用于在真菌细胞中表达基因的启动子制造技术

本发明专利技术涉及用于在真菌细胞中表达基因的启动子，具体地涉及一种分离的启动子，和包含可操作地连接于编码多肽的多核苷酸的此类启动子的构建体、载体和真菌宿主细胞。本发明专利技术亦涉及产生此类多肽的方法。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】 本专利技术申请是基于申请日为2011年11月30日、申请号为201180066380. 3 (国际 申请号为PCT/US2011/062663)、名称为"用于在真菌细胞中表达基因的启动子"的专利技术专利 申请的分案申请。 对相关申请的交叉引用 本申请要求2010年11月30日提交的美国临时申请系列号61/418, 302的权益， 该申请通过提述并入本文。 涉及序列表 本申请包含计算机可读形式的序列表。所述计算机可读形式通过提述并入本文。 专利技术背景
本专利技术涉及产生多肽的方法。本专利技术亦涉及分离的启动子和涉及包含可操作地连 接于编码多肽的多核苷酸的启动子的核酸构建体、载体和宿主细胞。
技术介绍
在真菌宿主细胞，例如丝状真菌细胞中，多肽的重组表达，可对于以商业上相关的 量产生所述多肽提供更理想的媒介（vehicle)。 多肽的重组产生伴随构建表达盒，其中将编码多肽的DNA置于启动子的表达调控 下，所述启动子从基因切出并适于所述宿主细胞。将该表达盒导入宿主细胞，通常通过质粒 介导的转化。然后，多肽的产生通过在包含在所述表达盒上的启动子的合适功能所需的诱 导条件下培养经转化的宿主细胞来实现。 将真菌宿主细胞用于多肽的重组产生一般需要得到适于在宿主细胞中调控所述 多肽表达的启动子。因此，在本领域具有对调控基因的重组表达的新颖启动子的需要。 Melin等，2002,Mol.Genet.Genomics267(6):695-702 公开了构巢曲霉 (Aspergillusnidulans)concanamycin(伴刀球霉素）诱导的蛋白C。Lu等，2010,Microb. CellFact. 9:23 公开了黑曲霉（Aspergillusniger)中的cipC蛋白。 本专利技术提供了改善的用于在真菌宿主细胞中产生多肽的方法。
技术实现思路
本专利技术涉及用于产生多肽的方法，其包括：(a)在有助于产生所述多肽的培养基 中培养真菌宿主细胞，其中所述真菌宿主细胞包含编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可 操作地连接于启动子，所述启动子选自下组：（i)启动子，其包含核苷酸序列，所述核苷酸 序列与SEQIDN0:1，SEQIDN0:2，SEQIDN0:3，SEQIDN0:4，SEQIDN0:5，SEQIDN0:6， SEQIDN0:7,SEQIDN0:8,SEQIDN0:31，或SEQIDN0:32 具有至少 60%序列同一性； (ii)启动子，其包含核苷酸序列，所述核苷酸序列在至少中等严格条件下与以下杂交：SEQ IDN0:1,SEQIDN0:2,SEQIDN0:3,SEQIDN0:4,SEQIDN0:5,SEQIDN0:6,SEQID N0:7，SEQIDN0:8，SEQIDN0:31，或SEQIDN0:32;或其全长互补链；（iii)启动子，其包 含SEQIDN0:1，SEQIDN0:2，SEQIDN0:3，SEQIDN0:4，SEQIDN0:5，SEQIDN0:6，SEQ IDN0:7,SEQIDN0:8,SEQIDN0:31，或SEQIDN0:32;(iv)启动子，其包含（i)，（ii)， 或（iii)的保持启动子活性的亚序列；和（v) (i)，（ii)，（iii)，或（iv)的突变、杂合或串联 (tandom)启动子；其中所述编码多肽的多核苷酸对于所述启动子是外源的；和（b)从培养 基分尚所述多肽。 