本发明专利技术公开了一种铁皮石斛种子的原球茎计数法，将铁皮石斛的种子萌发生长成原球茎，通过计算原球茎的数量得到种子的数量。该法将细微、难以采用常规的、直接肉眼分辨计数的铁皮石斛蒴果中的种子播在培养基表面，利用配制培养基丰富的营养成份，为铁皮石斛种子萌发及生长提供养料和水分，确保其蒴果保存的种子在培养基上基本可以成活，并让种子萌发生长成肉眼能清楚分辨和计数的一定大小的原球茎，使之能直观、简便计数，则通过计数原球茎数量即可得到种子的数量。本发明专利技术使用简便、实用性强、不需要借助其他较精密的显微仪器设备，就可以准确计数铁皮石斛蒴果中的种子数量，从而方便得出生产种苗的数量，为大规模育苗和生产提供准确的指导和参考。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物细微种子快速计数
，尤其涉及一种。
技术介绍
铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)，兰科石斛属多年生草本植物，常用中药，为《中华人民共和国药典》所收载。分布于我国秦岭、淮河以南诸省区，生长在高山峻岭悬崖峭壁和岩石缝隙或深山古树上。铁皮石斛具有生津、止渴、镇痛、消除水肿之功效，主治热病阴虚、目暗、胃弱、声音嘶哑等疾病，对声带疲劳、声音嘶哑，恢复其美音有特殊疗效。铁皮石斛为濒危物种，属国家一级重点保护植物，其新鲜茎及炒制烘干后的铁皮楓斗都是名贵中药材。现代临床应用和药理研究证实，铁皮石斛具有滋阴润肺、养胃生津、健脑明目、保肝宁心、清热降火、补五脏之虚劳、轻身延年的神奇功效，对慢性疲劳综合症、肺病、冠心病、肾病、慢性肝病、高血压、高血脂、高血糖、糖尿病、慢性胃病、干燥综合症、癌症等疾病都有确切疗效和调理康复作用;增强肌体免疫力、抗氧化、抗衰老，对烟酒过度、劳累过度、夜生活过度、用眼用脑过度、声音嘶哑、口干舌燥、年老性体弱力衰阴虚等康复有特殊疗效。铁皮石斛在自然状态下发芽率不及5%，繁殖率非常低，多以分株法繁殖，难以满足市场需求。现在铁皮石斛主要以种子为外植体，进行组织培养生产试管苗的方式进行繁育。铁皮石斛种子主要存在于蒴果中，蒴果长约1.8?2.2cm、直径0.5?0.8cm，内含有几万至十几万粒种子，细小如粉尘状，在显微镜下观察到种子结构非常简单，仅有一个简单的胚及单层细胞的翘状种皮结构，无胚乳，种子长X宽平均为126Χ84μπι。由于铁皮石斛的种子很细微，很难把种子分离开来，用常规方法难以准确计数蒴果所含种子量，且种子在自然状态下不易保存，很容易失活。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种使用简便、实用性强的，以准确计数铁皮石斛蒴果中的种子数量，为石斛育苗提供准确的指导和参考。为解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术问题:，将铁皮石斛的种子萌发生长成原球茎，通过计算原球茎的数量得到种子的数量。上述，将铁皮石斛蒴果中的种子播在培养基表面使其萌发生长成原球茎。培养基组成为MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/LNAA+200g/L马铃薯浸出液+20g/L蔗糖+5g/L 琼脂，pH5.8。原球莖直径大于等于1mm。上述，包括以下步骤:〈1>培养基制备按配方制备培养基，并用直径6cm、高10cm的平底玻璃瓶分装，每瓶装25ml，然后置121°Cn1.lkg/cm2的压力下灭菌20min，待用；〈2>种子处理铁皮石斛蒴果依次用洗洁精水溶液浸泡5min、自来水冲洗15-30min，然后在超净工作台上放入lg/LHgCl2溶液中灭菌15min，无菌水冲洗5次后，无菌滤纸吸干果实表面水分，待用；〈3>种子播种将蒴果中的种子接入培养基表面；〈4>种子培养将接好的培养基放25°C培养室内，在辅助光照10-12小时/天、光照强度15001ux条件下培养；〈5>种子计数待种子长成原球茎，球茎直径达1mm，取出全部原球茎计数，得到蒴果中种子的数量。针对铁皮石斛的种子很细微难于分离计数且不易保存的问题，根据种子在蒴果中可保存较长时间，生产上种子保存均采用蒴果保存的方式，专利技术人建立了一种，将铁皮石斛的种子萌发生长成原球茎，通过计算原球茎的数量得到种子的数量。