一种制备具有抗凝血活性的海藻寡糖的方法技术

本发明专利技术是关于一种制备具有抗凝血活性的海藻寡糖的方法。具体而言，本发明专利技术的方法是将由马尾藻、石花菜或青海菜制得的海藻多糖样本经酵素水解，而获得具有抗凝血活性的海藻寡糖，其中该酵素是泡囊假单胞菌(Pseudomonas vesicularis)及/或杀鲑产气单胞菌(Aeromonas salmonicida)的海洋菌株受来自马尾藻、石花菜或青海菜的海洋多糖诱导而产生的。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】 交叉引用的相关申请 本申请要求2014年9月23日提交的，申请号为201410489425. 3,专利技术名称为"一 种具有抗凝血活性海藻寡糖的制备方法"的中国专利申请的优先权，其说明书以全文引用 的方式的并入本文中。
本专利技术涉及。本专利技术也涉及一种由所 述方法所制得的具抗凝血活性的海藻寡糖，以及含有该海藻寡糖的组合物。
技术介绍
某些海藻多糖及寡糖因其复杂的结构组成，以及其生理活性的重要性，多年来 已被研究探讨，不少具有硫酸基的多糖及寡糖具有独特的生理活性，如肝素（heparin) 具抗凝血功效。举例来说，带有硫酸基且可作为抗凝血剂的海藻多糖胶有鹿角菜胶 (carrageenan)及岩藻聚糖（fucoidan) 〇 岩藻聚糖（fucoidan)是褐藻及某些海洋无脊椎动物（如：海胆、海参）所含的物 质，主要结构包含大量的L-岩藻糖（L-fucose)及硫酸酯基团。然而，每种褐藻的岩藻聚糖 的结构组成皆有所差异，除了岩藻糖及硫酸基团以外，还包含了其他单糖，因此在生理活性 上会有不同的变化。已知从裙带菜（Undaria pinnatifida sporophyll)所产生的岩藻聚 糖经由酵素水解处理，获得较低分子量的岩藻聚糖，于抗凝血实验结果呈现具有延迟血液 凝结的效果。此领域尚有研究显示，海藻多糖经酵素水解处理后，一般尚需经化学方法提高 硫酸基含量，以提高抗凝血活性，然而，以化学方法（如加入氯磺酸-二甲基甲酰胺试剂） 提高硫酸基含量必须使用化学试剂，这些试剂多有毒性，需要进一步的移除及纯化，制备成 本较高。 藻类除了提供海中生物栖息、觅食、繁衍、避难之外，对于人类的健康及医疗，也有 不可抹杀的贡献。海藻中的某些特殊成分是人体内所需的重要元素、胺基酸、维生素的来 源。在古代中国和日本等国家，都有以海藻作为食物及药物的证据，古医典包括《本草纲 目》、《本草经集注》、《海药本草》及《本草拾遗》等都有用海藻治疗各种疾病的相关记载。海 藻也是印度尼西亚及其他东南亚国家的传统药材，用于退烧、治咳，以及治疗气喘、痔疮、流 鼻涕、肠胃不适及泌尿疾病等。日本人喜欢食用海藻，以加强身体抗癌、抗肿瘤的能力，且可 有效改善糖尿病症状及纾解紧张压力。 因此，需要提供，特别是以天然海藻 为料源，无需以化学方法提高硫酸基含量，而可产生具有抗凝血活性的海藻寡糖。
技术实现思路
本专利技术非可预期地发现，以含有来自马尾藻、石花菜或青海菜的海藻多糖的细菌 培养液培养海洋菌株，即泡囊假单胞菌（Pseudomonas vesicularis)及/或杀鲑产气单胞 菌（Aeromonas salmonicida)，可诱导该等海洋菌株产生适合的糖分解酶，而使用含有该等 糖分解酶的酵素液，对于由马尾藻、石花菜或青海菜所制得的海藻多糖样本进行水解反应， 可达到提高的水解效率，且所获得的海藻寡糖具有优异的抗凝血活性，无需经由额外的化 学方法添加硫酸基。 因此，在一方面，本专利技术提供一种制备具抗凝血活性的海藻寡糖的方法，其包括： (a)将海洋菌株培养于含有海藻多糖的细菌培养液，使该海洋菌株受诱导产生 糖分解酶，然后将所获得的含有该糖分解酶的海洋菌株培养物予以分离，去除菌体，以获 得含有该糖分解酶的粗酵素液，其中该海藻多糖是由选自马尾藻、石花菜、青海菜及其任 何组合所组成的群组的海藻所制得，以及该海洋菌株是选自泡囊假单胞菌（Pseudomonas vesicularis)、杀鲑产气单胞菌（Aeromonas salmonicida)及其组合所组成的群组； (b)提供海藻多糖样本，其是由选自马尾藻、石花菜、青海菜及其任何组合所组成 的群组的海藻所制得；以及 (c)于步骤（b)的海藻多糖样本中，加入步骤（a)所得的粗酵素液，进行水解反应， 以产生具抗凝血活性的海藻寡糖。 在部分具体实施例中，本专利技术用以诱导海洋菌株及产制海藻寡糖所使用的海藻多 糖是来自相同海藻。 