一种天然脱落酸的分离纯化方法，属于生物发酵——生物化学农药生产领域，该方法将脱落酸发酵液经板框过滤，得到的板框滤液用超滤膜、浓缩膜处理，得到浓缩液，浓缩液经酸化后萃取，将萃取液预处理后添加洗脱剂，经吸附柱层析吸附杂质，层析液减压浓缩，浓缩液可加入非极性溶剂，过滤、干燥得到脱落酸产品。本发明专利技术的方法简单、方便，从发酵液中提取脱落酸纯度高、收率高，母液中产品残留少。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物发酵一一生物化学农药生产领域，具体属于。
技术介绍
脱落酸是一种具有全面生理功能的内源植物激素，是五大植物激素之一，是植物重要生长调节剂，是平衡植物内源激素和有关生长活性物质代谢的关键因子，具有促进植物平衡吸收水、肥和协调体内代谢的能力，可有效调控植物的根/冠和营养生长与生殖生长，对提高农作物的品质、产量具有重要作用。脱落酸是一个市场前景非常好的产品，在农业生产上有广阔的应用前景，能产生巨大的经济效益和社会效益。目前脱落酸在市场上的价格依然很高，2005年，美国Sigma公司的98%天然脱落酸(商品号A4906_1MG)1毫克价格为人民币3600元，无论是在国内还是国际市场，脱落酸产品都将会长期处于供不应求的局面。目前，常用的脱落酸生产方法为生物发酵法，该方法降低了天然脱落酸的生产成本，但存在收率低的缺陷，如何高效率、低成本的从发酵液中提取得到高纯度的天然脱落酸成为研究重点。
技术实现思路
本专利技术针对目前天然脱落酸纯化效率低、成本高的不足，提供一种收率高，成本低的天然脱落酸的分离纯化方法。本专利技术的具体技术方案如下。—种天然脱落酸的分离纯化方法，依次包含以下步骤: (1)脱落酸发酵液经板框过滤得到板框滤液； (2)板框滤液用超滤膜处理，得到超滤浓缩液和超滤透析液； (3)超滤透析液通过浓缩膜进行浓缩，得到膜浓缩液； (4)膜浓缩液经酸化后萃取，萃取液经预处理后添加洗脱剂，经吸附柱层析吸附杂质后得到层析液； (5 )层析液减压浓缩，冷却结晶，过滤、干燥得到脱落酸产品。步骤(1)中板框滤液pH调至4.8-7.0。步骤(2)中超滤膜的截留分子量为3000-30000。步骤(3)中浓缩膜为反渗透膜或纳滤膜或两者的结合。步骤(3)中浓缩膜的截留分子量为50-200。步骤(4)中萃取的萃取剂为乙酯类、丁酯类、异戊酯类中的一种或几种。萃取液预处理为将萃取液浓缩至浓度为60-120mg/ml。洗脱剂优选为氯仿、二氯甲烷、石油醚、正己烷中的一种或几种。步骤(4)中吸附柱层析的吸附剂可为氧化铝、硅胶、硅酸镁中的一种或几种。步骤(5)中所述的减压浓缩，其真空度可优选为-0.08—0.095Mpa，夹套循环水温度可优选为45~60°C，料温可优选为30~40°C。步骤(5)中层析液经减压浓缩，浓缩液中可通过添加非极性溶剂促进母液再次析出粉，增加脱落酸产品的一次产率。非极性溶剂优选为己烷、石油醚、三氯甲烷、四氯化碳，其比例为层析浓缩液体积的0.7-1.0倍。本专利技术的有益效果为:本专利技术的方法简单、方便，从发酵液中提取脱落酸纯度高、收率尚，母液中广品残留少。【具体实施方式】以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例1。脱落酸发酵液经板框过滤得到板框滤液，pH调至4.9，用截留分子量为3000的超滤膜处理，得到超滤透析液，超滤透析液通过截留分子量为100的纳滤膜进行浓缩，得到浓缩液，浓缩液经酸化后加乙酯萃取，将萃取液浓缩至60 mg/ml，然后添加二氯甲烷，经硅胶柱层析吸附杂质，得到的层析液减压浓缩，真空度为-0.084Mpa，夹套循环水温度为60°C，料温为40°C，冷却结晶、过滤、干燥得到含量为96%的脱落酸产品。实施例2。脱落酸发酵液经板框过滤得到板框滤液，pH调至5.5，用截留分子量为5000的超滤膜处理，得到超滤透析液，超滤透析液通过截留分子量为150的纳滤膜进行浓缩，得到浓缩液，浓缩液经酸化后加丁酯萃取，将萃取液浓缩至70 mg/ml，然后添加石油醚，经氧化铝柱层析吸附杂质，得到的层析液减压浓缩，真空度为-0.09Mpa，夹套循环水温度为58°C，料温为38°C，浓缩结束后加入0.8倍的己烷，冷却结晶、过滤、干燥得到含量为95.2%的脱落酸τ?: 口广PR ο实施例3。