幽门螺杆菌鉴定和毒力多重基因检测体系及其试剂盒和应用制造技术

本发明专利技术涉及一种幽门螺杆菌鉴定和毒力多重基因检测体系及其试剂盒和应用。幽门螺杆菌鉴定和毒力多重基因检测体系包括多对引物，分别针对菌种鉴定基因（16S rRNA），毒力基因（cagA、vacA-s1、vacA-s2、vacA-m1、vacA-m2、iceA1、iceA2、dupA、oipA和luxS）。本发明专利技术的幽门螺杆菌鉴定和毒力多重基因检测体系及其试剂盒不需要常规培养等步骤，可在同一反应体系对组织样本直接进行幽门螺杆菌的鉴定和多种毒力分析，弥补了常规检测方法通量低、耗时长和检出率低等缺点，第一时间为临床提供全面、精准、低成本的病原学依据，为幽门螺杆菌感染的精准诊断与鉴别诊断和疾病预后判断提供重要参考。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种多重基因检测产品以及该产品所用到的检测体系，属于生物

技术介绍
幽门螺杆菌（H.pylori）是一种革兰阴性、微需氧、弯曲状杆菌，主要寄居在人体胃部。幽门螺杆菌感染与慢性萎缩性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌等发生发展密切相关，因此引起临床的广泛关注。1994年，国际癌症研究机构IARC已将其列为人类I类致癌因子，是目前为止唯一被列为明确对人类致癌的细菌性病原微生物。很多报告认为幽门螺杆菌感染与冠心病、类风湿、肝胆病、肺结核、妊娠呕吐、直结肠癌及多种皮肤病等疾病有关，其致病性与多种毒力基因的表达密切相关。流行病学显示，全球几乎有一半的人口感染此菌，发展中国家甚至高达60%～70%。因此，幽门螺杆菌感染是世界各国需要面对的公共卫生问题。目前幽门螺杆菌鉴定和毒力检测方法均有其局限性。例如：1）分离培养鉴定：幽门螺杆菌培养成菌落后，经生化反应鉴定。由于幽门螺杆菌培养需要微需氧条件，对营养条件要求苛刻，因此检出率很低，作为常规诊断手段不易推广,且幽门螺杆菌培养需要一定的时间,不利于快速诊断。2）组织病理切片染色法：该方法是把患者胃镜检查活检组织切片,染色后可观察到组织中的幽门螺杆菌。该方法受幽门螺杆菌载量影响明显，且操作繁琐、费时，不适于大通量样本的检测。3）尿素酶依赖性试验（尿素呼气试验）：根据标志物不同分为13C呼吸试验及14C呼吸试验，临床应用广泛。缺点是费用高、易受抑菌药物和抑酸药物的影响、敏感度低。4）免疫学检查：检测血清中或唾液和尿液中抗体（IgG）或直接检测粪便中幽门螺杆菌的菌体抗原或者毒素成分。其缺点是不能反映现症感染。5）核酸分析法：包括测序、PCR、寡核苷酸探针杂交等，但是这些检查方法检测位点少，特异性低，通量小，成本较高，且不能做定量分析。幽门螺杆菌致病性与其产生的多种毒力因子密切相关。但是目前常规的检测方法均存在时间长、灵敏度低、费用高、通量低、尤其不能同时进行多种相关因素检测等缺点。综上所述，如何快速、准确、全面地对幽门螺杆菌进行检测、鉴定和分析是本领域的技术人员迫切亟待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种可以快速、全面、准确、低成本的幽门螺杆菌鉴定和毒力多重基因检测体系及其试剂盒，以及采用该检测体系在制备诊断产品方面的应用。本专利技术为解决上述技术问题提出的一种技术方案是：一种幽门螺杆菌鉴定和毒力多重基因检测体系，可在同一个反应体系中进行其菌种鉴定、定量、毒力和耐药性分析。包括对菌种鉴定基因16SrRNA进行检测的引物,分别对毒力基因cagA、vacA-s1、vacA-s2、vacA-m1、vacA-m2、iceA1、iceA2、dupA、oipA和luxS进行检测的引物,分别对耐药基因23SrRNA的2143位点、rdxA的148位点、pbp1A的1777位点和gyrA的261位点的进行多态性检测的引物,以及分别对幽门螺杆菌的拷贝数进行定量分析的基因ureC和?-globin进行检测的引物；所述各引物的正向引物的5’端均设有正向通用引物序列，所述各引物的反向引物的5’端均设有反向通用引物序列。所述检测体系进行PCR反应后进行毛细管电泳分析。针对16SrRNA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，针对16SrRNA基因的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；针对cagA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示，针对cagA基因的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示；针对vacA-s1或vacA-s2基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.5所示，针对vacA-s1或vacA-s2基因的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.6所示；针对vacA-m1基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.7所示，针对vacA-m1基因的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.8所示；针对vacA-m2基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.9所示，针对vacA-m2基因的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.10所示；针对iceA1基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.11所示，针对iceA1基因的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.12所示；针对iceA2基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.13所示，针对iceA2基因的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.14所示；针对dupA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.15所示，针对dupA基因的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.16所示；针对oipA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.17所示，针对oipA基因的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.18所示；针对luxS基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.19所示，针对luxS基因的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.20所示；针对23SrRNA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.21所示，对应23SrRNA基因2143位点为碱基A的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.22所示，对应23SrRNA基因2143位点为碱基G的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.23所示；针对rdxA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.24所示，对应rdxA基因148位点为碱基C的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.25所示，对应rdxA基因148位点为碱基T的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.26所示；针对pbp1A基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.27所示，对应pbp1A基因1777位点为碱基A的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.28所示，对应pbp1A基因1777位点为碱基G的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.29所示；针对gyrA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.30所示，对应gyrA基因261位点为碱基C或T的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.31所示，对应gyrA基因261位点为碱基G或A的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.32所示；针对ureC基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.33所示，针对ureC基因的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.34所示；针对?-globin基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.35所示，以及针对?-globin基因的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.36所示；所述正向通用引物的核苷酸序列如SEQIDNo.37所示；所述反向通用引物的核本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种幽门螺杆菌鉴定和毒力多重基因检测体系，其特征在于：包括对菌种鉴定基因16S rRNA进行检测的引物，以及分别对毒力基因cagA、vacA‑s1、vacA‑s2、vacA‑m1、vacA‑m2、iceA1、iceA2、dupA、oipA和luxS进行检测的引物；所述各引物的正向引物的5’端均设有正向通用引物序列，所述各引物的反向引物的5’端均设有反向通用引物序列；针对16S rRNA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，针对16S rRNA基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；针对cagA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，针对cagA基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；针对vacA‑s1或vacA‑s2基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，针对vacA‑s1或vacA‑s2基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；针对vacA‑m1基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，针对vacA‑m1基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示；针对vacA‑m2基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示，针对vacA‑m2基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示；针对iceA1基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，针对iceA1基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示；针对iceA2基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示，针对iceA2基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.14所示；针对dupA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.15所示，针对dupA基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.16所示；针对oipA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.17所示，针对oipA基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.18所示；针对luxS基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.19所示，针对luxS基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.20所示；所述正向通用引物的核苷酸序列如SEQ ID No.37所示；所述反向通用引物的核苷酸序列如SEQ ID No.38所示。...

