Ⅱ型单纯疱疹病毒突变体在治疗癌症中的用途制造技术

本发明专利技术涉及用作治疗癌症的药物的经修饰的II型单纯疱疹病毒(HSV-2)的组合物和用途。经修饰的HSV-2具有膜融合活性，包含编码具有核糖核苷酸还原酶活性但缺乏蛋白激酶活性的多肽的经修饰的/突变的ICP10多聚核苷酸。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】Μ型单纯疱疹病毒突变体在治疗癌症中的用途 相关申请的参考文献 本申请要求于2005年6月23日提交的临时申请第60/693，157号的优先权，在此通 过参考的方式将其整体并入。 对于在联邦资助的研究或开发下所做出专利技术的权利的声明 本专利技术的研发至少部分地使用了由美国政府依照ΝΙΗ基金号R01 CA106671-01提 供的资金。美国政府可以拥有本专利技术的某些权利。 专利
本专利技术涉及包括癌症治疗学在内的病毒学、癌症生物学、细胞生物学、分子生物学 和医学领域。具体地，本专利技术提供包含I CP 10基因修饰的II型单纯疱疹病毒(HSV-2)突变体 以及该HSV-2突变体在治疗恶性疾病中的用途。 专利技术背景 作为治疗实体瘤的抗肿瘤试剂，复制选择性的溶瘤病毒已显示出巨大的潜力。这 些病毒能够偏爱地在肿瘤细胞中进行复制，而在正常细胞中其复制能力却受到限制。这种 溶瘤病毒主要的抗肿瘤机理是通过当其繁殖和从最初感染的肿瘤细胞向周围肿瘤细胞扩 散时的直接细胞病变效应，以达到更大限度的分布和抗癌效力。已出于溶瘤目的对单纯疱 疹病毒(HSV)进行了修饰，最普遍的是通过删除在正常(非分裂的）细胞而非肿瘤细胞中复 制所必须的病毒基因。这种修饰包括删除病毒γ 34.5基因或ICP6基因。病毒γ 34.5基因在 HSV感染过程中作为神经毒性因子发挥功能（Chou, et al, (1990)Science 250:1262-1266)。删除这个基因阻断非分裂细胞中的病毒复制(Mckie，et al.，（1996)Br J Cancer 74(5) :745-52)。病毒ICP6基因编码核糖核苷酸还原酶的大亚基，该酶为病毒DNA有效的复 制产生充足的dNTP池，并且在肿瘤细胞中大量表达，但不在非分裂细胞中大量表达。于是， 在此基因发生突变的病毒能够偏爱地在肿瘤细胞中复制并杀死肿瘤细胞。已经在动物研究 中进行广泛测试的溶瘤性HSV G207目前已经进入临床试验阶段，该病毒在γ34.5基因座 的两个拷贝中都有缺失且通过大肠杆菌(E.coliHacZ基因造成了ICP6基因中的插入突变 (Walker，et al.，（1999)Human Gene Ther. 10(13) :2237-2243)。或者，通过使用肿瘤特异 性启动子来驱动γ 34.5或其它批￥复制所必需的基因能够构建溶瘤性的1型批￥(〇111即，的 al.,(1999)J Virol 73(9):7556-64)〇 最初，溶瘤性的单纯疱疹病毒(HSV)是为治疗脑瘤而设计并构建的(Andreansky， et al.，（lgge^roc.Natl.AcacL Sci .92(21): 11313-11318)。后来发现该病毒在多种其它 人类实体瘤中也是有效的，包括乳腺癌（Toda，et al.，（1998)Human Gene Ther.9(15): 2177-2185)，前列腺癌（Walker,et al.，（1999)Human Gene Ther. 10(13) :2237-2243)，肺 癌（Toyoizumi，et al.，（1999)Human Gene Ther.10( 18) :3013-3029)，卵巢癌（Coukos，et al.，（1999)Clin.Cancer Res.5(6):1523-1527)，结肠癌和肝癌（Pawlik，et al. ,(2000) Cancer Res.61(ll): 2790-2795)。溶瘤性 HSVs 的安全性也已在小鼠（Sundaresan，et al ·， (2000) J. Virol. 