一种乌羽玉无菌播种及再生体系建立的方法技术

本发明专利技术公开了一种乌羽玉无菌播种及再生体系建立的方法，具体操作步骤如下：1)培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分；2)种子消毒及接种；3)愈伤组织的诱导及分化；4)不定芽球的增殖；5)壮苗生根培养。本发明专利技术利用植物组织培养技术对乌羽玉进行无菌播种及再生快繁培养，能够在短时间内获得大量遗传性状一致的优质壮苗，克服了常规繁殖方法慢的缺点，对其种质资源收集及保存和规模化生产都具有积极意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及乌羽玉
，具体涉及一种乌羽玉无菌播种及再生体系建立的方法。
技术介绍
乌羽玉(Lophophorawilliamsii)为仙人掌科乌羽玉属植物，原产于墨西哥北部，其形态独特，是很受欢迎的小型观赏多肉植物的著名代表种之一。此外，乌羽玉还具有重要的药用价值，对于治疗哮喘、肺癌及精神疾病等有显著疗效。但是，乌羽玉生长速度较慢、自然繁殖率低，加之人类过度采掘和对其原产地生存环境的破坏，目前乌羽玉的数量较少、价格不菲，这使得其推广和应用受到很大限制。因此，利用植物组织培养技术进行乌羽玉的快速繁殖，对于保存优良种质资源、繁殖名优珍稀品种具有重要的意义，以实现其规模化生产以满足国内外市场的需求。植物组织培养方法可以在短期内快使植物速繁殖，不仅繁殖速度块，且因为是无性繁殖可以保持与母株的一致的遗传性状。但是，在此之前还没有关于建立乌羽玉组培再生体系的报道，更没有成功的实例。
技术实现思路
本专利技术的目的正是为了克服上述技术的不足，而提供一种乌羽玉无菌播种及再生体系建立的方法。本专利技术的目的是通过如下技术方案来完成的。这种乌羽玉无菌播种及再生体系建立的方法，包括如下步骤：1)、培养基的配制，培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分具体为：(1)基本培养基：MS或1/2MS，其中蔗糖20～30g/L，琼脂6～9g/L，pH＝5.8；(2)诱导培养基：MS+6-BA0.25～0.5mg/L+NAA0.01～0.05mg/L；(3)分化培养基：MS+6-BA0.01～0.05mg/L；(4)增殖培养基：MS+6-BA0.05～0.2mg/L+NAA0.01～0.05mg/L；(5)壮苗生根培养基：MS+6-BA0.01～0.05mg/L+NAA0.1～0.3mg/L；2)种子的消毒及接种：以乌羽玉的种子为外植体材料，将消毒处理后的种子在无菌条件下接种于基本培养基上培养；3)愈伤组织的诱导及分化：将步骤2)萌发后的幼苗转移至诱导培养基上诱导愈伤组织形成并进行不定芽球的分化培养；4)不定芽的增殖：将步骤3)的不定芽球接种于增殖培养基上进行增殖培养；5)壮苗及生根培养：将步骤4)不定芽球分成单个后转至壮苗生根培养基上进行壮苗及生根培养。进一步地，本专利技术在所述步骤2)中，以乌羽玉的种子为外植体材料，将其置于1.5ml或2ml的PE离心管中进行消毒处理，先用饱和的洗衣粉溶液浸泡0.5h后再用自来水清洗，然后依次在体积比浓度为70％的酒精和有效氯浓度为1％的次氯酸钠溶液中分别浸泡50s和6min，最后用无菌水冲洗3～5遍，每遍2min(移液枪操作)。进一步地，本专利技术在所述步骤3)中，种子培养4～6周后陆续萌发，萌发后的乌羽玉在诱导培养基上培养2～4周后有愈伤组织形成，挑取生长状态较好的愈伤组织至于分化培养基上培养，约6周后愈伤组织开始分化不定芽球。进一步地，本专利技术在所述步骤5)中，将再生的不定芽球分别切下后转至基本培养基上进行壮苗培养，培养3～5周后成为具有根系的壮苗。进一步地，本专利技术在所述步骤3)、4)、5)中，所述的培养条件是，培养温度为23±2℃、光照强度为60～100μmol·m-2·s-1、光照时间为10～16小时/天；本专利技术的有益效果是：利用植物组织培养技术对乌羽玉进行了播种及再生快繁培养，能够在较短时间内获得大量遗传性状一致的优质壮苗，克服了常规繁殖方法慢的缺点，对其规模化生产和种质资源保存都具有积极意义，同时本技术也为其遗传转化体系的建立奠定了坚实的实验基础。具体实施方式下面通过具体实施方式对本专利技术作进一步阐述，实施例将帮助更好地理解本专利技术，但本专利技术并不仅仅局限于下述实施例。实施例1：本专利技术提供了一种乌羽玉无菌播种及再生体系建立的方法，其步骤为：1)、培养基的配制(1)基本培养基：MS或1/2MS，其中蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH＝5.8；(2)诱导培养基：MS+6-BA0.25～0.5mg/L+NAA0.01～0.05mg/L；(3)分化培养基：MS+6-BA0.01～0.05mg/L；(4)增殖培养基：MS+6-BA0.05～0.2mg/L+NAA0.01～0.05mg/L；(5)壮苗生根培养基：MS+6-BA0.01～0.05mg/L+NAA0.1～0.3mg/L；2)、种子的消毒及接种以乌羽玉的种子为外植体材料，将其置于1.5ml或2ml的PE离心管中进行消毒处理，先用洗洁精溶液浸泡0.5h后再用自来水清洗，然后依次在体积比浓度为70％的酒精和有效氯浓度为1％的次氯酸钠溶液中分别浸泡50s和6min，最后用无菌水冲洗3～5遍，每遍2min(移液枪操作)。