本专利技术亦涉及分离的启动子，其选自下组：（i)启动子，其包含核苷酸序列，所述 核苷酸序列与SEQIDN0:1，SEQIDN0:2,SEQIDN0:3,SEQIDN0:4,SEQIDN0:5,SEQ IDN0:6，SEQIDN0:7，SEQIDN0:8，SEQIDN0:31，或SEQIDN0:32 具有至少 60%序列 同一性，（ii)启动子，其包含核苷酸序列，所述核苷酸序列在至少中等严格条件下与以下杂 交：SEQIDN0:1，SEQIDN0:2,SEQIDN0:3,SEQIDN0:4,SEQIDN0:5,SEQIDN0:6， SEQIDN0:7，SEQIDN0:8，SEQIDN0:31，或SEQIDN0:32;或其全长互补链；（iii)启动 子，其包含SEQIDN0:1，SEQIDN0:2,SEQIDN0:3,SEQIDN0:4,SEQIDN0:5,SEQID N0:6,SEQIDN0:7,SEQIDN0:8,SEQIDN0:31，或SEQIDN0:32;(iv)启动子，其包含 (i)，（ii)，或（iii)的保持启动子活性的亚序列；和（v) (i)，（ii)，（iii)，或（iv)的突变、 杂合或串联启动子。 本专利技术亦涉及包含可操作地连接于编码多肽的多核苷酸的本专利技术的启动子的构 建体、载体和真菌宿主细胞。 具体地，本专利技术涉及如下各项： 1.-种产生多肽的方法，其包括： (a)在有助于产生所述多肽的培养基中培养真菌宿主细胞，其中所述真菌宿主细 胞包含编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于启动子，所述启动子选自下组： ⑴启动子，其包含核苷酸序列，所述核苷酸序列与SEQIDN0:1，SEQIDN0:2，SEQID N0:3，SEQIDN0:4，SEQIDN0:5，SEQIDN0:6，SEQIDN0:7，SEQIDN0:8，SEQIDN0:31， 或SEQIDN0:32具有至少60%序列同一性，（ii)启动子，其包含核苷酸序列，所述核苷酸 序列在至少中等严格条件下与以下杂交：SEQIDN0:1，SEQIDN0:2，SEQIDN0:3，SEQID N0:4,SEQIDN0:5,SEQIDN0:6,SEQIDN0:7,SEQIDN0:8,SEQIDN0:31，或SEQID NO:32;或其全长互补链；（iii)启动子，其包含SEQIDNO: 1，SEQIDNO:2,SEQIDNO:3， SEQIDN0:4,SEQIDN0:5,SEQIDN0:6,SEQIDN0:7,SEQIDN0:8,SEQIDN0:31，或 SEQIDNO: 32 ;(iv)启动子，其包含（i)，（ii)，或（iii)的保持启动子活性的亚序列；和（v) (i)，（ii)，（iii)，或（iv)的突变、杂合或串联启动子；其中所述编码多肽的多核苷酸对于 所述启动子是外源的；和 (b)从培养基分呙所述多肽。 2.项1的方法，其中所述启动子包含核苷酸序列，所述核苷酸序列与SEQID N0:1，SEQIDN0:2，SEQIDN0:3，SEQIDN0:4，SEQIDN0:5，SEQIDN0:6，SEQIDN0:7， SEQIDN0:8,SEQIDN0:31，或SEQIDN0:32 具有至少 60%，至少 65%，至少 70%，至少 75%，至少80%，至少81%，至少82%，至少83%，至少84%，至少85%，至少86%，至少 87%，至少88%，至少89%，至少90%，至少91%，至少92%，至少93%，至少94%，至少 95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少99%或100%序列同一性。 3.项1的方法，其中所述启动子包含核苷酸序列，所述核苷酸序列在中等严格条 件，中等-高严格条件，高严格条件，或非常高严格条件下与以下杂交：SEQIDN本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种产生多肽的方法，其包括：(a)在有助于产生所述多肽的培养基中培养真菌宿主细胞，其中所述真菌宿主细胞包含编码多肽的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于启动子，所述启动子由与SEQ ID NO:2,3,4,5,6,7或8具有95％,96％,97％,98％,99％或100％序列同一性的核苷酸序列组成；其中所述编码多肽的多核苷酸对于所述启动子是外源的；和(b)从培养基分离所述多肽。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：M卡特利特，D雅弗，
申请(专利权)人：诺维信股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US