨骼 系统疾病，如肿瘤转移、崎形性骨炎、何僕病、甲状旁腺功能亢进等，通常ALP活性升高，而 5 '-NT正常。因此ALP和5 '-NT同时测定有助于肝胆和骨骼系统疾病的鉴别诊断。[000引目前，临床上对5 ' -NT的测定方法多采用酶法，该方法简便快捷、结果相对可靠，对 肝胆疾患的诊断具有较高应用价值。但该方法在测定过程中，精密度不高，尤其是低值血清 样本，而且还存在热稳定性差W及冷藏过程中嚷岭核巧憐酸化酶和黄嚷岭氧化酶活性下降 快的问题，导致酶用量大，成本提高，另外ALP对5 ' -IMP的水解不能完全消除，从而造成测定 灵敏度低，重复性不佳，给临床进一步推广应用此方法带来困难，市场上多采用β-甘油憐酸 钢来降低ALP对5' -IMP的水解(PNP-XT0-P0D偶联单一试剂匀相速率法测定血清5 ' -NT;出 处：中国卫生检验杂志2010年1月第20卷第1期;作者:潘利琴），一方面效果不好，另一方面 成本明显增加，限制了临床应用的推广；另外，市场上常用18-冠酸-6来避免游离憐酸根与 儀离子发生沉淀导致的稳定性差，但此物料纯度低时稳定效果差，且会增加试剂的空白吸 光度变化率，而纯度高效果好的价格昂贵，极大地增加了成本，限制了临床的广泛应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有的5'-核巧酸酶检测试剂盒精密度和稳定性低的问 题，而提供一种5 核巧酸酶检测试剂盒及其制备方法。 本专利技术首先提供一种5'-核巧酸酶检测试剂盒，所述的试剂盒由试剂R1和试剂R2 组成： 试剂 R1: 缓冲液 I 100-300mrnoi/l： 憐酸二氨钟 15-40mmol/:L; 八90 0. 1-lOml/L： EDTA * 涨 1-6卿1〇1 凡； MgCU · 61U) 3-40mmol/L； 4-氨基安替比赫 1 -4mmol凡； Proclin300 0. 01-(). 3ml/L； 八 K O.S-lOg/L； TritonX-305 0. l-5ml/L； 曝吟核昔麟酸化酶 0.1 -IKL'/I; 黄嘿吟氧化酶 0. 3-3化几； 过氧化物酶 2-10KL7L;[000引试剂R2: 缓冲液 Π 100-300nimol/Ls 寸氨酸 10-iOOmmol/L; 抓ΤΑ · 2K l-6mmol/L; TOOS l-20mmol/L; Proc 1 i n：-K)0 0. 01-0. 3ml/L； 百'-IMP 5-100inmol/L：〇 优选的是，所述的缓冲液巧日缓冲液Π 相同，选自PI阳s-K〇H、K出PO4-KOH或皿阳s- K0H中的一种。 优选的是，所述的缓冲液I和缓冲液Π 的抑为7.0~7.7。 本专利技术还提供一种5 核巧酸酶检测试剂盒的制备方法，包括： 步骤一:试剂R1的制备： 1、在反应容器中先加入缓冲液I，揽拌溶解，然后依次加入憐酸二氨钟、m)TA · 2K、 4-氨基安替比林、Proclin300和AES揽拌，调节溶液pH值调至7.0-7.7，得到混合溶液； 2、在步骤1得到的混合溶液中依次加入A90、MgC12 · 6肥0、化itonX-305、嚷岭核巧 憐酸化酶、黄嚷岭氧化酶和过氧化物酶，揽拌均匀，得到试剂R1; 步骤二:试剂R2的制备： 1、在反应容器中先加入缓冲液Π ，揽拌溶解，然后加入甘氨酸和邸TA · 2K揽拌，调 节溶液pH值至7.0-7.7，得到混合溶液；[001引 2、在步骤1得到的混合溶液中依次加入TOOS、Procl in300和5 ' -IMP揽拌均匀，得到 试剂R2。优选的是，所述的试剂R1和R2的制备中，用K0H调节溶液抑值。 优选的是，所述的K0H的浓度为4M。 