本发明专利技术属生物制药技术领域，涉及人粒细胞集落刺激因子的重组融合蛋白，具体涉及一种长效的重组人粒细胞集落刺激因子及其制备方法和用途。本发明专利技术由一个重组人粒细胞集落刺激因子和一个或多个人绒毛膜促性腺激素(hCG)β亚基端118位到145位的氨基酸所组成的短肽(CTP)融合表达制成长效融合蛋白；在保持人粒细胞集落刺激因子的原有活性的前提下，延长该蛋白质在体内的半衰期，进一步用于制备抗放化疗或其他原因造成的中性粒细胞减少症以及骨髓抑制的药物。本发明专利技术的融合蛋白可在毕赤酵母中高效表达，制备工艺简单，可用于大规模的药物级融合蛋白的生产制备。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属生物制药
，涉及人粒细胞集落刺激因子的重组融合蛋白，具体涉及一种长效的重组人粒细胞集落刺激因子及其制备方法和用途。本专利技术在保持人粒细胞集落刺激因子的原有活性的前提下，延长该蛋白质在体内的半衰期，进一步用于制备抗放化疗或其他原因造成的中性粒细胞减少症以及骨髓抑制的药物。
技术介绍
据报道，恶性肿瘤是当前严重影响人类健康、威胁人类生命的主要疾病之一。据统计，2007年全球有760万人死于癌症，其中有大约24%发生在中国，并呈现出逐步年轻化的趋势。目前癌症的治疗仍以手术、放疗和化疗为主要治疗手段，其中，放疗和化疗会大量杀伤人体正常的白细胞，造成病人骨髓抑制、免疫力低下，容易引发各种感染等并发症。研究显示,重组人粒细胞集落刺激因子(Recombinant human granulocyte colonystimulating factor, rhG-CSF)与人体自身分泌的粒细胞集落刺激因子相似或相同，主要作用于中性粒细胞系造血细胞的增殖、分化和活化；能刺激骨髓造血祖细胞中中性粒细胞集落的形成，延长成熟中性粒细胞的存活时间(Roberts Aff.G-CSF.A key regulator ofneutrophil product1n, but that，，s not all ! Growth Factors.2005 ；23 (I): 33 - 41 ；Demetri GD, Griffin JD.Granulocyte colony stimulating factor and its receptor.Blood.1991 ;78(II):2791-2808 ;DeJesus CE,Egen J,Metzger M, et al.Transientneutropenia after granulocyte-colony stimulating factor administrat1n isassociated with neutrophil accumulat1n in pulmonary vasculature.ExperimentalHematology.2011 ；39(2): 142-150.)，临床上主要用于治疗肿瘤化疗后的中性粒细胞减少症等疾病，其应用量巨大。目前国内主要销售的该类药物有:瑞白，惠尔血等，至2010年，该类药物的销售额已经达到近10亿元。但临床实践显示，该类药物在体内半衰期较短，通常只有 4-6 小时(Yoshida Tl, Nakamura S，Ohtake S, Okafuji K, Kobayashi K, Kondo K, KannoM, Matano S，Matsuda T, Kanai M, et al.Effect of granulocyte colony-stimulatingfactor on neutropenia due to chemotherapy for non-Hodgkin’s lymphoma.Cancer.1990 ;66 (9): 1904-9.)，因此，患者需要每天注射以维持药效，病人耐受较差。有研究公开了对重组人粒细胞集落刺激因子的长效化改造中，制备了聚乙二醇修饰的重组人粒细胞集落刺激因子，其中，长效重组人粒细胞集落刺激因子产品Neulasta (pegfilgrastim)是PEG化的G-CSF,于2002年被美国FDA批准上市；所述Neulasta在体内半衰期和药效方面显示了其较同类产品有较明显的提升，患者只需在每次化疗前注射一次即可在化疗中保持原本的粒细胞水平，极大地减少了患者的痛苦；目前，该药物价格昂贵，每支售价5000美元，国内尚无该进口药，在研的G-CSF-Fc等融合蛋白类药物尚处于临床或临床前阶段。CTP (Carboxyl-Terminal Peptide of Human Chor1nicGonadotropin β -Subunit)是由人域毛膜促性腺激素(hCG) β亚基端118位到145位的氨基酸所组成的短肽。研究发现，hCG的体内半衰期相比其他生长激素类的要长，而HCG的β亚基C端的CTP在其中起了相当重要的作用(Bouloux PM, Handelsman DJj Jockenh velF，et al.First human exposure to FSH-CTP in hypogonadotrophic hypogonadal males.Human reproduct1n.2001；16(8):1592-1597 ；Duijkers IJ，Klipping C，BoerrigterPJj et al.Single dose pharmacokinetics and effects on follicular growth andserum hormones of a long-acting recombinant FSH preparat1n (FSH-CTP) in healthypituitary-suppressed females.Human reproduct1n.2002 ； 17(8):1987-1993 ；MatzukMM，Hsueh AJ，Lapolt P，et al.The b1logical role of the carboxyl-terminalextens1n of human chor1nic gonadotropin beta-subunit.Endocrinology.1990 ；126(1): 376-383.)，表明CTP融合蛋白可能比野生型蛋白质具有更长的半衰期。还有研究对CTP-FSH(卵泡刺激素)CTP-TSH0 (促甲状腺激素)研究发现(Fares FAj Suganuma N，Nishimori K，et al.Design of a long-acting follitropinagonist by fusing the Cterminal sequence of the chor1nic gonadotropinβ -subunit to the follitropin β -subunit.Proc Natl Acad Sci USA 1992 ；89 (10):4304 - 4308 ；LaPolt PSj Nishimori Kj Fares FAj Perlas E，Boime I，Hsueh AJff.Enhanced stimulat1n of follicle maturat1n and ovulatory potential by longacting follicle-stimulating hormone agonists with extended carboxyl-terminalpeptides.Endocrinology.1992 ; 131 (6):2514 - 2520)，CTP-hCG a (Furuhashi M，ShikoneT，Fares FA，Sugahara T，Hsueh AJ，Boime 1.Fusing the carboxy-terminal peptide本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种长效的重组人粒细胞集落刺激因子，其特征在于，由一个重组人粒细胞集落刺激因子和一个或多个人绒毛膜促性腺激素(hCG)β亚基端118位到145位的氨基酸所组成的短肽(CTP)融合表达制成长效融合蛋白；所述CTP短肽的氨基酸序列为SEQ ID No.1所示；所述的人粒细胞集落刺激因子(rhG‑CSF)其氨基酸序列由SEQ ID No.2所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：鞠佃文，范佳君，李玉彬，王子玉，王绍飞，宋平，陈其成，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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