用于快速检测苯并(a)芘的纳米免疫传感器的制备方法及其检测方法技术

本发明专利技术属于食品安全快速检测技术领域，具体涉及用于苯并(a)芘快速检测的纳米免疫传感器的制备方法及其检测方法，包括：以玻碳电极为基础电极，采用聚酰胺-胺树枝状大分子结合聚二烯丙基二甲基氯化铵功能化的石墨烯修饰玻碳电极，然后滴涂纳米金溶液，纳米金经静电吸附作用固定于修饰电极上，再经戊二醛偶联固定多环芳烃抗体制备成纳米免疫传感器；将该纳米免疫传感器用于食品中苯并(a)芘的检测，其结果与国标方法结果一致，但该方法灵敏度高、精确度高、检测时间短，是一种简便快速、精确度较高的苯并(a)芘的检测方法，具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及一种用于苯并(a)巧快速检测的纳米免疫传感器的制备方法，W及利 用该纳米免疫传感器检测肉制品中的苯并(a)巧的检测方法。
技术介绍
苯并(a)巧是一种由4个苯环构成的多环芳控，常溫下为无色至淡黄色针状晶体， 性质稳定。在煎烤、烧烤、油炸动物性肉制品的过程中，食品会产生苯并(a)巧，人和动物摄 入苯并(a)巧超出限量的肉制品后会导致肿瘤和癌变，对健康造成潜在的威胁。目前，由食 品污染引起的疾病是引起人们广泛关注的食品安全问题之一，许多国家已将苯并(a)巧为 食品有害物质监测的重要内容之一，如德国限定肉制品中苯并(a)巧的残留量为化g/kg，我 国国标限定肉制品中苯并(a)巧的残留量应在化g/kg W下。已报道的苯并(a)巧检测方法有 液相色谱法、气相-质谱联用法、薄层层析法等，但色谱法、层析法等检测方法存在操作繁 琐、耗时长、结果分辨性差等缺点。因此，目前许多工作研究者致力于开发更为快速、准确的 苯并(a)巧检测方法，W提高食品中苯并(a)巧的检测效率，同时要避免出现假阴性或假阳 性的现象。
技术实现思路
本专利技术为解决上述技术的不足，提供一种用于苯并(a)巧快速检测的纳米免疫传 感器的制备方法，还提供一种利用该纳米免疫传感器检测食品中苯并(a)巧的方法，本专利技术 既具备更加灵敏、快速、易微型化、便于携带和现场检测的优势，同时也具备免疫反应抗原-抗体结合的特异性。 为解决W上问题，本专利技术采用W下技术方案： 本专利技术一种用于苯并(a)巧快速检测的纳米免疫传感器的制备方法，其特征是，W 玻碳电极为基础电极，采用聚酷胺-胺树枝状大分子结合聚二締丙基二甲基氯化锭功能化 的石墨締修饰玻碳电极，然后滴涂纳米金溶液，纳米金经静电吸附作用固定于修饰电极上， 再经戊二醒偶联固定多环芳控抗体制备成纳米免疫传感器。 所述的用于苯并(a)巧快速检测的纳米免疫传感器的制备方法，包括W下步骤： a.电极预处理 将玻碳电极用粒径为0.05皿的氧化侣抛光粉抛光打磨至电极表面呈镜面，然后用 蒸馈水冲洗干净，再依次置于体积分数为50%的硝酸、丙酬、去离子水中超声清洗2min~ 6min，氮气吹干，备用； b.聚酷胺-胺-P孤A功能化石墨締复合物的制备 准确称取0.2g石墨締加入到lOmL聚二締丙基二甲基氯化锭水溶液(PDDA，体积分 数为0.25 % )中，超声处理25min~35min，水洗Ξ次去除过量的石墨締，制得PDDA功能化的 石墨締，取O.Olg P孤A功能化的石墨締加入到lOmL N，N-二甲基甲酯胺中，使其浓度为Img/ mL，超声处理lOmin~20min，得到均匀一致的P孤A功能化石墨締的N，N-二甲基甲酯胺悬浮 液，备用；[00川准确称取0.02g聚酷胺-胺溶于10m巧醇中，使其浓度为2mg/mL，超声处理15min~ 25min，得到均匀透明的聚酷胺-胺的甲醇溶液，然后将聚酷胺-胺的甲醇溶液与PDDA功能化 石墨締的N，N-二甲基甲酯胺悬浮液按1:1混合均匀，超声处理30min~40min，制得聚酷胺-胺-P孤A功能化石墨締复合物；[001^ C.纳米金的制备 准确量取50mL O.lmg/血的氯金酸溶液置于烧杯中，用玻璃棒揽拌下加热至沸腾， 迅速加入2.5mL质量分数为1 %的巧樣酸钢溶液，持续揽拌至溶液颜色变为酒红色，得到纳 米金溶液；（注：制备纳米金使用的玻璃器皿在使用前需经铭酸洗液浸泡2地，并冲洗，烘干 处理）。 d.