本发明专利技术公开了一种古代羊毛织品双抗夹心法检测试纸的制备方法，采用以下步骤：采用柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备出金纳米粒子；制备金标兔抗角蛋白抗体；组装试纸条，将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装在PVC底板上，用切刀切割成试纸条，放入带干燥剂的铝箔袋中密封储存；取1g纺织品痕迹样，溶解于50-100ml、PH为8.2的Tris-HCl缓冲液中，搅拌均匀，2h后取一滴上清液滴在组装好的试纸条的样品垫上；5-10min后，检测线和质控线均显出红色，说明样品中含有角蛋白，该纺织品痕迹为羊毛织品的痕迹。相比现有技术，该方法简单快捷，灵敏度高，特异性强，结果直观，更适合考古现场分析。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于古代羊毛织品痕迹的检测领域，尤其涉及一种快速检测古代羊毛织品的双抗夹心法检测试纸的制备方法。
技术介绍
古代在北方地区毛织品广泛应用于服饰和毛毯，而羊毛织物占绝大多数。出土的大量毛织物其精美程度不亚于出土的丝绸文物，这不仅是古代纺织技术演变的重要实物证据，也对研究古代社会环境和人文活动具有重要参考价值。而现有技术中缺乏对古代丝织品中羊毛角蛋白鉴定的深入研究。羊毛角蛋白是一种硬化，不易溶解的蛋白质，其中既有含羧基等在内的酸性基，也有含胺基，亚胺基等在内的碱性基，所以在酸、碱、盐、氧化剂、还原剂、卤素等中羊毛都具有一定的不稳定性。在丝织品文物鉴定中，这对羊毛制品的鉴别造成了一定困难。现有技术中，基于Elisa法的原理，如何能够在考古现场快捷，方便，准确地鉴别出羊毛织品，为古代羊毛织品发展研究提供依据，是现有技术需要解决的问题。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供，从而针对上述现有技术存在的问题提供一种直观的，快捷的检测方法。为此，本专利技术所采用的技术方案是:，其特征在于采用以下步骤: A)制备金纳米粒子，采用梓檬酸钠还原氯金酸的方法制备出粒径为25-50nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液水浴加热至沸腾，迅速加入1.0-1.5ml的质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液，煮沸7-10min，溶液呈现出红色，即制得金纳米溶胶； B)制备金标兔抗角蛋白抗体，用0.lmo 1 /1的ΚΚ03溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.2，搅拌的加入兔抗角蛋白抗体20-50μ1，所述抗体浓度为3.15mg/ml ；接着加入5ml的质量浓度为1%_10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000-11000r/min下离心40-60min，弃去上清液;将沉淀溶于0.0lmol/Ι的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tri s-HCl溶液，所述Tr is-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20，1%的牛血清蛋白，5%的蔗糖;于4°C下保存； C)组装试纸条，用喷膜机将5-20μ1、用PH8.2的Tris-HCl溶液稀释100-400倍的鼠抗角蛋白抗体溶液和羊抗兔抗体溶液分别喷在长2.5cm、宽4mm的硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，37°C烘干备用;将用质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH为8.2的Tr i s-HCl溶液稀释10_20倍的金标记的兔抗角蛋白抗体包被在胶体金结合垫上，37°C烘干备用;将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装在PVC底板上，用切刀切割成4_宽的试纸条，放入带干燥剂的铝箔袋中密封储存； D)取lg纺织品痕迹样，溶解于50-100ml、PH为8.2的Tris-HCl缓冲液中，搅拌均匀，2h后取一滴上清液滴在组装好的试纸条的样品垫上；5-10min后，检测线和质控线均显出红色，说明样品中含有角蛋白，该纺织品痕迹为羊毛织品的痕迹。本专利技术的有益成果是:本专利技术采用双抗夹心免疫胶体金层析对古代羊毛织品进行检测，相比现有技术，该方法简单快捷，灵敏度高，特异性强，结果直观，更适合考古现场分析。【具体实施方式】实施例1采用以下步骤: A)制备金纳米粒子，采用梓檬酸钠还原氯金酸的方法制备出粒径为25nm的金纳米粒子;即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液水浴加热至沸腾，迅速加入1.0ml的质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液，煮沸7min，溶液呈现出红色，即制得金纳米溶胶； B)制备金标兔抗角蛋白抗体，用0.lmo 1 /1的KW03溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.2，搅拌的加入兔抗角蛋白抗体2(^1，所述抗体浓度为3.1511^/1]11;接着加入51]11的质量浓度为1%%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000r/min下离心60min，弃去上清液;将沉淀溶于0.0lmol/Ι的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris_HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20，1%的牛血清蛋白，5%的蔗糖;于41下保存； C)组装试纸条，用喷膜机将5μ1、用PH8.2的Tris-HCl溶液稀释100倍的鼠抗角蛋白抗体溶液和羊抗兔抗体溶液分别喷在长2.5cm、宽4mm的硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，37°C烘干备用;将用质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH为8.2的Tris-HCl溶液稀释10倍的金标记的兔抗角蛋白抗体包被在胶体金结合垫上，37°C烘干备用;将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装在PVC底板上，用切刀切割成4_宽的试纸条，放入带干燥剂的铝箔袋中密封储存； D)取lg纺织品痕迹样，溶解于50ml、PH为8.2的Tris-HCl缓冲液中，搅拌均匀，2h后取一滴上清液滴在组装好的试纸条的样品垫上;5min后，检测线和质控线均显出红色，说明样品中含有角蛋白，该纺织品痕迹为羊毛织品的痕迹。