本发明专利技术公开一种大鲵胶原糖肽及其用途，大鲵胶原糖肽按如下方法制备：以大鲵皮为原料，制得大鲵皮酸溶性胶原蛋白；以大鲵皮酸溶性胶原蛋白为原料，制得大鲵皮胶原蛋白肽；将10g牡蛎多糖加入到100ml 0.01 mol/L pH 6.5的磷酸钠缓冲液中，搅拌2h，加入5g大鲵胶原蛋白肽及10g牡蛎多糖，继续搅拌2h，4℃静置过夜，再60℃搅拌4h，冷却至室温，9000r/min离心30min，得上清液，冷冻干燥上清液即得到大鲵胶原糖肽，可应用于化妆品及果汁饮料中。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种以大鲵皮及牡蛎多糖制备的大鲵胶原糖肽及其用途。
技术介绍
大鲵是我国特有的珍稀特产，属国家二类保护动物。主要 分布于长江中上游、珠江中上游及汉水上游的溪流中。上世纪90年代以来，湖南、湖北、陕 西及广西都建立了大量的大鲵驯养繁殖企业，仅湖南省就有大鲵驯养繁殖企业35家左右， 年繁殖能力已达4~5万尾。随着养殖规模的发展，大鲵资源的精深加工利用成为一个关系 大鲵产业持续发展的紧迫课题。 近来研究表明，分子量在3500Da以下的大鲵低聚糖肽具有抗疲劳、降血压、促 进免疫力提高、抗氧化、促进上皮细胞有丝分裂等作用（食品工业科技，2013，34 (14): 350-352,369;北京农学院学报，2012,27 (1): 2-4;河北渔业，2012，（9):1-4;食品工业 科技，2011，32 (6M46-151)。因此，大鲵低聚糖肽已应用于化妆品及保健食品中。大鲵低 聚糖肽化妆品具有抗光老化作用，大鲵低聚糖肽保健食品具有提高免疫力等作用。但是，大 鲵低聚糖肽是由大鲵黏液通过酶解获得，产量少，价格昂贵，很难满足大量消费使用。 大鲵皮、肉、骨中含有大量的胶原蛋白，大鲵胶原蛋白肽则是以大鲵胶原蛋白经 酶解制得，大鲵胶原蛋白肽与大鲵胶原蛋白相比，具有分子量小，易于人体吸收等特点，且 具有多种生物活性，如李林格与曲敏报道从大鲵皮胶原蛋白制得的胶原蛋白肽对乙醇诱 导的肝损伤小鼠具有肝保护作用（食品工业科技，2014,35 (8):340-343)。牡蛎多糖是 从牡蛎中获得的一种葡聚糖，具有多种活性，如牡蛎多糖对乙醇诱导的肝损伤小鼠具有肝 保护作用、降血压作用（国际生物大分子杂志（International Journal of Biological Macromolecules), 2015，78:142-148.)。但是，迄今尚未见到由大鲵胶原蛋白及牡多糖 制成大鲵胶原糖肽及其生物活性的相关报道。
技术实现思路
本专利技术为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种以大鲵皮及牡蛎多糖 制备的大鲵胶原糖肽及其用途。 本专利技术的技术解决方案是：一种大鲵胶原糖肽，其特征在于按如下方法制备： a. 以大鲵皮为原料，制得大鲵皮酸溶性胶原蛋白； b. 以大鲵皮酸溶性胶原蛋白为原料，制得大鲵皮胶原蛋白肽； c. 将IOg牡蛎多糖加入到IOOrnl 0. 01 mol/L pH 6. 5的磷酸钠缓冲液中，搅拌2h，加 入5g大鲵胶原蛋白肽及IOg牡蛎多糖，继续搅拌2h，4°C静置过夜，再60°C搅拌4h，冷却至 室温，9000r/min离心30min，得上清液，冷冻干燥上清液即得到大鲵胶原糖肽。 所述a步骤如下：将去除皮下脂肪的大鲵皮剪成5mmX 5mm块状，加入质量浓度5% NaCl水溶液浸泡24h，蒸馏水洗涤两次，加入0. 5mol/L乙酸溶液及胃蛋白酶，所述大鲵皮 与乙酸溶液的质量比为1:20,所述胃蛋白酶的加入量是大鲵皮质量的0. 5%，4°C溶胀12h ; 将溶胀后的大鲵皮捣碎，制得大鲵皮匀浆，再将匀浆液4°C磁力搅拌36h，过滤，滤液9000r/ min，离心30min，得上清液；上清液中加入NaCl，至NaCl最终溶液浓度为0. 9mol/L，过夜， 离心收集沉淀，将沉淀溶于0. 5mol/L乙酸溶液中，先用Na2HPO4透析液透析2d，再用蒸馏水 透析2d，冻干得大鲵皮酸溶性胶原蛋白。 所述b步骤如下：将大鲵皮胶原蛋白溶于水中，大鲵皮胶原蛋白与水的用量比为 30mg/mL，pH调至6. 5,加入鲵皮胶原蛋白质量0. 