牦牛肌肉嫩度主效等位基因检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术提供一种牦牛肌肉嫩度主效等位基因检测试剂盒，包括盒盖和盒体，还包括衬垫，所述衬垫上设有分为三排放置的6个容器孔，分别为：用于放置去离子水的去离子水容器孔，用于放置10%过硫酸铵的10%过硫酸铵容器孔，用于放置上样变性缓冲液的上样变性缓冲液容器孔，用于放置PCR反应液的PCR反应液容器孔，用于放置CAST*D的DNA标准样的CAST*D的DNA标准样容器孔，用于放置四甲基乙二胺的四甲基乙二胺容器孔；在每排容器孔之间，设有用于放置冰块的凹槽一和凹槽二。本实用新型专利技术的牦牛肌肉嫩度主效等位基因检测试剂盒将检测过程中所使用的多种试剂存放在一起，使用方便，检测快速且准确。

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及牦牛肌肉嫩度主效等位基因检测试剂盒。
技术介绍
牛肉嫩度受宰前和宰后的多种因素影响，但遗传对其也有重要作用。目前对普通牛肌肉嫩度从分子水平开展了大量研究，定位了一些与嫩度有关的QTL或主基因，确定了一些牛肉嫩度候选基因并阐明了其结构和群体遗传多态性，筛选出与牛肉嫩度紧密连锁的分子标记，部分分子标记已通过GeneSTARTenderness等开展商业检测。钙蛋白酶水解系统是一个普遍存在于人和动物机体内的高度复杂的调控体系，主要由钙蛋白酶（CAPN）及钙蛋白酶抑制蛋白（CAST）、骨骼肌特异性钙蛋白酶（P94）组成。CAPN降解肌细胞肌原纤维，CAST高效、专一性的抑制CAPN的水解，即CAST广泛存在于细胞内，可以识别钙离子激活后引起的钙蛋白酶构象变化，并与之结合，从而抑制钙蛋白酶活性。CAST作为CAPN内源性特异抑制因子，屠宰后24hCAST的活性通常能解释牛肉嫩度约40%的差异，因此也确定为嫩度候选基因。普通牛CAST基因位于第7号染色体，CAST基因突变与一些普通牛品种的肌肉嫩度相关；猪CAST基因对猪肉的蒸煮损失、系水力、多汁性、背膘厚、大理石花纹等均有影响；绵羊CAST基因表达量与背最长肌失水率相关。牦牛是青藏高原及其周边高寒牧区的特有牛种，也是重要的生产和生活资源。近年来，国内外从比较基因组学、牦牛起源、演化和分类等方面，对牦牛遗传特性开展了较多研究，也对一些重要经济性状候选基因进行了探索，但均未见报道相应基因对牦牛肌肉嫩度的作用。
技术实现思路
本技术提供了牦牛肌肉嫩度主效等位基因检测试剂盒，能够方便的对牦牛肌肉嫩度主效等位基因进行检测。本技术提供一种牦牛肌肉嫩度主效等位基因检测试剂盒，包括盒盖（1）和盒体（2），还包括衬垫（3），所述衬垫（3）上设有分为三排放置的6个容器孔，分别为：用于放置去离子水的去离子水容器孔（41），用于放置10%过硫酸铵的10%过硫酸铵容器孔（42），用于放置上样变性缓冲液的上样变性缓冲液容器孔（43），用于放置PCR反应液的PCR反应液容器孔（44），用于放置CAST*D的DNA标准样的CAST*D的DNA标准样容器孔（45），用于放置四甲基乙二胺的四甲基乙二胺容器孔（46）；在每排容器孔之间，设有用于放置冰块的凹槽一（51）和凹槽二（52）。本技术的牦牛肌肉嫩度主效等位基因检测试剂盒将检测过程中所使用的多种试剂存放在一起，使用方便，检测快速且准确。附图说明附图用来提供对本技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本实用新型的实施例一起用于解释本技术，并不构成对本技术的限制。在附图中：图1为本技术的牦牛肌肉嫩度性状等位基因的SSCP带型图。图2为牦牛肌肉嫩度主效等位基因检测试剂盒结构图。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本技术，但并不限定本技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为常规生化试剂。实施例1本技术所述的牦牛肌肉嫩度主效等位基因检测试剂盒的具体结构参见图2，其中，1：盒盖；2：盒体；3：衬垫，衬垫上设有分为三排放置的6个容器孔，分别为：用于放置去离子水的去离子水容器孔41，用于放置10%过硫酸铵的10%过硫酸铵容器孔42，用于放置上样变性缓冲液的上样变性缓冲液容器孔43，用于放置PCR反应液的PCR反应液容器孔44，用于放置CAST*D的DNA标准样的CAST*D的DNA标准样容器孔45，用于放置TEMED（四甲基乙二胺）的四甲基乙二胺容器孔46；在每排容器孔之间，设有用于放置冰块的凹槽一51和凹槽二52。