一种裂解组合物及其用途、试剂盒、利用该裂解组合物制备核酸的方法、核酸分析的方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及一种裂解组合物及其用途、试剂盒、利用该裂解组合物制备核酸的方法、核酸分析的方法。将本发明专利技术所得到的裂解产物，可直接用于核酸分析方法，无需提纯核酸。使用本发明专利技术裂解组合物，将多种生物组织、细胞裂解使细胞中的核酸释放到溶液中，终止反应后不经过常规核酸分离纯化的步骤，而直接使用该全细胞裂解混合状态下的核酸用作模板，指导核酸扩增分析，如实时荧光qPCR反应进行核酸扩增等。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，特别涉及一种裂解组合物及其用途、试剂盒、利用该裂 解组合物制备核酸的方法、核酸分析的方法。
技术介绍
荧光定量PCR(qPCR)，是一种基于多聚酶链反应PCR(PolymeraseChain Reaction)的在许多方面改进的DNA扩增技术。定量PCR在thermalcycler仪器中进行时 仪器通过发射特殊波长的光束照亮每一个DNA样本以及探测激发突光团（fluorophonre) 发出的荧光。qPCR需要使用荧光探针或荧光引物，目标DNA在即时扩增时其变化的数量可 以通过一台实时PCR仪器同时进行监测。另外，qPCR还可以同时扩增一个或多个目标DNA 序列。qPCR(quantitativePCR)在对DNA模板上要求严格，一般需要从生物样品中提取 纯净DNA才能进行。常规繁琐的提取DNA主要方法如下：（1)经典常规的苯酚氯仿（phenol/ chloroformDNAextraction)抽提法时间长、抽提步骤繁琐且毒性大，不能够用于高通量 实验。此外苯酚氯仿化学试剂已经被证明是实验室重要的致癌物质，长期接触将对操作人 员的身体造成不可逆的伤害，对健康与安全形成较大的威胁；（2)离子交换纯化柱法（Spin column)，用silica膜收集DNA，步骤繁琐，多次使用离心机和换离心管，实验过程中DNA易 丢失，提取量少，且价格昂贵，并且还产生较多不易消除的废料。上述2个方法都不利于高 通量；（3)磁珠法（Magnetbeads，又称玻璃珠分离法）：用磁珠提纯DNA方法步骤相对简 便，较少换离心管，但也多个步骤，并且需要高价值昂贵自动化工作站特殊设备。，磁珠提纯 DNA方法所采用的自动化工作站就是非常典型的高价值设备。此外，磁珠分离DNA法虽然较 少换离心管，但也多个步骤，并且需要昂贵的特殊设备。这些现有技术需要多次更换离心管 或多次清洗-收集DNA，容易导致样品交叉污染。直接进行实时PCR而不需要提取DNA方法 的报道非常有限的。因此，提供一种无需经过提纯核酸、能够直接用于核酸分析的裂解组合 物，试剂盒、用该裂解组合物制备核酸的方法、以及核酸分析的方法具有现实意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种裂解组合物及其用途、试剂盒、利用该裂解组合物制备 核酸的方法以及核酸分析的方法。该裂解组合物可以快速简捷制取核酸直接用于核酸分 析。 为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案： 本专利技术提供了一种裂解组合物，包括A或B或两者的组合物；所述A选自NaOH，Κ0Η或者Ca(0H) 2 ;所述B为PEG。PEG，聚乙二醇。也称为聚（环氧乙烯）（ΡΕ0)或聚氧乙烯（Ρ0Ε)，是指环氧乙烷的 寡聚物或聚合物。这三个名称现今一般为同义词，但历史上聚乙二醇往往是指分子质量低 于20,OOOg/mol的低聚物和聚合物，PEO是指分子量超过20, 000的聚合物，POE则可指任何 分子质量的聚合物。PE0以及P0E根据分子量的不同，可为液体或低熔点液体。由于链长的 影响，不同分子量的聚乙二醇往往有不同的物理性质（如黏度）及不同的应用。作为优选， PEG的分子量为100~2000。 本专利技术的一些实施例中，裂解组合物中所述A的浓度为0. 1~200mmol/L，所述B 的浓度为1~200mg/mL。 本专利技术的一些实施例中，裂解组合物还包括反应终止物。在本专利技术的一些实施例 中，反应终止物可以为终止裂解反应的物质。作为优选，所述反应终止物为TurboBuffer。 