本发明专利技术涉及特异性结合组织因子途径抑制剂(TFPI)的N-末端部分(残基1-79)的表位的抗体。本发明专利技术的抗体可能够中和TF/FVIIa复合物的TFPI抑制，甚至在升高水平的TFPI存在的情况下。所述抗体可在治疗患有凝血病的受试者，例如患有血友病A或B(含或不含抑制剂)的那些受试者中找到用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】能够引起促凝血活性的识别组织因子途径抑制剂的N-末端部 分的抗体 专利
本专利技术涉及促凝血抗体和其组合物，所述抗体能够特异性结合组织因子途径抑制 剂(TFPI)的N-末端部分中的表位。本专利技术还涉及所述抗体的药学和治疗用途。 背景 在出血个体中，当血管外组织因子(TF)暴露于血液中的活化因子VII (FVIIa)时，凝血 通过TF/FVIIa复合物起始。TF/FVIIa复合物形成导致因子X (FX)激活成FXa，其连同活化因 子V (FVa)-起产生有限量的凝血酶。起始量的凝血酶激活血小板，其进而导致血小板磷脂 的表面暴露，血小板磷脂支持了由活化因子VIII (FVIIIa)和活化因子IX (FIXa)组成的 tenase复合物的装配和结合。tenase复合物是FX激活的非常有效的催化剂，和在该步骤中 产生的FXa用作负责最终凝血酶突发的FVa/FXa凝血酶原酶复合物中的活性蛋白酶。凝血酶 裂解纤维蛋白原以产生纤维蛋白单体，其聚合以形成纤维蛋白网络。快速和大量的凝血酶 突发是形成固体和稳定纤维蛋白凝块的必要条件。 由FVIII或FIX缺乏引起的FXa和凝血酶产生的不充分增长分别是血友病A或B患者 的出血素质的根本原因。在患有血友病的人中，FXa产生主要受TF/FVIIa复合物驱动:FVIII 或FIX缺乏导致通过tenase复合物的初步FXa产生。然而，TF/FVIIa-介导的FX激活成FXa是 暂时的，因为在自调节回路中组织因子途径抑制剂(TFPI)抑制TF/FVIIa复合物。反馈抑制 导致形成TF/FVIIa/FXa/TFPI复合物。TFPI抑制的钝化在起始凝血期间延长TF/FVIIa-介导 的FX激活，并促进止血。由于例如FVIII或FIX缺乏所致，血友病患者罹患受损的tenase活 性。在这些患者中，TFPI抑制的阻断可补偿不充分的FXa产生和使出血素质正常化。 TFPI是缓慢的紧密-结合竞争性抑制剂，其通过抑制FXa和TF/FVIIa复合物两者调 节FX激活。TFPI包含三个串联排列的Kunitz-型蛋白酶抑制剂结构域(KPI 1-3) JXa的TFPI 抑制发生在二相反应中，其最初产生松散的TFPI-FXa复合物，然后缓慢重排成紧密结合的 TFPI-FXa复合物，其中KPI-2结合和阻断FXa的活性位点。开始凝血后，TF/FVIIa-介导的FXa 产生被TFPI严格减量调节。TF/FVIIa在以下过程中被TFPI抑制，所述过程作为限速步骤，似 乎包括当FXa结合至TF/FVIIa复合物或在TF/FVIIa复合物的附近结合到细胞膜上时FXa的 TFPI抑制（Baugh等，J Biol Chenu 1998; 273(8) :4378-86)。即1-1 有助于形成紧密的 TFPI-FXa复合物和直接结合以及阻断TF-结合的FVIIa的活性位点（Girard等，Nature 1989; 338:518-520; Peraramelli等，Thromb. Haemost. 2012; 108:266-276)。 在体内，在数个细胞区室中发现TFPIJFPI的主要部分与血管内皮有关，次要部分 在血液中循环。已描述TFPI的两种剪接变体TFPI alpha (TFPIa)和TFPI beta (TFPIP)S 在于人中。内皮细胞是TFPI产生的主要部位，并表达两种变体。内皮细胞表面上的主要形式 推测是TFPie JFPIa被分泌至血浆中或存在于胞内储库，其可在某种刺激时被释放。分泌的 TFPIa在血液中作为全长蛋白（10%)或作为具有不同的分子质量的修饰的蛋白（90%)循环； 后者可由于例如C-末端区的截短或与脂蛋白缔合导致。