其中，上样变性缓冲液包括98%去离子甲酰胺、0.025%溴酚蓝、0.025%二甲苯氰、10mmol/LEDTA，pH8.0；PCR反应的反应液为：总体积20μL，其中DNA模板0.8μL，上、下游引物各0.4μL，TaKaRaPremixTaq聚合酶11μL，灭菌超纯水7.4μL。CAST*D的DNA标准样的核苷酸序列为：cgtagtgatgctttctaaggcccacttgacttcacattccaggatatctggctctaggtgagtgatcacaccatcgtgattatcttggtcgtgaagatctctaggtgagataaaaccaaggtaaagagttaaaagtaagtatggttaaaagggacttccaccatgactcatttggtaaagaatctgcctgcaatgcaagagacccagcttccatccctgggtcaggaagatcccctagagaagggaatggcaacttactccagtattcttgcctggagaattccattgacagagaaaccctgcaggctacagttcatgaggttgcaaagagtcggccacgattgagtgactaacactactacactgctgtggttaaaaggaggtggaggacaaagcagggtgta应用本技术的试剂盒检测和鉴别牦牛肌肉嫩度主效等位基因的方法如下：（1）样品采集：牦牛颈静脉采血10ml，ACD抗凝，-70℃冻存；（2）基因组DNA的提取：用苯酚-氯仿法从冻存血样中提取基因组DNA；（3）聚合酶链式反应：PCR反应体系：总体积20μL，其中DNA模板0.8μL（50ng/μL），上、下游引物各0.4μL，TaKaRaPremixTaq聚合酶11μL，灭菌超纯水7.4μL。反应条件：95℃预变性2min；94℃变性30s，64℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；最后72℃延伸10min；引物序列为：CAST-F：5′-CGTAGTGATGCTTTCTAAGGC-3′；CAST-R：5′-TACACCCTGCTTTGTCCTCCA-3′。（4）PCR产物的SSCP检测：取2μL的PCR产物加入8μL变性上样缓冲液（98%去离子甲酰胺、0.025%溴酚蓝、0.025%二甲苯氰、10mmol/LEDTApH8.0），98℃变性10min，迅速冰浴5min后，上样到10%非变性聚丙烯酰胺凝胶(Acr:Scr=39:1)，300V电压、电泳室温度4℃、电泳槽水循环温度4℃电泳18h，银染法显色后判定基因型。（5）结果判断：通过对牦牛CAST基因第三内含子的PCR-SSCP检测，发现有6个等位基因，携带CAST*D标准样带型的样品即为携带影响牦牛肌肉嫩度等位基因的个体。实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
牦牛肌肉嫩度主效等位基因检测试剂盒，包括盒盖（1）和盒体（2），其特征在于：还包括衬垫（3），所述衬垫（3）上设有分为三排放置的6个容器孔，在每排容器孔之间，设有用于放置冰块的凹槽一（51）和凹槽二（52）；第一排设置竖向的两个容器孔，分别为容器孔一（41）和容器孔二（42），第二排设置竖向的三个容器孔，分别为容器孔四（44）、容器孔五（45）和容器孔六（46），第三排设置一个容器孔，为容器孔三（43）；所述容器孔三（43）的直径大于所述容器孔一（41）、容器孔二（42）的直径；所述容器孔一（41）、容器孔二（42）的直径大于所述容器孔四（44）、容器孔五（45）和容器孔六（46）的直径。

【技术特征摘要】
1.牦牛肌肉嫩度主效等位基因检测试剂盒，包括盒盖（1）和盒体（2），其特征在于：还包
括衬垫（3），所述衬垫（3）上设有分为三排放置的6个容器孔，在每排容器孔之间，设有用于
放置冰块的凹槽一（51）和凹槽二（52）；第一排设置竖向的两个容器孔，分别为容器孔一
（41）和容器孔二（42），第二排设置竖向的三个容...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡江，牛晓亮，刘秀，李彦清，罗玉柱，
申请(专利权)人：甘肃农业大学，
类型：新型
国别省市：甘肃;62