1%的木瓜蛋白酶，水浴温度45°C反应4h， 将反应液l〇〇°C，加热lOmin，过滤，滤液冷冻干燥得大鲵皮胶原蛋白肽。 -种上述大鲵胶原糖肽在制备化妆品中的应用。 在所述化妆品基料中掺入总质量0. 1~10 %的大鲵胶原糖肽。 -种上述大鲵胶原糖肽在果汁饮料中的应用。 本专利技术是以大鲵皮及牡蛎多糖为主要原料制备大鲵胶原糖肽。所制备的大鲵胶原 糖肽不仅具有粒度小、存在有〇-连接糖肽键的特点，而且具有提高免疫力、抗紫外线、改善 睡眠及抗辐射等作用，可应用于化妆品及果汁饮料等。【附图说明】： 图1是本专利技术实施例大鲵胶原糖肽β-消除反应前后紫外扫描图。【具体实施方式】： a.以大鲵皮为原料，制得大鲵皮酸溶性胶原蛋白； 将去除皮下脂肪的大鲵皮剪成5mmX5mm块状，加入质量浓度5% NaCl水溶液浸泡 24h，以除去非胶原蛋白成分，蒸馏水洗涤两次，加入0. 5mol/L乙酸溶液及胃蛋白酶，所述 大鲵皮与乙酸溶液的质量比为1:20,所述胃蛋白酶的加入量是大鲵皮质量的0. 5%，4°C溶 胀12h ;将溶胀后的大鲵皮捣碎，制得大鲵皮匀浆，再将匀浆液4°C磁力搅拌36h，过滤，滤液 9000r/min，离心30min，得上清液，即大鲵皮酸溶性胶原蛋白粗溶液。上清液中加入NaCl， 至NaCl最终溶液浓度为0· 9mol/L，过夜，离心收集沉淀，将沉淀溶于0· 5mol/L乙酸溶液中， 先用Na2HPO4透析液透析2d，再用蒸馏水透析2d，冻干得大鲵皮酸溶性胶原蛋白。 b.以大鲵皮酸溶性胶原蛋白为原料，制得大鲵皮胶原蛋白肽； 将大鲵皮胶原蛋白溶于水中，大鲵皮胶原蛋白与水的用量比为30mg/mL，pH调至6. 5， 加入鲵皮胶原蛋白质量0. 1%的木瓜蛋白酶，水浴温度45°C反应4h，即酶解程度控制在水解 度DH彡2. 0,将反应液KKTC加热IOmin灭酶，过滤，滤液冷冻干燥得大鲵皮胶原蛋白肽， c.将IOg牡蛎多糖加入到100mL 0.0 l mol/L pH 6. 5的磷酸钠缓冲液中，搅拌2h，加 入5g大鲵胶原蛋白肽及IOg牡蛎多糖，继续搅拌2h，4°C静置过夜，再60°C搅拌4h，迅速冷 却至室温，9000r/min离心30min，得上清液，冷冻干燥上清液即得到大鲵胶原糖肽。 实验例： 1.利用β-消旋反应测定本专利技术实施例大鲵胶原糖肽键连接方式 β -消旋反应是一种鉴定糖肽键连接方式的常用方法，0-糖肽键在碱处理下，在240nm 波长处紫外吸收增强。 准确称取本专利技术实施例大鲵胶原糖肽样品5mg，溶于3mL蒸馏水中，然后将样品溶 液分成两等份，各I. 5mL。其中一份加入I. 5mL蒸馏水；另一份加入I. 5mL 0. 4mol/L NaOH 溶液，反应2h后，两份溶液分别在200~400nm范围内进行紫外光谱扫描，得到β -消除反 应前后紫外扫描图（图1)。由图1可知，其消旋反应前后大鲵胶原糖肽的紫外吸收在 240 nm处显著增强，说明大鲵胶原糖肽中存在O-连接糖肽键。 2.大鲵胶原糖肽与大鲵胶原肽体积平均粒径D对比 对照品：将大鲵胶原肽加入到IOOmL 0.01 mol/L pH 6. 5的磷酸钠缓冲液中，搅拌2h， 4°C静置过夜后，再60°C搅拌4h后迅速冷却至室温，9000r/min离心30min，将上清液冷冻干 燥为对照品。当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种大鲵胶原糖肽，其特征在于按如下方法制备： a. 以大鲵皮为原料，制得大鲵皮酸溶性胶原蛋白；b. 以大鲵皮酸溶性胶原蛋白为原料，制得大鲵皮胶原蛋白肽；c. 将10g牡蛎多糖加入到100ml 0.01 mol/L pH 6.5的磷酸钠缓冲液中，搅拌2h，加入5g大鲵胶原蛋白肽及10g牡蛎多糖，继续搅拌2h，4℃静置过夜，再60℃搅拌4h，冷却至室温，9000r/min离心30min，得上清液，冷冻干燥上清液即得到大鲵胶原糖肽。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李伟，佟长青，王文莉，
申请(专利权)人：成都智企联盟企业管理有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51
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