74(8): 3832-3841)，以及对HSV感染非常敏感的灵长类动物(夜猴(Aotus)) 中被广泛测试(Todo，et al.，（2000)Cancer Gene Ther.7(6):939-946)。这些研究证实溶 瘤性HSVs对于体内给药是非常安全的。 溶瘤性HSVs全部由HSV-1构建而成。尚未研究HSV-2用于构建溶瘤性病毒。然而， HSV-2具有某些独特的特征增强了其作为溶瘤性试剂的潜力。例如，已报道与HSV-1不同， HSV-2编码糖蛋白G(gG)的分泌形式，该蛋白影响嗜中性粒细胞、单核细胞核和自然杀伤性 细胞的功能(Bellner，et al ·，（2005)J Immunol · 174(4): 2235-41)。这种性质可能提供衍 生自HSV-2的溶瘤性病毒，而该病毒具有抵制机体固有免疫的抑制效应的能力。固有免疫是 宿主对于侵入的微生物作出的快速应答，并且发现其为体内限制HSV复制的主要因素 (Dalloul,et al.,(2004)J Clin Virol.30(4):329-36；ffakimoto,et al.,(2003)Gene Ther. 10(11): 983-90)。因此，甚至当病人机体发展出抗HSV的固有免疫功能时，衍生自HSV-2的溶瘤性病毒也应该复制并扩散。 尽管临床前研究令人鼓舞，但早期临床试验的结果显示当前形式的溶瘤病毒虽然 安全，但其自身可能仅具有有限的抗肿瘤活性（Nemunaitis，et al·，（2001)J.Clin Onco 1.19 (2): 289-298)。来自本专利技术人工作的研究已经证明将细胞膜融合活性包括到溶瘤 性HSV中能够显著地改善病毒的抗肿瘤能力(Fu，et al.，（2002)Mol.Ther.7(6):748-754; Fu，et al.，（2003)Cancer Res.62:2301-2312)。这种膜融合的溶瘤病毒在肿瘤中产生合胞 体形成，直接增强了病毒的破坏力并促进了其肿瘤内的扩散(Fu，et al.，（2003)Cancer Res. 62:2301-2312)。这种合胞体形成和通过膜融合的溶瘤HSV直接进行细胞溶解的独特的 联合肿瘤破坏机制还促进原位肿瘤抗原呈递，导致有效的抗肿瘤免疫应答(Nakamori， et al .，（2004)Mol .Ther.9(5) :658-665)。此外，通过形成合胞体的膜融合溶瘤HSV的扩散将使 其保持抗肿瘤活性，甚至是在宿主中存在中和抗病毒抗体的情况下。病毒仅能在活细胞内 复制，且它们的复制通常需要某些细胞信号通路的激活。很多病毒在其进化过程中已经获 得了多种激活这些信号通路以有益于其复制的方法。II型单纯疱疹病毒(HSV-2)核糖核苷 酸还原酶(ICP10或RR1)的大亚基包含具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(PK)活性的独特的氨基 末端结构域。已发现该？1(活性激活细胞的1^8/1^1(/1^1 31(通路（3111丨认，6七31.，（2000)了 Virol.74(22):10417-29)〇 Luo和Aurelian描述了多种包含HSV-2中ICP10基因不同删除的载体以证明特定基 序和某些活性之间的关系（Luo and Aurelian，（1992)J Biol Chem 267(14):9645-53)〇 HSV-2 ICP10基因的修饰和删除构建体已经被用于证明核糖核苷酸还原酶结构域的特殊性 质（Peng，et al.，（1996)Virology 216(1):1本文档来自技高网...

【技术保护点】
产生具有溶瘤和融合性质的II型单纯疱疹病毒的方法，包括步骤：a)修饰ICP10多聚核苷酸，其中该经修饰的ICP10多聚核苷酸编码在蛋白激酶结构域含有氨基酸1至402缺失的ICP10多肽，b)将所述经修饰的ICP10多聚核苷酸与组成型启动子可操作地连接。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张小柳，付新平，
申请(专利权)人：休斯顿大学，
类型：发明
国别省市：美国;US