本专利技术的有益效果 本专利技术首先提供一种5'-核巧酸酶检测试剂盒，所述的试剂盒由试剂R1和试剂R2 组成，与现有技术相对比，本专利技术所述试剂R1中含有AES和化itonX-305组成的复合稳定剂， 在提高试剂稳定性的同时能够提高试剂的分散度，减小两次空白定标之间的吸光度差异， 提高试剂盒精密度;R1中含有A90可有效防止憐酸儀沉淀的产生，替换了价格昂贵的18-冠 酸-6,既提高了试剂的稳定性、降低了试剂空白吸光度变化率，又极大地降低了成本，增加 了临床广泛应用的可能性;试剂R2中添加甘氨酸和抓TA · 2K来提高试剂盒检测灵敏度和精 密度，同时甘氨酸的加入可W降低试剂空白吸光度。 本专利技术还提供一种5'-核巧酸酶检测试剂盒的制备方法，该制备方法简单、操作简 便、原料易得，制备得到的试剂盒具有较高的灵敏度、精密度和稳定性。【具体实施方式】 本专利技术首先提供一种5'-核巧酸酶检测试剂盒，所述的试剂盒由试剂R1和试剂R2 组成：[002引试剂R1: 缓冲液 I 100-30(-化imol./L; 憐酸二氨辟 巧-4Oim0l/L; 八90 0. 1-lOml/L； EDTA · 2K l-6mmol/L：· MgCU · 61W) 3-40ramol/L; 4-氨基安替化棘 1 -4:mmo 1 /L; Pr〇(； 1 i n300 0. 0!-〇. 3nil/L； AhS 0.δ-lOg/L； TritonX-3腿 0. 噪岭核昔鱗酸化酶 0. 1-1化几； 黄囑岭氧化酶 0. 3-:化1;几； 过氧化物酶 2-10抓化；试剂 R2: 缓冲浪 II 100-:W0nimoi/L; 寸氨酸 lO-lOOmmol/L; 孤ΤΑ · 2Κ l-6mmol/L；[002引 TOOS l-20mraol/L； Proclin300 日.01-0. 3讯1/1_.; η' -HviP 5-100画ο 1/1。 按照本专利技术，所述的缓冲液I和缓冲液Π 相同，保证了试剂反应的灵敏度，选自 PIPES-K0H、K此Ρ04-Κ0Η或肥阳S-K0H中的一种，所述的缓冲液巧日缓冲液Π 的pH优选为7.0~ 7.7。所述的缓冲液I和缓冲液Π 主要作用是保证配制酶法试剂盒的过程中各组分的pH值保 持在一定范围内，使各组分的酸碱度保持稳定，不会对其他物质的性能产生影响，同时又能 为酶促反应的进行提供适宜的抑值及适宜的离子强度，从而保证试剂盒整体性能的稳定， 使测试结果更准确。 按照本专利技术，所述试剂R1中含有AES和化itonX-305组成的复合稳定剂，在提高试 剂稳定性的同时能够提高试剂的分散度，减小两次空白定标之间的吸光度差异，提高试剂 盒精密度。 按照本专利技术，所述试剂R1中含有反应所必须的憐酸根离子和儀离子，但运两种离 子能产生憐酸儀沉淀，使试剂盒在储存过程中出现沉淀而导致试剂盒失效，R1中添加 A90可 有效防止憐酸儀沉淀的产生，使试剂盒在储存过程中稳定，替换了价格昂贵的18-冠酸-6， 既提高了试剂的稳定性、降低了试剂空白吸光度变化率，又极大地降低了成本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种5’‑核苷酸酶检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒由试剂R1和试剂R2组成：试剂R1:试剂R2：
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：苏恩本，徐李鹏，刘玲，张晓杨，
申请(专利权)人：吉林基蛋生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22
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