本发明专利技术涉及用于预防或治疗包括人乳头瘤病毒变形体及免疫增强剂的宫颈癌的组合物。更具体地，融合蛋白通过诱导HPV16及18型抗原特异性免疫应答治疗由HPV引起的肿瘤，所述融合蛋白包括：融合多肽，该融合多肽被重组以使人乳头瘤病毒16及18型的抗原E6、E7的三维结构变形；信号肽，该信号肽用于分泌所述融合多肽；和免疫增强肽。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及用于预防或治疗宫颈癌的、包含人乳头瘤病毒（human papillomavirus;HPV)变形体及免疫增强剂的组合物。更具体地，融合蛋白通过诱导HPV16 和18型抗原特异性免疫应答治疗由HPV引起的肿瘤。所述融合蛋白包括融合多肽 (Polypeptide)、信号肽及免疫增强肽，所述融合多肽被重组，以使作为人乳头瘤病毒16和 18型的抗原E6、E7的三维结构变形。
技术介绍
众所周知，宫颈癌（cervicalcancer)是由于受人乳头瘤病毒16和18型等的高危 型人乳头瘤病毒的感染而引起的疾病（zurHausen，Hetal.BiochemBiophysActa1996，1288;F55-F78,MarkHetal.JNatlCancerInst1993,85;958-964)。在HPV蛋白 中E6、E7蛋白对宫颈癌的发病起主要作用，而且已确认在宫颈癌患者的肿瘤组织中表达 99%，从而成为制备用于治疗和预防宫颈癌的疫苗的主要祀物质（vonKnebelDoeberitz etal.Int.J.Cancer1992,51 ;831_834)J6与已知用作肿瘤抑制蛋白p53结合，通过促进 P53的分解，用细胞凋亡(apoptosis)途径阻止细胞周期的进行。E7与作为肿瘤抑制因子的 视网膜母细胞瘤蛋白pRb(retinoblastomaprotein)结合，通过使之失活并促进其分解，诱 导细胞周期进入S期（Cobriniketal.，TrendsBiochemSci1992,17:312-5)。然而，为治疗宫颈癌，在使用通过同时表达HPV16的E6、E7蛋白的核酸序列的组合 物的临床试验中，其疗效并不显著（GarciaFetal.ObstetGynecol2004,103;317_ 326)。此结果表明，仅施用HPV抗原是无法发生足以治疗或抑制宫颈癌的抗原特异性免疫应 答的。因此，为治疗子宫癌，需增强E6、E7的免疫原性（immunogenicity)，并且需消除所 述蛋白的致癌能力。
技术实现思路
技术问题 本专利技术的目的在于，提供用于预防或治疗由HPV引起的疾病的新型融合蛋白及编码所 述融合蛋白的多核苷酸(polynucleotide)。所述融合蛋白可抑制HPVE6、E7蛋白的致癌能 力并展现增强的免疫原性。本专利技术的另一个目的在于，提供表达所述融合蛋白的重组载体（recombinant vector)、包含所述载体的宿主细胞以及用所述宿主细胞表达融合蛋白的方法。本专利技术的另一个目的在于，提供用所述融合蛋白的、用于预防或治疗由HPV引起的 疾病的组合物。本专利技术的另一个目的在于，提供用所述组合物的、用于预防或治疗由HPV引起的疾 病的方法。 技术方案 为达到上述目的，一方面，本专利技术提供融合蛋白，该融合蛋白包括:融合多肽，即三维结 构变形的、源于人乳头瘤病毒16和18型并包含SEQIDNO: 1氨基酸序列的E6、E7;用于分泌 所述融合多肽的信号肽;和免疫增强肽。 另一方面，本专利技术提供多核苷酸，该多核苷酸用于编码本专利技术的融合蛋白。 另一方面，本专利技术提供重组载体，该重组载体包括本专利技术的多核苷酸。 另一方面，本专利技术提供宿主细胞，该宿主细胞由本专利技术的重组载体转化而成。另一方面，本专利技术提供用于表达本专利技术的融合蛋白的方法，该方法是通过培养本 专利技术的经转化的宿主细胞完成的。另一方面，本专利技术提供用于预防或治疗由人乳头瘤病毒引起的疾病的组合物，该 组合物包括作为活性成分的、选自本专利技术的融合蛋白、由表达所述融合蛋白的重组载体转 化而成的宿主细胞及其均楽Xhomogenate)中的一种或多种的物质。另一方面，本专利技术提供用于预防或治疗由人乳头瘤病毒引起的疾病的方法，该方 法包括向需要者施用有效剂量的本专利技术的组合物的步骤。