分泌的TFPIa还可通过与例如糖胺 聚糖相互作用结合内皮细胞表面。TFPIa还通过血小板产生和贮存在血小板中。 已知TFPI在人中的半寿期为约60-120分钟，和已知总正常人血浆TFPI浓度为约 1.0-2.5 nM。相比之下，已知抗体在人中的半寿期很长：多至数周，这取决于免疫球蛋白亚 型、来源和具体的氨基酸组成。当某些已知的TFPI抗体，例如公开于Augustsson等，J Thromb Haemost. 2013，11: s2, PA 4.14-2的mAb 0001 抗体与TFPI在循环中形成复合物 时，血浆中的总TFPI浓度（游离TFPI加 TFPI/抗体复合物）可上升至高达20-40 nM的浓度 (Augustsson等同上）。因此，体内给予TFPI抗体可导致TFPI/抗体复合物累积至远高于TFPI 的给予前血浆浓度的浓度。在其中TFPI/抗体复合物的抑制活性未完全中和的情况下，累积 可逆转否则促凝血的TFPI抗体的作用，导致净抗凝血作用。 本专利技术人展望，本文公开的抗体和包含所述抗体的药物组合物可解决这样的局限 性。 简述 本专利技术涉及特异性结合组织因子途径抑制剂的N-末端部分的表位的抗体。 在一个方面，本专利技术涉及TFPI抗体，其结合包含以下N-末端氨基酸残基中的至少 一个的TFPI表位：SEQ ID NO: 1 的Leu 16、Pro 17、Leu 19、Lys 20、Leu 21、Met 22、Phe 25、Cys 35、Ala 37、Met 39、Arg 41、Tyr 56、Gly 57、Gly 58、Cys 59、Glu 60、Gly 61、Asn 62、Gln 63、Arg 65、Phe 66、Glu 67、Glu 71和Met 75。 在本专利技术的一个方面，TFPI抗体表位包含以下N-末端氨基酸残基：SEQ ID NO: I 的Arg 41、Arg 65和Glu 67。 在一个方面，本专利技术的抗体通过例如与TF/FVIIa竞争结合TFPI-KPI-I，中和TF/ FVIIa复合物的TFPI抑制。TFPI (1-79)结合抗体结合、掩蔽或在构象上改变TFPI (SEQ ID NO: 1)上的TF/FVIIa结合表面或其部分，从而在功能上阻断TFPI-TF/FVIIa相互作用，可中 和TF/FVIIa复合物的TFPI抑制。 在另一方面，本专利技术的抗体中和TFPI KPI-I对导致在TFPI KPI-2和FXa之间形成 紧密复合物的反应的刺激作用。 在另一方面，本专利技术的TFPI (1-79)抗体结合和中和所有形式的TFPI。在一个方面，本专利技术的抗体中和TFPI，甚至在其中循环中的总TFPI水平升高的环 境下，并且此外在这些条件下使凝血酶产生正常化。 本专利技术还涉及包含能够特异性结合TFPI (1-79)中的表位的至少一种抗体和至少 一种药学上可接受的赋形剂的药物制剂。 本专利技术的抗体或包含所述抗体的药物制剂可用作药物-例如在治疗患有凝血病 的受试者中用作药物。 附图简述 图1显示数种TFPI (1-79)抗体对凝血酶产生的作用(TGT测定法），如在通过加入100 μ g/ml FVIII抗体获得的血友病A-样情况下使用正常人血浆(NHP)库所测量。 图2显示数种TFPI (1-79)抗体对凝血酶产生的作用(TGT测定法），如在通过加入5 nM重组全长TFPIa至NHP获得的升高的TFPIa水平的情况下使用NHP库所测量。血友病A-样情 况通过加入100本文档来自技高网...
【技术保护点】
分离的抗体或其片段，其特异性结合人TFPI (SEQ ID NO: 1)的氨基酸残基1‑79中存在的表位。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：J托恩克劳森，B奥尔森克罗格，H海布罗奇皮特森，C奥古斯特斯森，
申请(专利权)人：诺和诺德股份有限公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK
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