生鲜牛乳中外源苯甲酸的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种生鲜牛乳中外源苯甲酸的同位素检测方法。具体而言，其是一种基于稳定同位素技术检测食品中掺假掺杂的技术。本发明专利技术根据稳定碳同位素的自然分馏特性和代谢过程的理论建立了检测生鲜牛乳中外源添加苯甲酸的方法。通过测定生鲜牛乳中常量组分和苯甲酸的稳定碳同位素组成，建立生鲜牛乳中自然存在的苯甲酸与酪蛋白的碳同位素组成的关系模型，根据样品中苯甲酸与酪蛋白δ13C值的关系进行判断。该技术准确可靠，可用于生鲜牛乳中外源添加苯甲酸的快速检测。

【技术实现步骤摘要】

：本专利技术涉及一种检测生鲜牛乳中外源添加苯甲酸(苯甲酸钠以苯甲酸计)的方法。属于稳定同位素技术的应用研究领域，具体就是根据生鲜牛乳自身的δ13C特征判断生鲜牛乳中是否含有外源添加的苯甲酸。
技术介绍
：生鲜牛乳是一种营养均衡的全价食品，在人们的膳食结构中有其它食品无法替代的作用，年来我国乳业和乳品加工业得到了飞速发展。然而，生鲜牛乳产量急剧增长的同时，生鲜牛乳的质量安全问题突现出来，已成为各级政府部门和消费者关注的焦点，尤其是三聚氰胺事件引起消费者对生鲜牛乳中非法添加成分的极大恐惧，引发消费者对国内生鲜牛乳质量安全的信任危机。苯甲酸(苯甲酸钠以苯甲酸计)作为GB2760-2011中允许使用的食品添加剂，被广泛应用于酸性食品的保鲜，作为防腐剂以延长食品货架期，然而并未将其列入生鲜牛乳的允许适用范围之列。目前常用的检测食品中苯甲酸的方法主要有气相色谱法[Abdol-SamadAbedi，AbdorrezaMohammadi，EbrahimAzadniya，etal.Simultaneousdeterminationofsorbicandbenzoicacidsinmilkproductsusinganoptimizedmicroextractiontechniquefollowedbygaschromatography,2014]、HPLC法[BahruddinSaad，Md.FazlulBari，MuhammadIdirisSaleh，etal.Simultaneousdeterminationofpreservatives(benzoicacid,sorbicacid,methylparabenandpropylparaben)infoodstuffsusinghigh-performanceliquidchromatography,2005；IsabelM.P.L.V.O.Ferreira，EuláliaMendes，PaulaBrito，etal.SimultaneousdeterminationofbenzoicandsorbicacidsinquincejambyHPLC,2000]、离子色谱法[Zong-HuaWang，Jian-FeiXia，Fu-YongZhao，etal.Determinationofbenzoicacidinmilkbysolid-phaseextractionandionchromatographywithconductivitydetection,2013]和GC-MS法[C.DeLuca，S.Passi，E.Quattrucci.Simultaneousdeterminationofsorbicacid,benzoicacidandparabensinfoods:Anewgaschromatography‐massspectrometrytechniqueadoptedinasurveyonItalianfoodsandbeverages[J].FoodAdditives&Contaminants,1995]，我国国家标准GB/T5009.29-2003采纳气相色谱法和液相色谱法作为食品中苯甲酸测定的官方方法，而分析方法标准GB21703-2010仅制定了乳和乳制品中苯甲酸测定的液相色谱法。据世界卫生组织报告，自然界中许多动植物本身存在苯甲酸，即苯甲酸是食品(包括牛乳)中的一种天然成分，然而现有方法只能测定产品中苯甲酸的含量、判定相关产品中苯甲酸含量是否符合GB2760的规定，但并不能论断产品中苯甲酸来自于产品的自身存在还是外源添加，尤其是乳制品的国家标准中并无苯甲酸的含量要求，因此，建立生鲜牛乳中外源添加苯甲酸的检测技术是当前生鲜牛乳安全领域的一个研究重点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种有效检出生鲜牛乳中外源添加苯甲酸(苯甲酸钠以苯甲酸计)的方法。本专利技术的技术方案是：根据自然界中稳定碳同位素的分布规律，以苯甲酸的δ13C为研究对象，以生鲜牛乳中酪蛋白的δ13C作为苯甲酸的内源性指标，通过建立苯甲酸与酪蛋白中δ13C的数学模型，根据待检样品中苯甲酸和酪蛋白中δ13C特征来判断苯甲酸是否来自于外源添加。具体而言，该方法包括：a.选择具有δ13C梯度的、未添加苯甲酸的同一类的真品生鲜牛乳，测定其酪蛋白和苯甲酸的稳定碳同位素比值δ13C酪蛋白和δ13C苯甲酸，b.建立该种生鲜牛乳的δ13C酪蛋白与δ13C苯甲酸之间的函数δ13C苯甲酸＝aδ13C酪蛋白+b，c.按照步骤a中的所采用的分析方法，测定待检样品的酪蛋白和苯甲酸的稳定碳同位素比值δ13C酪蛋白和δ13C苯甲酸测定值。d.将待检样品的δ13C酪蛋白代入到步骤b建立的函数中，得到δ13C苯甲酸计算值，并将与δ13C苯甲酸测定值进行比较，从而判断待检样品中是否含有外源添加的苯甲酸。在所述步骤d中将δ13C酪蛋白与δ13C苯甲酸进行比较时，若两者的绝对差值不超过1‰则可判定待测生鲜牛乳不含外源添加的苯甲酸，若绝对差值超过1‰则可判定待测生鲜牛乳含有外源添加的苯甲酸(苯甲酸钠以苯甲酸计)。上述生鲜牛乳为鲜牛乳或经过巴氏灭菌之后的生鲜牛乳。上述方法中，生鲜牛乳酪蛋白和苯甲酸δ13C值的测定可采用本领域已知的任何方法。本专利技术的有益结果1.本专利技术首次通过稳定碳同位素技术进行生鲜牛乳中外源添加苯甲酸的检测，使得稳定同位素技术在生鲜牛乳安全领域的应用成为可能。2.本专利技术通过建立数学模型，应用时只需测定待检样品的酪蛋白和苯甲酸中的δ13C，简化了方法的判定程序，不需依赖数据库，有助于生鲜牛乳中苯甲酸的来源检测。具体实施方式实施例11.分别测定鲜牛乳A、B、C的酪蛋白和苯甲酸的δ13C值，结果见表1。表1鲜牛乳δ13C值测定结果鲜牛乳ABCδ13C酪蛋白(‰)-17.52-17.30-16.59δ13C苯甲酸(‰)-30.38-30.12-26.57由表1可知，三个鲜牛乳样品中不含有外源添加的苯甲酸，但其内在的苯甲酸δ13C值却并非恒定，因此不能设定牛乳中自然存在的苯甲酸的δ13C值分布范围。根据稳定同位素的自然分馏理论，来源或前体物质相同的两个物质，其稳定同位素的分布特征存在一定的规律性联系。对照酪蛋白的δ13C值可知，可发现二者呈现良好的线性正相关，以此得到...