在一特定实施例中，所述步骤（a)的细菌培养液所含的海藻多糖是由马尾藻所制 得，以及步骤（b)的海藻多糖样本是由马尾藻所制得。 在一特定实施例中，所述步骤（a)的细菌培养液所含的海藻多糖是由石花菜所制 得，同时步骤（b)的海藻多糖样本是由石花菜所制得。 在一特定实施例中，所述步骤（a)的细菌培养液所含的海藻多糖是由青海菜所制 得，同时步骤（b)的海藻多糖样本是由青海菜所制得。 在部分具体实施例中，所述步骤（a)的细菌培养液所含的海藻多糖或所述步骤 (b)的海藻多糖样本是将所述海藻以热萃处理所获得的海藻多糖萃取液。 在部分具体实施例中，本专利技术的方法可进一步包括步骤（d)，其为将步骤（c)所得 的海藻寡糖依分子量大小予以分离。 在一特定实施例中，步骤（c)所得的海藻寡糖可经分离成分子量3kDa以下的组分 或分子量介于5kDa与3kDa之间的组分。 在部分具体实施例中，步骤（c)或（d)所得的海藻寡糖可经干燥处理。 在另一方面，本专利技术也提供一种具抗凝血活性的海藻寡糖，该海藻寡糖是由此处 所述的方法制得。 在又一方面，本专利技术提供一种抗凝血活性的组合物，其包括此处所述的海藻寡糖 作为活性成份。 在部分具体实施例，本专利技术的抗凝血活性的组合物是用于口服投予。 本专利技术的一个或多个具体实施例的细节示于下面的描述。本专利技术的其它特征或优 点，从以下一些具体实施例的详细描述以及后面的申请专利范围当中将更为清楚明确。【具体实施方式】 除非另有指明，所有在此处使用的技术性和科学性术语具有如同本专利技术所属领域 技术人员一般所了解的意义。 本文所使用的"一"乙词，如未特别指明，是指至少一个（一个或一个以上）的数 量。 本专利技术是关于。具体而言，本专利技术的 方法是将由马尾藻、石花菜或青海菜制得的海藻多糖样本经酵素水解，而获得具有抗凝血 活性的海藻寡糖，其中该酵素是泡囊假单胞菌（Pseudomonas vesicularis)及/或杀鲑产 气单胞菌（Aeromonas salmonicida)的海洋菌株受来自马尾藻、石花菜或青海菜的海洋多 糖诱导而产生者。 具体而言，本专利技术的方法包括： (a)将海洋菌株培养于含有海藻多糖的细菌培养液，使该海洋菌株受诱导产生 糖分解酶，然后将所获得的含有该糖分解酶的海洋菌株培养物予以分离，去除菌体，以获 得含有该糖分解酶的粗酵素液，其中该海藻多糖是由选自马尾藻、石花菜、青海菜及其任 何组合所组成的群组的海藻所制得，以及该海洋菌株是选自泡囊假单胞菌（Pseudomonas vesicularis)、杀鲑产气单胞菌（Aeromonas salmonicida)及其组合所组成的群组； (b)提供海藻多糖样本，其是由选自马尾藻、石花菜、青海菜及其任何组合所组成 的群组的海藻所制得；以及 (c)于步骤（b)的海藻多糖样本中，加入步骤（a)所得的粗酵素液，进行水解反应， 以产生具抗凝血活性的海藻寡糖。 本文所述泡囊假单胞菌及杀鲑产气单胞菌是常见的水产动物感染性细菌，可以常 规方式分离自河口、海水沿岸等环境，亦可自陆上淡水、废水、土壤等其他环境中分离，并可 利用洋菜培养基进一步筛选出具较佳分解洋菜能力的菌株。 本文所述"马尾藻"是指马尾藻属（Sargassum)的藻类，属于褐藻，常见种类包 括：荚托马尾藻本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备具抗凝血活性的海藻寡糖的方法，其包括：(a)将海洋菌株培养于含有海藻多糖的细菌培养液，使该海洋菌株受诱导产生糖分解酶，然后将所获得的含有该糖分解酶的海洋菌株培养物予以分离，去除菌体，以获得含有该糖分解酶的粗酵素液，其中该海藻多糖是由选自马尾藻、石花菜、青海菜及其任何组合所组成的群组的海藻所制得，以及该海洋菌株是选自泡囊假单胞菌(Pseudomonas vesicularis)、杀鲑产气单胞菌(Aeromonas salmonicida)及其组合所组成的群组；(b)提供海藻多糖样本，其是由选自马尾藻、石花菜、青海菜及其任何组合所组成的群组的海藻所制得；以及(c)于步骤(b)的海藻多糖样本中，加入步骤(a)所得的粗酵素液，进行水解反应，以产生具抗凝血活性的海藻寡糖。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：潘崇良，江孟灿，吴绍祺，李樵，黄立瞱，陈柏璇，
申请(专利权)人：潘崇良，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71