一种桑枝叶活性部位的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种桑枝叶活性部位的制备方法及其应用。所述制备方法包括溶剂提取桑枝叶总浸膏、醇沉去除多糖、鞣质等成分，大孔树脂吸附、分离纯化、ODS柱精制等步骤。经实验证，本发明专利技术制备的桑枝叶提取物SangA对肿瘤干细胞表现出显著抑制作用，是制备抗肿瘤药物的理想成分。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种桑枝叶活性部位的制备方法及其在抗肿瘤领域的应用。
技术介绍
恶性肿瘤是威胁人类健康的重大疾病，已经成为人类死亡的第一位或第二位的原 因，是当今医学界尚未攻克的难题。肿瘤的发生是一个多因素、多步骤的病理过程，涉及到 一系列的分子变化过程，其本质表现为细胞不受控制的异常增殖，送种异常生长的能力除 了表现为肿瘤本身的持续生长之外，还表现为对邻近正常组织的侵犯及经血管、淋己管等 转移到身体其它部位的能力，90% W上由恶性肿瘤导致的死亡归咎于送种肿瘤的侵袭与转 移。 手术治疗、放射治疗及药物治疗是目前肿瘤治疗的H大主要方法，对于不适于手 术治疗及放射治疗的患者，药物治疗仍是首选，传统抗肿瘤药物的着眼点是杀灭肿瘤细胞， 虽然取得了一些积极的治疗效果，但在化疗过程中出现的耐药性及肿瘤的侵袭与转移，导 致治疗的最终失败。为什么在临床上认为已得到彻底杀灭的肿瘤细胞会出现复发和转移， 是科学界一直在不断探索的问题。肿瘤干细胞理论认为在肿瘤组织中，存在着占肿瘤细胞 总量很小的一部分细胞（0. 1%~4%左右)，称之为肿瘤干细胞，它们具有无限自我更新和产 生异质性肿瘤细胞的能力，能促使肿瘤组织的形成和无限生长，对化疗和放疗具有很强的 抗药性，是肿瘤发生发展、复发、转移及治疗耐受性的根本原因。目前临床抗肿瘤治疗，主要 杀灭的是增殖肿瘤细胞，而不能清除肿瘤干细胞，由于肿瘤干细胞的无限自我更新和分裂， 会迅速出现肿瘤的复发和转移，最终导致临床肿瘤治疗的失败。因此，根除肿瘤干细胞是治 愈肿瘤的关键。W肿瘤干细胞为祀点的药物开发具有重要意义。 目前在许多人类恶性肿瘤中，人们证实了肿瘤干细胞的存在，如乳腺癌、脑肿 瘤、宫颈癌、肝癌、肺癌、结(直）肠癌、前列腺癌、鼻咽癌等。肿瘤干细胞具有3个主要特 点：无限自我更新能力、多向分化潜能和高致瘤性，近年来，研究者们报道了一些特异性 革己向肿瘤干细胞的活性化合物，如中药青黛中活性成分說玉红，中药黎芦中的酱体生物碱 eyeIopamine，小白菊中活性成分小白菊内醋，葡萄中的活性成分白黎芦醇，西兰花中的莱 酿硫焼等。 桑枝叶为桑科桑属植物桑a化a Z.)的枝及叶子，其药用始载于《神农本草 经》，具有疏风散热，益肝通气之功效。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供。 本专利技术所采取的技术方案是： 一种桑枝叶活性部位（SangA)的制备方法，包括如下步骤： (1)桑枝叶粉碎后，W水或己醇水溶液为提取溶媒，经浸泡、煎煮、渗漉、超声或回流方 法进行提取，提取液浓缩后加入己醇沉淀多糖、躁质，收集滤液，进一步浓缩滤液得到桑枝 叶浓缩液； (2) 选择非极性或弱极性大孔树脂对上述桑枝叶浓缩液进行分离纯化；将桑枝叶浓缩 液上样到净化好的大孔树脂柱中，上样量W生药计与干树脂质量比为1 ;3~20,吸附平衡 后，用水洗脱至无色，然后用20%~40%配比范围的己醇水溶液洗脱至无色，再用50%~ 100%配比范围的己醇水溶液洗脱至无色，收集该部分洗脱液，浓缩干燥，得到SangA粗提 物； (3) SangA粗提物进一步精制；用含己腊的水溶液溶解SangA粗提物，上ODS柱分离， W 35%~100%配比范围的己腊水溶液洗脱，收集该部分洗脱液，浓缩干燥，获得SangA精制 物； W上"％"均指体积百分比。 作为优选的，所述提取溶媒的用量为桑枝叶体积的2~30倍。 作为优选的，步骤（1)所得到的桑枝叶浓缩液为0. 2~20g生药/mL。 作为优选的，步骤（2)所述非极性大孔树脂为D101、HPD100、XAD-l、H-20等，弱极 性大孔树脂为 D101B、AB-8、CAD-40、D201、H-40、H-50 或 HPD100。 作为优选的，步骤（3)所述己腊水溶液的浓度为35%~100%。 W上所述的方法制备得到的SangA粗提物和/或SangA精制物在制备抗肿瘤药 物、保健食品或抗肿瘤功能性食品中的应用。 