本发明专利技术的各实施方式涉及用于治疗癌症的溶瘤病毒(如痘苗病毒)，这些病毒编码的接合分子具有激活结构域以及抗原识别结构域，所述激活结构域识别T细胞上的细胞分子如CD3，所述抗原识别结构域识别肿瘤抗原如EphA2、HER2、GD2或磷脂酰基醇蛋白聚糖-3。在一些实施方式中，这些接合分子还包含例如细胞因子或共刺激结构域。本发明专利技术还包括使用一种或多种这类组合物治疗癌症的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】 本专利技术要求2013年3月5日提交的美国临时专利申请第61/772, 803号的优先权， 其通过引用全文纳入本文。
本专利技术的领域至少包括免疫学、病毒学、细胞生物学、分子生物学和医药，包括癌 症医药。
技术介绍
虽然若干恶性肿瘤的治愈率已得到显著改善，但在过去的数十年中晚期实体瘤患 者的结果仍残酷地维持不变，这强调需要新疗法。溶瘤痘苗病毒是现有实体瘤治疗选项的 有用补充，因为其具有安全性和能够感染肿瘤细胞、在肿瘤细胞中复制并裂解肿瘤细胞。虽 然临床研究已显示瘤内或静脉内注射溶瘤痘苗病毒是安全的并可诱导肿瘤裂解，但溶瘤痘 苗病毒的抗肿瘤效力未达到最佳且大多数肿瘤发生，这强调需要对溶瘤痘苗病毒疗法进行 进一步改进。 概述 本专利技术涉及用于针对个体的免疫治疗的方法和/或组合物。在【具体实施方式】中， 所述个体是患有癌症且需要癌症治疗的哺乳动物。该癌症可以是任何类型，包括肺癌、乳腺 癌、前列腺癌、胰腺癌、肝癌、结肠癌、胃癌、脾癌、皮肤癌、脑癌、血液癌、肾癌、甲状腺癌等。 该癌症可以是实体瘤。在特定情况下，该癌症具有一种或多种肿瘤标志物，包括肿瘤抗原。 在本专利技术的特定方面中，一种或多种肿瘤抗原可存在于至少一些癌细胞中，且一种或多种 肿瘤抗原可以是免疫治疗的靶标。 在本专利技术的【具体实施方式】中，提供了涉及适应于免疫治疗的重组溶瘤病毒（例如 具有T细胞接合物臂的溶瘤病毒（TEA-0V))载体的方法和组合物。本专利技术提供的TEA-0V提 供的益处超过单独的溶瘤病毒和单独的T细胞，益处在于重组溶瘤病毒在直接杀伤肿瘤细 胞外，还通过刺激被病毒感染的肿瘤附近的T细胞来杀伤肿瘤细胞。在具体的实施方式中， 这些载体经瘤内注射或静脉内注射，但本专利技术也涵盖其他递送方式。在某些实施方式中，该 载体包含双特异性活性，且在【具体实施方式】中其涉及存在激活结构域和抗原识别结构域。 在具体方面中，该溶瘤病毒载体是具有T细胞接合物臂的痘苗病毒，称作TEA-VV。 在第一方面中，提供了重组溶瘤病毒，例如溶瘤痘苗病毒，其经工程改造以包含具 有启动子的表达区域，该启动子引导编码双特异性T细胞接合物多肽（例如靶向EphA2、 HER2、GD2或磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的接合物）的核酸表达。在【具体实施方式】中，该双特异 性T细胞接合物多肽包含激活结构域和抗原识别结构域。在某些实施方式中，该激活结构 域是T细胞受体多肽的受体或配体，例如结合CD3以激活T细胞的多肽。在某些实施方式 中，该抗原识别结构域是针对目标细胞（如癌细胞）上细胞表面蛋白质的受体或配体。在 更具体的实施方式中，激活结构域和/或抗原识别结构域之一或两者都是抗体，例如单链 抗体，例如单链可变区片段（scFv)。在具体的实施方式中，该抗原识别结构域结合目标细 胞上存在的分子，且该抗原识别结构域结合的细胞受体引发最终对受体目标分子具有毒性 的过程。在【具体实施方式】中，双特异性涉及两个抗体片段或抗原结合片段或其衍生物，如单 链可变区片段（scFv)。虽然在某些实施方式中一个scFv特异性针对CD3,但在替代性实施 方式中，该scFv特异性针对TCR复合物的另一组分。本领域技术人员应理解，TCR复合物 是可变TCRa和β链的八聚体复合物，其具有三个二聚体信号转导模块⑶3δ/ε、⑶3 γ/ ε和⑶3 ζ / ζ或ζ/η。虽然在一些情况下本专利技术公开的组合物使用scFv靶向⑶3ε，但 本专利技术也涵盖使用特定scFv靶向其他⑶3分子（特别是⑶3ζ)或TCRa和β链。在具 体实施方式中，本专利技术涵盖的靶向分子不是TCR复合物的一部分（⑶27、⑶28、⑶40、⑶134、 ⑶137和⑶278)。