由于该法系将细微、难以采用常规的、直接肉眼分辨计数的铁皮石斛蒴果中的种子播在培养基表面，利用配制培养基丰富的营养成份，为铁皮石斛种子萌发及生长提供养料和水分，确保其蒴果保存的种子在培养基上基本可以成活(成熟种子99%在培养基上能萌发生长)，并让种子萌发生长成肉眼能清楚分辨和计数的一定大小的原球茎(球茎直径达1mm)，使之能直观、简便计数，则通过计数原球茎数量即可得到种子的数量。本专利技术使用简便、实用性强、不需要借助其他较精密的显微仪器设备，就可以准确计数铁皮石斛蒴果中的种子数量，从而方便得出生产种苗的数量，这为大规模育苗和生产提供准确的指导和参考。【具体实施方式】实施例〈1>培养基制备培养基组成为MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/LNAA+200g/L马铃薯浸出液+20g/L蔗糖+5g/L 琼脂，pH5.8;按配方制备培养基，并用直径6cm、高10cm的平底玻璃瓶分装，每瓶装25ml，然后置121°Cn1.lkg/cm2的压力下灭菌20min，待用；〈2>种子处理9月下旬至11月下旬，采收健康饱满、无虫蛀、果皮稍变黄、未开裂成熟的铁皮石斛蒴果依次用洗洁精水溶液浸泡5min、自来水冲洗15_30min，去掉多余的果柄、果蒂等，然后在超净工作台上放入lg/LHgCl2溶液中灭菌15min，无菌水冲洗5次后，无菌滤纸吸干果实表面水分，待用；〈3>种子播种在超净工作台，于蒴果的一端切一小口，轻轻地抖动蒴果，将蒴果中的种子薄薄地、均匀地接入培养基表面;共播种10个蒴果，每个果一个编号，根据果实大小，每果播几十瓶至百多瓶不等；〈4>种子培养将接好的培养基放25°C培养室内，在辅助光照10-12小时/天、光照强度15001ux条件下培养； 〈5>种子计数在进行铁皮石斛试管苗培养过程中，种子萌发生长成色泽浓绿、晶莹、有叶原基的原球茎，待粉状的种子培养60天后，原球茎的长宽达到1592μπι X 939μπι( 1.6mm X 0.9mm，长度和宽度比原胚分别增长了 11.9倍和10.7倍)，肉眼能很容易分辨，取出每个果的全部原球茎，以20粒为一组计数，就很容易得出各个蒴果中的种子量。结果:10个蒴果中的种子数量分别为 71500、42500、45600、27600、35196、54762、123100、96850、75680、43560。进一步地，由于原球茎继续培养就长成根、茎、叶齐全的小苗，如果原球茎直径达不到1mm就无法继续萌发，同时结合原球莖的生长形态，便可准确判断出其有无进一步发育成小苗的能力，从而推断出一个蒴果中种子的发育能力。因此，应用本专利技术既可清楚计算出蒴果中种子数量，又可准确判断出蒴果中种子存活的数量(原球茎直径大于等于1mm的便为存活种子数量，小于1mm的为死亡种子数量)，从而为生产和销售提供更准确的数据支持。【主权项】1.一种，其特征在于将铁皮石斛的种子萌发生长成原球茎，通过计算原球茎的数量得到种子的数量。2.根据权利要求1所述的，其特征在于将铁皮石斛蒴果中的种子播在培养基表面使其萌发生长成原球茎。3.根据权利要求2所述的，其特征在于:所述培养基组成为MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/LNAA+200g/L马铃薯浸出液+20g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH5.8。4.根据权利要求3所述的，其特征在于:所述原球茎平均直径大于等于1mm。5.根据权利要求4所述的，其特征在于包括以下步骤: 〈1>培养基制备 按配方制备培养基，并用直径6cm、高10cm的平底玻璃瓶分装，每瓶装25ml，然后置121°C、1.lkg/cm2的压力下灭菌20min，待用； 〈2>种子处理 铁皮石斛蒴果依次用洗洁精水溶液浸泡5min、自来水冲洗15-30min，然后在超净工作台上放入lg/LHgCl2溶液中本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种铁皮石斛种子的原球茎计数法，其特征在于将铁皮石斛的种子萌发生长成原球茎，通过计算原球茎的数量得到种子的数量。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：蒙爱东，闫志刚，林伟，缪剑华，黃名埙，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：广西;45
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