【技术特征摘要】
1.一种幽门螺杆菌鉴定和毒力多重基因检测体系，其特征在于：包括对菌种鉴定基因
16SrRNA进行检测的引物，以及分别对毒力基因cagA、vacA-s1、vacA-s2、vacA-m1、vacA-
m2、iceA1、iceA2、dupA、oipA和luxS进行检测的引物；所述各引物的正向引物的5’端均设有
正向通用引物序列，所述各引物的反向引物的5’端均设有反向通用引物序列；
针对16SrRNA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，针对16SrRNA基因
的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；
针对cagA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示，针对cagA基因的反向引
物的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示；
针对vacA-s1或vacA-s2基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.5所示，针对vacA-
s1或vacA-s2基因的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.6所示；
针对vacA-m1基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.7所示，针对vacA-m1基因的
反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.8所示；
针对vacA-m2基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.9所示，针对vacA-m2基因的
反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.10所示；
针对iceA1基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.11所示，针对iceA1基因的反向
引物的核苷酸序列如SEQIDNo.12所示；
针对iceA2基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.13所示，针对iceA2基因的反向
引物的核苷酸序列如SEQIDNo.14所示；
针对dupA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.15所示，针对dupA基因的反向引
物的核苷酸序列如SEQIDNo.16所示；
针对oipA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.17所示，针对oipA基因的反向引
物的核苷酸序列如SEQIDNo.18所示；
针对luxS基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.19所示，针对luxS基因的反向引
物的核苷酸序列如SEQIDNo.20所示；
所述正向通用引物的核苷酸序列如SEQIDNo.37所示；
所述反向通用引物的核苷酸序列如SEQIDNo.38所示。
2.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌鉴定和毒力多重基因检测体系，其特征在于：还包
括分别对幽门螺杆菌的拷贝数进行定量分析的基因ureC和?-globin进行检测的引物；
针对ureC基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.33所示，针对ureC基因的反向引
物的核苷酸序列如SEQIDNo.34所示；
针对?-globin基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.35所示，以及针对?-globin
基因的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.36所示。
3.根据权利要求2所述的幽门螺杆菌鉴定和毒力多重基因检测体系，其特征在于：还包
括分别对耐药基因23SrRNA的2143位点、rdxA的148位点、pbp1A的1777位点和gyrA的261位
点的进行多态性检测的引物；
针对23SrRNA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.21所示，对应23SrRNA基因
2143位点为碱基A的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.22所示，对应23SrRNA基因2143
位点为碱基G的反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.23所示；
针对rdxA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.24所示，对应rdxA基因148位点
为碱基C...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵虎，张艳梅，杨长青，边海鹏，胡彬婕，赵付菊，吴勇，王诗雯，缪应新，徐玲丽，孔咪咪，张景皓，姜文荣，陈飞，
申请(专利权)人：华东医院，
类型：发明
国别省市：上海;31