任何可以终止生物样品裂解反应的试剂均可以应用，本专利技术在此不作限定。 本专利技术的一些实施例中，当所述裂解组合物中包括A和B时，所述A与所述B的摩 尔比为 〇· 1 ~200 :0· 45 ~1. 05。 本专利技术还提供了上述裂解组合物用于裂解生物样品制备核酸的应用。 在本专利技术的一些实施例中，所述生物样品与所述裂解组合物的质量体积比为：1: 1 ~1 :10 (以g/mL计）。 本专利技术的一些实施例中，所述生物样品包括真核生物或原核生物。 本专利技术的一些实施例中，所述真核生物包括动物、植物、微生物。 本专利技术的一些实施例中，所述动物包括动物液体组织、动物固体组织。 本专利技术的一些实施例中，所述动物液体组织包括唾液、尿液、血液、胃液、胸积水、 肺部积水、腮腺细胞、淋巴液、骨髓液、奶液、眼泪、精液、脊髓液，脑髓，羊水，关节液或鼻液 中的一种或两者以上的组合物。 本专利技术的一些实施例中，所述动物固体组织包括肠组织、喉咙组织、肿瘤组织、细 胞系、肺部组织肝组织、胃组织、肾组织、胰腺组织、前列腺组织、子宫组织、卵巢组织、胆囊 组织、心组织、皮组织、脑或粪便中的一种或两者以上的混合物。 本专利技术中，制备得到的所述核酸不需提纯直接用于核酸分析。 本专利技术的一些实施例中，所述核酸分析包括扩增反应、酶反应、突变体位点检测或 SNPs检测。 本专利技术的一些实施例中，所述核酸分析为PCR、连接酶链反应、缺口 -LCR、修复链 反应、转录介导的扩增、自主序列复制、目标多核苷酸系列的选择性扩增、共有序列引物聚 合酶链反应、随机引物聚合酶链反应、基于核酸序列的扩增、链置换扩增、环介导等温扩增、 DNA甲基化反应、逆转录反应、DNA连接反应、核酸酶介导反应。 本专利技术的另一些实施例中，所述PCR反应包括常规PCR、RT-PCR(RNA)、qPCR。 本专利技术的另一些实施例中，所述逆转录反应包括普通RNA逆转录、RNAi逆转录、 SiRNA、LncRNA或miRNA逆转录。 本专利技术还提供了一种试剂盒，包括上文所述的裂解组合物。 本专利技术的一些实施例中，本专利技术提供的试剂盒中当所述裂解组合物中包括A和B 时，所述A与所述B的摩尔比为0. 1~200 :0. 45~1. 05。 本专利技术还提供了上述试剂盒用于裂解生物样品制备核酸的应用。 在本专利技术的一些实施例中，所述生物样品与所述试剂盒中的裂解组合物的质量体 积比为：1 :1~1 :1〇 (以g/mL计）。 本专利技术的一些实施例中，利用上述试剂盒裂解生物样品制备的所述核酸不需提纯 直接即可用于核酸分析。 本专利技术的一些实施例中，所述核酸分析包括酶反应、扩增反应、突变体位点检测或 SNPs检测。 本专利技术的一些实施例中，所述核酸分析为PCR、连接酶链反应、缺口 -LCR、修复链 反应、转录介导的扩增、自主序列复制、目标多核苷酸系列的选择性扩增、共有序列引物聚 合酶链反应、随机引物聚合酶链反应、基于核酸序列的扩增、链置换扩增、环介导等温扩增、 DNA甲基化反应、逆转录反应、DNA连接反应、核酸酶介导反应。 本专利技术的另一些实施例中，所述PCR反应包括常规PCR、RT-PCR、（RNA)、qPCR。 本专利技术的另一些实施例中，所述逆转录反应包括普通RNA逆转录、RNAi逆转录或 miRNA逆转录。 本专利技术还提供了一种制备核酸的方法，利用上文所述的裂解组合物裂解生物样 品，制得核酸。 本专利技术还提供了一种核酸分析的方法，所述核酸由上文所述的裂解组合物裂解生 物样品制得，不需提纯直接用于核酸分析。 具体的，本专利技术使用裂解组合物，从组织裂解后到核酸分析流程如下： 1，组织、细胞等生物样品中加入本专利技术提供的裂解组合物，所述生物样品与所述 裂解组合物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种裂解组合物，其特征在于，包括A或B或两者的组合物；所述A选自NaOH、KOH或者Ca(OH)2；所述B为PEG。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓惠，孙冬捷，庄青青，
申请(专利权)人：鸿慧上海生物科技有限公司，上海鸿慧健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31