纳米免疫传感器的制备 将步骤a中得到的玻碳电极应用Ξ电极系统，即W玻碳电极为工作电极、Ag/AgCl 电极为参比电极、销丝电极为辅助电极，在-0.2V~+0.6V的电位区间，采用LK98BII型微机 电化学分析系统W50mV · 的扫描速度在新配制的0.05mol/L硫酸溶液中进行循环伏安扫 描10圈，对玻碳电极表面进行活化处理。冲洗玻碳电极后，用移液枪移取3~化L步骤b得到 的聚酷胺-胺-PDDA功能化石墨締复合物滴涂到玻碳电极表面，于室溫惊干，再移取2~化L 纳米金溶液滴涂到修饰的电极表面，于室溫惊干，然后在修饰电极表面滴涂3~化L质量分 数为0.5%的戊二醒溶液活化修饰的电极表面，于4°C条件下活化25~35min，然后用pH为 7.4的0.2111〇1/1憐酸盐缓冲液冲洗电极，再滴涂3~化1^多环芳控抗体，并于4°0条件下固定 2h，再滴涂3~扣L质量分数为2 %牛血清白蛋白溶液于4°C下封闭化，用抑为7.4的0.2mol/L 憐酸盐缓冲液反复冲洗干净，得到苯并(a)巧纳米免疫传感器，于4°C条件下保存备用。 优选的，所述步骤b中聚酷胺-胺-PDDA功能化石墨締复合物的制备的具体步骤内 容为： 准确称取0.2g石墨締加入到lOmL聚二締丙基二甲基氯化锭水溶液(PDDA，体积分 数为0.25% )中，超声处理30min，水洗Ξ次去除过量的石墨締，制得PDDA功能化的石墨締， 取O.Olg P孤A功能化的石墨締加入到lOmL N，N-二甲基甲酯胺中，使其浓度为Img/mL，超声 处理15min，得到均匀一致的P孤A功能化石墨締的N，N-二甲基甲酯胺悬浮液，备用； 准确称取0.0?聚酷胺-胺溶于lOmL甲醇中，使其浓度为2mg/mL，超声处理20min， 得到均匀透明的聚酷胺-胺的甲醇溶液，然后将聚酷胺-胺的甲醇溶液与PDDA功能化石墨締 的N，N-二甲基甲酯胺悬浮液按1:1混合均匀，超声处理35min，制得聚酷胺-胺-PDDA功能化 石墨締复合物。 优选的，所述步骤d中纳米免疫传感器的制备的具体步骤内容为： 将步骤a中得到的玻碳电极应用Ξ电极系统，即W玻碳电极为工作电极、Ag/AgCl 电极为参比电极、销丝电极为辅助电极，在-0.2V~+0.6V的电位区间，采用LK98BII型微机 电化学分析系统W50mV · 的扫描速度在新配制的0.05mol/L硫酸溶液中进行循环伏安扫 描10圈，对玻碳电极表面进行活化处理。冲洗玻碳电极后，用移液枪移取扣L步骤b得到的聚 酷胺-胺-P孤A功能化石墨締复合物滴涂到玻碳电极表面，于室溫惊干，再移取化L纳米金溶 液滴涂到修饰的电极表面，于室溫惊干，然后在修饰电极表面滴涂化L质量分数为0.5 %的 戊二醒溶液活化修饰的电极表面，于4°C条件下活化30min，然后用抑为7.4的ο. 2mol/L憐酸 盐缓冲液冲洗电极，再滴涂化L多环芳控抗体，并于4°C条件下固定化，再滴涂化L质量分数 为2%牛血清白蛋白溶液于4°C下封闭化，用抑为7.4的0.2mol/L憐酸盐缓冲液反复冲洗干 净，得到苯并(a)巧纳米免疫传感器，于4°C条件下保存备用。 使用所述的用于苯并(a)巧快速检测的纳米免疫传感器的检测方法，包括W下具 体步骤： a.标准曲线 取苯并(a)巧标准品加入到lOmL二甲基亚讽中，再用抑为7.4的憐酸盐缓冲溶液稀 释至不同浓度梯度，在苯并(a)巧纳米免疫传感器上涂上各个梯度的上述苯并(a)巧标准品 溶液，室溫下解育15~25min，WAg/AgCl电极为参比电极、销丝(片）电极为辅助电极，苯并 (a)巧纳米免疫传感器为工作电极，组成Ξ电极测试系统，在l.Ommol/L K3 + 0.1mol/L KCl+0.2mol/L憐酸盐缓冲本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于苯并(a)芘快速检测的纳米免疫传感器的制备方法，其特征是，以玻碳电极为基础电极，采用聚酰胺‑胺树枝状大分子结合聚二烯丙基二甲基氯化铵功能化的石墨烯修饰玻碳电极，然后滴涂纳米金溶液，纳米金经静电吸附作用固定于修饰电极上，再经戊二醛偶联固定多环芳烃抗体制备成纳米免疫传感器。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李书国，王瑞鑫，冯亚净，张云焕，
申请(专利权)人：河北科技大学，
类型：发明
国别省市：河北;13