本发明专利技术提供了致肝脓肿肺炎克雷伯菌特异性基因序列及其应用，本发明专利技术提供了致肝脓肿肺炎克雷伯菌特异性基因序列sdm，其序列为SEQ ID NO.1所示。该基因特异性的存在于致肝脓肿肺炎克雷伯菌中，可作为肺炎克雷伯菌肝脓肿的诊断标记物。本发明专利技术还提供了针对sdm序列的引物：TTGAATCTTACCCAGAGGAACTT；AACAGCACCTTTCACAACGACAT，该引物可特异性的对sdm序列进行扩增，本发明专利技术提供的序列及其引物具有很高的特异性，可以用于肺炎克雷伯菌肝脓肿的诊断，具有商业化开发价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学疾病诊断和治疗药物选择领域，具体涉及致肝脓肿肺炎克雷伯菌基因特异性序列及其应用。
技术介绍
肺炎克雷伯菌(K.pneumoniaesubsp.pneumonia)，属于肠杆菌科细菌，革兰染色阴性，有较厚的荚膜，多数有菌毛，无芽孢和鞭毛，寄生于人体皮肤、鼻咽部和肠道等处，可引起严重的肺炎、尿路感染和血流感染等，是临床上常见的条件致病菌(LiB,ZhaoY,LiuC,ChenZ,ZhouD.MolecularpathogenesisofKlebsiellapneumoniae.FutureMicrobiol,2014；9(9):1071-81)。肝脓肿(LiverAbscess,LA)是发生于肝脏的一种继发性感染性疾病，可以由细菌、真菌、寄生虫等引起,感染病变中心液化坏死、组织溶解、肉芽组织覆盖并形成脓腔，是常见的消化系统严重疾病。20世纪70年代以前，细菌性肝脓肿主要由以大肠埃希菌为主，当时非手术治疗肝脓肿的死亡率高达83％，手术治疗的死亡率高达28％，促成高死亡率的主要原因是诊断和治疗的不及时(VallesJ,C.Leon,Alvarez-Lerma.Nosocomialbacteremiaincriticallyillpatients:amulti-centerstudyevaluatingepidemiologyandprognosis.ClinInfectDis,1997,24:387-395)。1986年，台湾Liu等人首次报道了由肺炎克雷伯菌导致的肝脓肿病例7例(LiuY,ChengD,LinC.Klebsiellapneumoniaeliverabscessassociatedwithsepticendophthalmitis.ArchInternMed1986；146:1913–16)。随后肺炎克雷伯菌肝脓肿在东亚地区开始流行，包括：中国、新加坡、香港、韩国和越南等。1999年，美国出现肺炎克雷伯菌肝脓肿病例并开始流行(SaccenteM.Klebsiellapneumoniaeliverabscess,endophthalmitis,andmeningitisinamanwithnewlyrecognizeddiabetesmellitus.ClinInfectDis.1999；29(6):1570–1.)；2012年欧洲出现肺炎克雷伯菌肝脓肿病例(MooreR,O'SheaD,GeogheganT,MallonPW,SheehanG.Community-acquiredKlebsiellapneumoniaeliverabscess:anemerginginfectioninIrelandandEurope.Infection2013；41(3):681-6.)；至今，肺炎克雷伯菌肝脓肿遍及全球。随着科技的发展，超声或CT定位下经皮穿刺引流联合高效广谱抗生素是治疗肺炎克雷伯菌肝脓肿的有效方式，但肺炎克雷伯菌肝脓肿病死率仍达4-16％(WangJ,LiuY,LeeS,YenM,ChenY,WangJ,WannS,LinH.PrimaryliverabscessduetoKlebsiellapneumoniaeinTaiwan.ClinInfectDis.1998；26:1434–8)。其主要原因为肺炎克雷伯菌肝脓肿不能及时诊断，从而耽误有效治疗。临床上，肺炎克雷伯菌肝脓肿常伴发其他部位的感染，常见的是血流感染、眼炎和脑膜炎。