有益效果 本专利技术所制备的融合蛋白通过诱导高的HPV16和18型抗原特异性免疫应答来治疗由HPV引起的肿瘤，所述融合蛋白包括为改变源于HPV16和18型E6、E7蛋白的三维结构而被重 组的融合蛋白、用于向细胞外分泌该融合蛋白的信号肽及免疫增强肽。【附图说明】图1展示了对抗癌模型中的C57BL/6小鼠皮下注射肿瘤细胞株TC-1并经过本专利技术 的GX-188E治疗后展示的HPV16的E6特异性⑶8+T细胞应答的图。 图2展示了对抗癌模型中的C57BL/6小鼠皮下注射肿瘤细胞株TC-1并经过本专利技术 的GX-188E治疗后展示的HPV16的E7特异性⑶8+T细胞应答的图。图3展示了对抗癌模型中的C57BL/6小鼠皮下注射肿瘤细胞株TC-1并经过本专利技术 的GX-188E治疗后展示的HPV18的E6特异性⑶8+T细胞应答的图。图4展示了对抗癌模型中的C57BL/6小鼠皮下注射肿瘤细胞株TC-1并经过本专利技术 的GX-188E治疗后展示的HPV18的E7特异性⑶8+T细胞应答的图。图5展示了对抗癌模型中的C57BL/6小鼠皮下注射肿瘤细胞株TC-1并经过本专利技术 的GX-188E治疗后展示的抗癌效果的图。【具体实施方式】下面将详细地说明本专利技术的内容。本专利技术涉及融合蛋白，该融合蛋白包括:源于人乳头瘤病毒16及18型并包含SEQ IDNO: 1氨基酸序列的三维结构变形的E6、E7融合多肽；用于分泌所述融合多肽的信号肽； 和免疫增强肽。本专利技术的融合蛋白包括融合多肽，该融合多肽被重组以使源于人乳头瘤病毒16及 18型的E6、E7的三维结构变形。更具体地，所述融合多肽由源于人乳头瘤病毒16型的E6蛋白 的第1~85位的氨基酸、E7蛋白的第1~65位的氨基酸、E6蛋白的第71~158位的氨基酸、E7 蛋白的第51~98位的氨基酸和源于人乳头瘤病毒18型的E6蛋白的第1~85位的氨基酸、E7 蛋白的第1~65位氨基酸、E6蛋白的第71~158位的氨基酸、E7蛋白的第51~105位的氨基酸 组成。最为具体地，融合多肽可包含SEQID NO:1的氨基酸序列。此外，所述信号肽指包括约20~30个氨基酸的肽，所述肽能将在细胞内表达的蛋 白，尤其将包含E6、E7融合多肽的蛋白分泌至细胞外。而且，用于编码所述肽的核酸序列被 称为"分泌信号序列"。由于本专利技术的E6、E7融合多肽是在受病毒感染的细胞的核内表达的 蛋白（nucleusprotein)，其免疫力弱。因此，由分泌信号序列表达的信号肽诱导三维结构 变形的E6、E7分泌至细胞外，从而增强抗原特异性体液免疫应答（humoralimmune response)及细胞免疫应答（cellularimmuneresponse)。所述信号肽可使用包括哺乳动物等的高等真核细胞内的信号肽，如tPA(组织型纤 溶酶原激活物）、HSVgDs，或可使用生长激素等的分泌信号序列。优选地，可使用tPA。更优 选地，可包含SEQID N0:2的氨基酸序列。此外，免疫增强肽指激活与免疫应答相关的细胞(如，树突状细胞等）以增强免疫 应答的肽。 所述免疫增强肽可使用CD40配体、Flt3配体(fms样酪氨酸激酶3配体）、鞭毛蛋白 或0X40等。优选地，可使用Flt3配体。所述Flt3配体是能够诱导树突状细胞（dendritic cell，DC)的增殖与成熟的因子，经抗原可增强免疫应答，而且在与肿瘤抗原融合时本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种多核苷酸，其包含：编码融合多肽的核酸序列，所述融合多肽用于转换源自人乳头瘤病毒16及18型并具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的E6和E7的三维(3D)结构；编码免疫增强肽的核酸序列；和编码信号肽的核酸序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：成永喆，徐相焕，徐裕锡，
申请(专利权)人：株式会社吉耐森，
类型：发明
国别省市：韩国;KR
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