脱落酸发酵液经板框过滤得到板框滤液，pH调至6.0，用截留分子量为10000的超滤膜处理，得到超滤透析液，超滤透析液通过截留分子量为50的反渗透膜进行浓缩，得到浓缩液，浓缩液经酸化后加乙酸异戊酯萃取，将萃取液浓缩至80 mg/ml，然后添加氯仿，经硅酸镁柱层析吸附杂质，得到的层析液减压浓缩，真空度为-0.092Mpa，夹套循环水温度为45 °C，料温为30 °C，浓缩过程中加入0.7倍的三氯甲烷，冷却结晶、过滤、干燥得到含量为97%的脱落酸产品。实施例4。脱落酸发酵液经板框过滤得到板框滤液，pH调至6.5，用截留分子量为30000的超滤膜处理，得到超滤透析液，超滤透析液通过截留分子量为50的反渗透膜及分子量为200的纳滤膜进行浓缩，得到浓缩液，纳滤浓缩液经酸化后加乙酸异戊酯萃取，将萃取液浓缩至100 mg/ml，然后添加正己烷，经硅酸镁柱层析吸附杂质，得到的层析液减压浓缩，真空度为-0.093Mpa，夹套循环水温度为50°C，料温为33°C，冷却结晶，过滤后滤液加入0.9倍的四氯化碳，混合干燥得到含量为95%的脱落酸产品。实施例5。脱落酸发酵液经板框过滤得到板框滤液，pH调至7.0，用截留分子量为10000的超滤膜处理，得到超滤透析液，超滤透析液通过截留分子量为50的反渗透膜及分子量为150的纳滤膜进行浓缩，得到浓缩液，纳滤浓缩液经酸化后加丁酯萃取，将萃取液浓缩至90 mg/ml，然后添加二氯甲烷，经硅胶柱层析吸附杂质，得到的层析液减压浓缩，真空度为-0.088Mpa，夹套循环水温度为54°C，料温为34°C，浓缩后滤液加入0.8倍的石油醚，冷却结晶，混合干燥得到含量为97.5%的脱落酸产品。实施例6。脱落酸发酵液经板框过滤得到板框滤液，pH调至5.5，用截留分子量为10000的超滤膜处理，得到超滤透析液，超滤透析液通过截留分子量为150的纳滤膜进行浓缩，得到浓缩液，纳滤浓缩液经酸化后加乙酯萃取，将萃取液浓缩至110 mg/ml，然后添加石油醚，经氧化铝柱层析吸附杂质，得到的层析液减压浓缩，真空度为-0.09Mpa，夹套循环水温度为55°C，料温为35°C，冷却结晶，过滤后滤液加入0.7倍的石油醚，混合干燥得到含量为95.8%的脱落酸产品。实施例7。脱落酸发酵液经板框过滤得到板框滤液，pH调至4.8，用截留分子量为10000的超滤膜处理，得到超滤透析液，超滤透析液通过截留分子量为50的反渗透膜及分子量为150的纳滤膜进行浓缩，得到浓缩液，纳滤浓缩液经酸化后加乙酯萃取，将萃取液浓缩至100 mg/ml，然后添加氯仿，经硅胶柱层析吸附杂质，得到的层析液减压浓缩，真空度为-0.092Mpa，夹套循环水温度为48°C，料温为32°C，冷却结晶，干燥得到含量为95%的脱落酸产品。【主权项】1.，其特征在于:依次包含以下步骤: (1)脱落酸发酵液经板框过滤得到板框滤液； (2)板框滤液用超滤膜处理，得到超滤浓缩液和透析液； (3)超滤透析液通过浓缩膜进行浓缩，得到膜浓缩液； (4)膜浓缩液经酸化后萃取，萃取液经预处理后添加洗脱剂，经吸附柱层析吸附杂质后得到层析液； (5 )层析液减压浓缩，冷却结晶，过滤、干燥得到脱落酸产品。2.根据权利要求1所述的，其特征在于步骤(1)中板框滤液pH调至4.8-7.0。3.根据权利要求1所述的，其特征在于步骤(2)中超滤膜的截留分子量为3000~30000。4.根本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种天然脱落酸的分离纯化方法，其特征在于：依次包含以下步骤：（1）脱落酸发酵液经板框过滤得到板框滤液；（2）板框滤液用超滤膜处理，得到超滤浓缩液和透析液；（3）超滤透析液通过浓缩膜进行浓缩，得到膜浓缩液；（4）膜浓缩液经酸化后萃取，萃取液经预处理后添加洗脱剂，经吸附柱层析吸附杂质后得到层析液；（5）层析液减压浓缩，冷却结晶，过滤、干燥得到脱落酸产品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周金龙，彭海刚，雷文，赵南，
申请(专利权)人：江西新瑞丰生化有限公司，
类型：发明
国别省市：江西;36
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