除了其伴发感染的典型症状外，肺炎克雷伯菌肝脓肿本身的临床表现没有其特征性，主要表现为发热、寒战和腹痛(ChanK,YuW,TsaiC,ChengK,HouC,LeeM,TanC.PyogenicliverabscesscausedbyKlebsiellapneumoniae:analysisoftheclinicalcharacteristicsandoutcomesof84patients.ChinMedJ(Engl)2007；120:136–39)。其实验室检查指标的变化(如白细胞计数、中性粒细胞比例和肝功能指标等)也并非肺炎克雷伯菌肝脓肿所特异(LeeS,ChenY,TsaiH,WannS,LinH,HuangC,LiuY.PredictorsofsepticmetastaticinfectionandmortalityamongpatientswithKlebsiellapneumonialiverabscess.ClinInfectDis2008；47:642–50)。因此，临床上往往容易遗漏肺炎克雷伯菌肝脓肿的相关检查。肺炎克雷伯菌肝脓肿的诊断存在不少的困难。临床上，肺炎克雷伯菌肝脓肿的诊断金标准是超声或CT引导下经皮肝穿刺抽吸脓液，脓液中分离培养到肺炎克雷伯菌。但是，脓腔中的细菌往往因为患者前期抗生素的使用以及大量白细胞的吞噬和裂解，多为死菌，培养阳性率较低。血液中分离培养到肺炎克雷伯菌，结合肝脏脓腔占位的影像学结果，也能作出肺炎克雷伯菌肝脓肿的推测性诊断，但如果是早期的肝脓肿，脓腔隐匿，影像学上表现不明显，如不加以注意，就容易漏诊。加之，血培养耗时长，从血培养阳性报警，到最后鉴定出菌种，还需要24-48小时，耽误肺炎克雷伯菌肝脓肿的诊断。本专利技术目的在于找到致肝脓肿肺炎克雷伯菌的特异性因子，从而通过简单、快速的PCR方法筛查这些因子在血培养阳性患者血液中的存在情况，如特异性因子PCR结果阳性，说明该患者血中很可能存在致肝脓肿肺炎克雷伯菌，提示临床医生该患者患肺炎克雷伯菌肝脓肿概率很高，从而指导临床医生及时开具肺炎克雷伯菌肝脓肿相关的检查，提高肺炎克雷伯菌肝脓肿的诊断速度，及时治疗，为改善患者预后提供基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了致肝脓肿肺炎克雷伯菌基因特异性序列sdm，所述的基因特异性序列为SEQIDNO.1所示。本专利技术的另一个目的在于提供了致肝脓肿肺炎克雷伯菌基因特异性序列sdm的引物：sdm_F：TTGAATCTTACCCAGAGGAACTTsdm_R：AACAGCACCTTTCACAACGACAT本专利技术还有一个目的在于提供了致肝脓肿肺炎克雷伯菌基因特异性序列sdm或基于sdm设计的引物在制备致肝脓肿肺炎克雷伯菌检测试剂盒中的应用，包括用于制备肺炎克雷伯菌肝脓肿早期诊断试剂盒中的应用。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术措施：致肝脓肿肺炎克雷伯菌基因特异性序列sdm，所述的基因特异性序列为SEQIDNO.1所示。致肝脓肿肺炎克雷伯菌基因特异性序列sdm的引物，基于sdm序列设计的引物均为本专利技术的保护范围，优选的，s本文档来自技高网...
【技术保护点】
致肝脓肿肺炎克雷伯菌特异性基因序列，其序列为SEQ ID NO.1所示。
【技术特征摘要】
1.致肝脓肿肺炎克雷伯菌特异性基因序列，其序列为SEQIDNO.1所示。
2.根据权利要求1所述序列设计的引物。
3.根据权利要求2所述的引物，其特征在于：
sdm_F：TTGAATCTTACCCAGAGGAACTT
sdm_R：AACAGCACCTTTCACAACGACAT。
4.权利要求1所述的基因或权利要求2所述的引物在制备致肝脓肿肺炎克雷伯菌检测试剂盒中的应用。
5.权利要求1所述的基因或权利要求2所述的引物在制备肺炎克雷伯菌肝脓肿检测试剂盒中的应用。
6.权利要求1所述的基因或权利要求2所述的引物在制备肺炎克雷伯菌肝脓肿早期检测试剂盒中的应用。
7.一种致肝脓肿肺炎克雷伯菌检测试剂盒，包括：
sdm_F：TTGAATCT...
【专利技术属性】
技术研发人员：叶美萍，王明贵，徐晓刚，黄金伟，
申请(专利权)人：复旦大学附属华山医院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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