实施例2采用以下步骤: A)制备金纳米粒子，采用梓檬酸钠还原氯金酸的方法制备出粒径为40nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液水浴加热至沸腾，迅速加入1.25ml的质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液，煮沸8min，溶液呈现出红色，即制得金纳米溶胶； B)制备金标兔抗角蛋白抗体，用0.lmo 1 /1的KW03溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.2，搅拌的加入兔抗角蛋白抗体35口1，所述抗体浓度为3.1511^/1]11;接着加入51]11的质量浓度为5%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在0000r/min下离心50min，弃去上清液;将沉淀溶于0.0lmol/Ι的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris_HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20，1%的牛血清蛋白，5%的蔗糖;于41下保存； C)组装试纸条，用喷膜机将12μ1、用PH8.2的Tris-HCl溶液稀释250倍的鼠抗角蛋白抗体溶液和羊抗兔抗体溶液分别喷在长2.5cm、宽4mm的硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，37°C烘干备用;将用质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH为8.2的Tr is-HCl溶液稀释15倍的金标记的兔抗角蛋白抗体包被在胶体金结合垫上，37°C烘干备用;将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装在PVC底板上，用切刀切割成4_宽的试纸条，放入带干燥剂的铝箔袋中密封储存； D)取lg纺织品痕迹样，溶解于75ml、PH为8.2的Tris-HCl缓冲液中，搅拌均匀，2h后取一滴上清液滴在组装好的试纸条的样品垫上;8min后，检测线和质控线均显出红色，说明样品中含有角蛋白，该纺织品痕迹为羊毛织品的痕迹。实施例3采用以下步骤: A)制备金纳米粒子，采用梓檬酸钠还原氯金酸的方法制备出粒径为50nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液水浴加热至沸腾，迅速加入1.5ml的质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种古代羊毛织品双抗夹心法检测试纸的制备方法，其特征在于采用以下步骤：A)制备金纳米粒子，采用柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备出粒径为25‑50nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液水浴加热至沸腾，迅速加入1.0‑1.5ml的质量浓度为1%的柠檬酸钠溶液，煮沸7‑10min，溶液呈现出红色，即制得金纳米溶胶；B) 制备金标兔抗角蛋白抗体，用0.1mol/l的K2CO3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.2，搅拌的加入兔抗角蛋白抗体20‑50μl，所述抗体浓度为3.15mg/ml；接着加入5ml的质量浓度为1%‑10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000‑11000r/min下离心40‑60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris‑HCl溶液，所述Tris‑HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温‑20,1%的牛血清蛋白，5%的蔗糖；于4℃下保存；C) 组装试纸条，用喷膜机将5‑20μl、用PH 8.2的Tris‑HCl溶液稀释100‑400倍的鼠抗角蛋白抗体溶液和羊抗兔抗体溶液分别喷在长2.5cm、宽4mm的硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，37℃烘干备用；将用质量浓度比例为0.15%的吐温‑20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH为8.2的Tris‑HCl溶液稀释10‑20倍的金标记的兔抗角蛋白抗体包被在胶体金结合垫上，37℃烘干备用；将样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次组装在PVC底板上，用切刀切割成4mm宽的试纸条，放入带干燥剂的铝箔袋中密封储存；D)取1g纺织品痕迹样，溶解于50‑100ml、PH为8.2的Tris‑HCl缓冲液中，搅拌均匀，2h后取一滴上清液滴在组装好的试纸条的样品垫上；5‑10min后，检测线和质控线均显出红色，说明样品中含有角蛋白，该纺织品痕迹为羊毛织品的痕迹。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：胡智文，苏孝鹏，王秉，
申请(专利权)人：浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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