所述抗肿瘤药物、保健食品或抗肿瘤功能性食品中还含有药学上可接受的辅料或 添加剂 所述辅料或添加剂为W下至少一种；藏糖、乳糖、糊精、淀粉、目-环糊精、居丙 基-目-环糊精、微晶纤维素、微粉硅胶、居丙基纤维素、駿甲淀粉钢、交联聚维丽、交联聚己 帰化咯焼丽、阿斯帕坦、甜菊巧、香精、甘露醇、山梨醇、硬脂酸、硬脂酸镇、丙帰酸树脂、半合 成脂肪酸脂，凡±林、液状石蜡、吐温-20、吐温-80、卵磯脂、十二烷基硫酸钢、甘油、明胶、 聚己二醇、聚维丽等。 所述抗肿瘤药物、保健食品或抗肿瘤功能性食品可W是片剂、胶囊剂、口服液、注 射剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、泡腾剂、合剂、糖浆剂、缓释剂、控释剂或祀向制剂等。 所述肿瘤为各种肿瘤包括鼻咽癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、宫颈癌、胃癌、大肠癌、卵巢 癌等。 本专利技术的有益效果是： 由本专利技术方法制备得到的SangA,经紫外分光光度法测定总黄丽重量百分含量为 30%-60%，重量为药材重量的0. 5%-5%。经系统分离后收集的各个分离条带进行称重，并进 行质谱及高效液相色谱电喷雾串联质谱分析，鉴定SangA的化学成分组成及化合物结构， 发现SangA的主要成份组成为；桑辛素 D、桑辛素 E、桑辛素 G重量百分含量约0. 1%-7% ;桑 查耳丽B重量百分含量约0. 1%-3% ;桑辛素 P、桑辛素0重量百分含量约0. 1%-4% ;桑辛素 A 重量百分含量约0. 1%-6% ;桑辛素 C、桑辛素 S重量百分含量约0. 1%-2%。 我们在研究中发现SangA在较低浓度下即能显著降低鼻咽癌、肺癌细胞中侧群细 胞比例，说明SangA具有显著的抗肿瘤干细胞活性。通过无血清悬浮培养肿瘤细胞球技术， 我们发现SangA能明显抑制肿瘤球的形成，形成的肿瘤球明显小于对照组，而且形成的肿 瘤球数量也明显减少，再次证明了 SangA具有显著的抗肿瘤干细胞活性。体内高致瘤能力 是判断肿瘤干细胞的一个重要指标，我们通过荷瘤裸鼠模型，评价了 SangA对肿瘤生长的 抑制作用，发现SangA高、中剂量组能显著抑制肿瘤的生长，但对裸鼠的体重、活动状态等 无影响，未表现出任何毒副作用。将对照组、SangA治疗组动物肿瘤剥离，制成活细胞悬液， 再次接种在二代裸鼠皮下，发现经SangA治疗组需要的成瘤时间更长，肿瘤体积也更小。说 明SangA在体内也具有显著抗肿瘤干细胞活性。通过体内外实验的研究，我们证明SangA具 有显著的抗肿瘤干细胞的作用，可作为新的作用祀点药物在抗肿瘤治疗中发挥重大作用。【附图说明】 图1 ;不同浓度SangA对鼻咽癌5-8F细胞增殖的影响； 图2 ;不同浓度SangA对鼻咽癌CNE2细胞增殖的影响； 图3 ;不同浓度SangA对宫颈癌化Ia细胞增殖的影响； 图4 ;不同浓度SangA对肺癌A549细胞增殖的影响； 图5 =SangA对CNE-2中SP细胞比例的影响； 图6 =SangA对无血清悬浮培养鼻咽癌CNE-2细胞形成肿瘤球的影响； 图7 =SangA对无血清悬浮培养鼻咽癌CNE-2细胞形成肿瘤球数量的影响； 图8 ;SangA不同剂量对荷鼻咽癌裸鼠肿瘤体积及体重的影响。【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明，但并不局限于此。如无特殊说明，W下 实施例中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种桑枝叶活性部位（SangA）的制备方法，包括如下步骤：（1）桑枝叶粉碎后，以水或乙醇水溶液为提取溶媒，经浸泡、煎煮、渗漉、超声或回流方法进行提取，提取液浓缩后加入乙醇沉淀多糖、鞣质，收集滤液，进一步浓缩滤液得到桑枝叶浓缩液；（2）选择非极性或弱极性大孔树脂对上述桑枝叶浓缩液进行分离纯化：将桑枝叶浓缩液上样到净化好的大孔树脂柱中，上样量以生药计与干树脂质量比为1：3～20，吸附平衡后，用水洗脱至无色，然后用20%～40%配比范围的乙醇水溶液洗脱至无色，再用50%～100%配比范围的乙醇水溶液洗脱至无色，收集该部分洗脱液，浓缩干燥，得到SangA粗提物；（3）SangA粗提物进一步精制：用含乙腈的水溶液溶解SangA粗提物，上ODS柱分离，以35%～100%配比范围的乙腈水溶液洗脱，收集该部分洗脱液，浓缩干燥，获得SangA精制物；以上“%”均指体积百分比。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：罗奇志，戴开金，肖广惠，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：广东;44