【技术保护点】
待测生鲜牛乳中外源苯甲酸的同位素检测方法，其特征在于根据苯甲酸的稳定碳同位素组成δ13C特征判断苯甲酸的来源，其包括如下的步骤：1)构建生鲜牛乳中天然存在的苯甲酸与生鲜牛乳中蛋白质的稳定碳同位素比值的关系模型：δ13C苯甲酸＝aδ13C蛋白质+b；2)分别测定待测样品中蛋白质的稳定碳同位素比值δ13C蛋白质和苯甲酸的稳定碳同位素比值δ13C苯甲酸；3)根据步骤2)中测得的δ13C蛋白质计算出待测生鲜牛乳中天然存在的苯甲酸应该具有的稳定碳同位素组成(δ13C苯甲酸计算值)；4)比较步骤3)中苯甲酸的测定值δ13C苯甲酸测定值和步骤4)中苯甲酸δ13C苯甲酸计算值，若两值的绝对差值不超过1.50‰则认为该样品中的苯甲酸为自然存在，若超过1.50‰则认为是外源添加。

【技术特征摘要】
1.待测生鲜牛乳中外源苯甲酸的同位素检测方法，其特征在于根
据苯甲酸的稳定碳同位素组成δ13C特征判断苯甲酸的来源，其包括如下
的步骤：
1)构建生鲜牛乳中天然存在的苯甲酸与生鲜牛乳中蛋白质的稳定
碳同位素比值的关系模型：δ13C苯甲酸＝aδ13C蛋白质+b；
2)分别测定待测样品中蛋白质的稳定碳同位素比值δ13C蛋白质和苯
甲酸的稳定碳同位素比值δ13C苯甲酸；
3)根据步骤2)中测得的δ13C蛋白质计算出待测生鲜牛乳中天然存在
的苯甲酸应该具有的稳定碳同位素组成(δ13C苯甲酸计算值)；
4)比较步骤3)中苯甲酸的测定值δ13C苯甲酸测定值和步骤4)中苯甲
酸δ13C苯甲酸计算值，若两值的绝对差值不超过1.50‰则认为该样品中的苯
甲酸为自然存在，若超过1.50‰则认为是外源添加。
2.根据权利要求1的方法，其中在步骤4)中比较步骤3)中苯甲
酸的测定值δ13C苯甲酸测定值和步骤4)中苯甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟其顶，王道兵，张世伟，
申请(专利权)人：中国食品发酵工业研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11