在具体的实施方式中，一个scFv特异性针对Τ淋巴细胞上的⑶3分子且 另一scFv特异性针对选择的具体肿瘤抗原。 在某些实施方式中，且不受理论的限制，带T细胞接合分子臂的溶瘤病毒（例如带 T细胞接合物臂的溶瘤痘苗病毒）促进肿瘤中的T细胞浸润并通过病毒表达的T细胞接合 分子诱导未受病毒感染的肿瘤细胞的周边杀伤（bystanderkilling)，导致增强的抗肿瘤 作用。 可选择或调节针对肿瘤抗原的特定scFv以识别相应癌细胞，该癌细胞包含（例如 在其细胞表面上显示的）特定肿瘤抗原。在【具体实施方式】中，该肿瘤抗原是：EphA2、HER2、 ⑶2、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、5Τ4、8Η9、α νβ6整联蛋白、B7-H3、B7-H6、CAIX、CA9、CD19、 CD20、CD22、κ轻链、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD70、CD 123、CD 138、CD 171、 CEA、CSPG4、EGFR、EGFRvIII、EGP2、EGP40、EPCAM、ERBB3、ERBB4、ErbB3/4、FAP、FAR、FBP、胎 儿AchR、叶酸受体a、⑶2、⑶3、HLA-AI MAGE Al、HLA-A2、ILllRa、IL13Ra2、KDR、Lambda、 Lewis-Y、MCSP、间皮素、]?11。1、]\111。16、从^1、疆620配体、附450-1、？狀1^、？5〇厶、？5(：1、？5嫩、 R0R1、SURVIVIN、TAG72、TEM1、TEM8、VEGRR2、癌胚抗原、HMW-MAA、VEGF受体，以及其他在肿 瘤的胞外基质或肿瘤的坏死区中存在的示例性抗原，如生腱蛋白、纤连蛋白的癌胚变体。 在【具体实施方式】中，本专利技术提供了一种溶瘤痘苗病毒，其包含编码双特异性T细 胞接合分子的多核苷酸，所述双特异性T细胞接合分子靶向EphA2并能比未改良的痘苗 病毒更有效地诱导表达EphA2的肿瘤的裂解。在【具体实施方式】中，该病毒载体编码双特异 性T细胞接合分子且还编码表达共刺激分子的一个或多个多核苷酸，所述共刺激分子包括 CD70、CD80、CD83、CD86、CD134L(0X40L)和CD137L(41BBL)。在一些实施方式中，该病毒载体 编码至少一个二聚化结构域或至少一个三聚化结构域。该二聚化或三聚化结构域可以某些 构型位于病毒载体上。在【具体实施方式】中，编码二聚化或三聚化结构域的核酸序列位于编 码激活结构域和抗原识别结构域的核酸之间。具体的示例性本专利技术组合物包含例如SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7 的序列。 在某些实施方式中，该痘苗病毒可以是惠氏（Wyeth)、改良痘苗安卡拉（MVA)、李 斯特（Lister)或西部保留地（WR)毒株。该启动子可以是痘苗病毒启动子、合成的启动子、 至少在至少感染早期期间引导转录的启动子，或至少在感染晚期期间引导转录的启动子。 本专利技术的一种示例性TEA-VV在体外和体内表达功能性双特异性接合分子；显示 的病毒/复制/肿瘤裂解效力与未改良的痘苗病毒相似；与未改良的痘苗病毒相比在人T 细胞存在时更有效地诱导肿瘤杀伤；和/或有效地诱导未感染病毒的细胞的周边杀伤；该 组合物还在体内抑制肿瘤进展。仅作为说明性示例，使用本专利技术的方法杀伤了A549腺癌性 人齿槽基底上皮细胞。 在另一个实施方式中，可以使用本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种溶瘤病毒，其编码的两部分分子包含特异性针对细胞表面分子的单链可变区片段(scFv)和特异性针对肿瘤抗原的scFv。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋晓彤，S·M·戈茨查克，于峰，
申请(专利权)人：贝勒医学院，
类型：发明
国别省市：美国;US
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