3)、愈伤组织的诱导及分化种子培养4～6周后陆续萌发，萌发后的乌羽玉在诱导培养基上培养2～4周后有愈伤组织形成，挑取生长状态较好的愈伤组织至于分化培养基上培养，约6周后愈伤组织开始分化不定芽；培养温度为25±2℃、光照强度为60～100μmol·m-2·s-1、光照时间为10～16小时/天；4)、不定芽的增殖将乌羽玉的不定芽丛接种于增殖培养基上进行增殖培养；培养温度为23±2℃、光照强度为60～100μmol·m-2·s-1、光照时间为10～16小时/天；5)、壮苗生根培养将增殖芽丛在无菌条件下切割成单株后转接到基本培养基上进行壮苗生根培养，培养3～5周天后成为具有根系的壮苗；培养温度为23±2℃、光照强度为60～100μmol·m-2·s-1、光照时间为10～16小时/天。实施例2本专利技术提供了一种乌羽玉无菌播种及再生体系建立的方法，其步骤为：1)、培养基的配制(1)基本培养基：MS培养基，其中蔗糖20～30g/L，琼脂6～9g/L，pH＝5.8；(2)诱导培养基：MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.05mg/L；(3)分化培养基：MS+6-BA0.05mg/L；(4)增殖培养基：MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.02mg/L；(5)壮苗生根培养基：MS+6-BA0.05mg/L+NAA0.2mg/L；2)、种子的消毒及接种以乌羽玉的种子为外植体材料，将其置于1.5ml或2ml的PE离心管中进行消毒处理，先用洗洁精溶液浸泡0.5h后再用自来水清洗，然后依次在体积比浓度为70％的酒精和有效氯浓度为1％的次氯酸钠溶液中分别浸泡50s和6min，最后用无菌水冲洗3～5遍，每遍2min(移本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种乌羽玉无菌播种及再生体系建立的方法，其特征在于：包括如下步骤：1)、培养基的配制，培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分具体为：(1)基本培养基：MS或1/2MS，其中蔗糖20～30g/L，琼脂6～9g/L，pH＝5.8；(2)诱导培养基：MS+6‑BA 0.25～0.5mg/L+NAA0.01～0.05mg/L；(3)分化培养基：MS+6‑BA 0.01～0.05mg/L；(4)增殖培养基：MS+6‑BA 0.05～0.2mg/L+NAA0.01～0.05mg/L；(5)壮苗生根培养基：MS+6‑BA 0.01～0.05mg/L+NAA 0.1～0.3mg/L；2)种子的消毒及接种：以乌羽玉的种子为外植体材料，将消毒处理后的种子在无菌条件下接种于基本培养基上培养；3)愈伤组织的诱导及分化：将步骤2)萌发后的幼苗转移至诱导培养基上诱导愈伤组织形成并进行不定芽球的分化培养；4)不定芽的增殖：将步骤3)的不定芽球接种于增殖培养基上进行增殖培养；5)壮苗及生根培养：将步骤4)不定芽球分成单个后转至壮苗生根培养基上进行壮苗及生根培养。

【技术特征摘要】
1.一种乌羽玉无菌播种及再生体系建立的方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)、培养基的配制，培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分具体为：
(1)基本培养基：MS或1/2MS，其中蔗糖20～30g/L，琼脂6～9g/L，pH＝5.8；
(2)诱导培养基：MS+6-BA0.25～0.5mg/L+NAA0.01～0.05mg/L；
(3)分化培养基：MS+6-BA0.01～0.05mg/L；
(4)增殖培养基：MS+6-BA0.05～0.2mg/L+NAA0.01～0.05mg/L；
(5)壮苗生根培养基：MS+6-BA0.01～0.05mg/L+NAA0.1～0.3mg/L；
2)种子的消毒及接种：以乌羽玉的种子为外植体材料，将消毒处理后的种子在无菌条件
下接种于基本培养基上培养；
3)愈伤组织的诱导及分化：将步骤2)萌发后的幼苗转移至诱导培养基上诱导愈伤组织
形成并进行不定芽球的分化培养；
4)不定芽的增殖：将步骤3)的不定芽球接种于增殖培养基上进行增殖培养；
5)壮苗及生根培养：将步骤4)不定芽球分成单个后转至壮苗生根培养基上进行壮苗及
生根培养。
2.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王燕，汪一婷，吕永平，牟豪杰，陈剑平，陈志，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33