澳洲坚果的组织培养快速繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种澳洲坚果的组织培养快速繁殖方法，包括：从澳洲坚果成年树上截取4cm长含有芽的茎段为外植体，将外植体进行消毒处理；将得到的外植体进行诱导培养20-24天，温度为23-25℃，光照强度为2000-2200Lux，每天光照13-15h；将培养出的新长腋芽苗在无菌条件下切成只带一个腋芽的茎段，接入生根培养基在温度为25-27℃培养，依次包括三个阶段：第一阶段，置于2200-2400Lux每天光照14-16h培养12-14天；第二阶段，置于黑暗下培养8-10天；第三阶段，置于2800-3000Lux每天光照18h培养直至生根。本发明专利技术解决了澳洲坚果组织培养生根难、生根率低的问题。

【技术实现步骤摘要】
澳洲坚果的组织培养快速繁殖方法
本专利技术涉及澳洲坚果的组培领域。更具体地说，本专利技术涉及一种澳洲坚果的组织培养快速繁殖方法。
技术介绍
澳洲坚果，又名昆士兰栗、夏威夷果。其种仁富含不饱和脂肪酸、蛋白质、维生素等，营养价值高，风味十分独特，素有“干果之王”之称。澳洲坚果市场前景看好，生态效益、经济效益具佳，是一种含油量高、营养丰富、风味独特的食用坚果，在国际市场上一直处于供不应求状态。澳洲坚果育苗方法有种子育苗、扦插育苗、嫁接育苗和植物组织培养育苗法。由于澳洲坚果种子繁育遗传稳定性差，很少采用单独种子繁殖的方式育苗。扦插育苗繁殖出的根系不发达，植株生长慢。嫁接育苗的成活率低，且培育时间很长。而植物组织培养在许多林木、木本果树和观赏性作物上广泛应用，组织培养可以产生无污染的植物，降低植物疫病传播风险，提高了种质交换的安全性，目前，澳洲坚果的组织培养方法较少，主要是由于澳洲坚果的外植体在生根培养中生根较难，因此，建立适合于澳洲坚果的组织培养方法，对加快澳洲坚果的良种繁育进程具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术还有一个目的是提供一种澳洲坚果的组织培养方法，通过将增殖与生根合并为一步，采用固体培养基以及与液体培养基结合进行分段培养的方式，促进只带一个腋芽的茎段生根，提高生根率，从而提高成活率。本专利技术还有一个目的是提供一种液体培养基，通过本专利技术的培养床将其雾化，通过固体培养基底部的2层亚麻纤维布吸收液体培养基中的水分和营养，从而诱发生根，并提高生根率，从而解决澳洲坚果的外植体生根困难的问题。为了实现根据本专利技术的这些目的和其它优点，提供了一种澳洲坚果的组织培养快速繁殖方法，包括：步骤A、从澳洲坚果成年树上截取4cm长含有芽的茎段为外植体，每一个茎段上含有一个腋芽，将外植体进行消毒处理；步骤B、将步骤A中得到的外植体接入诱导培养基中进行诱导培养20-24天，培养温度为23-25℃，光照强度为2000-2200Lux，每天光照13-15h，所述诱导培养基的配方为：1/2MS，6-苄基腺嘌呤0.2-0.4mg/L，赤霉素0.2-0.3mg/L，维生素B10.45-0.55mg/L，琼脂7g/L和蔗糖25g/L；步骤C、将步骤B中培养出的新长腋芽苗在无菌条件下切成只带一个腋芽的茎段，接入生根培养基在培养温度为25-27℃条件下进行培养，依次包括三个阶段：第一阶段，先置于光照强度为2200-2400Lux，每天光照14-16h培养12-14天；第二阶段，置于黑暗条件下培养8-10天；第三阶段，置于光照强度为2800-3000Lux，每天光照18h培养直至生根；其中，所述生根培养基包括固体培养基和液体培养基，所述固体培养基的配方为：1/4MS，维生素B60.65-0.75mg/L，6-苄基腺嘌呤0.1-2.0mg/L，赤霉素0.5-1.0mg/L，乙烯醇0.01-0.5mg/L，鱼骨粉1.2-1.5g/L，竹醋液22-26mg/L，杜仲提取物0.5-0.7g/L，吲哚丁酸0.8-1.0mg/L，α-萘乙酸3-6mg/L，琼脂4g/L和蔗糖25g/L；所述液体培养基的配方为：α-萘乙酸1.5-1.7mg/L，木醋液30-35mg/L，海藻提取液55-60mg/L，桑葚酵素40-44g/L和粪肥提取液30-36g/L；所述粪肥提取液由海鸟粪、蚯蚓粪、秸秆和香菇菌渣按照质量比为4:6:1-2:1-2混合后，加入其重量的6-10倍的淘米水，发酵后过滤得到的提取液；其中第一阶段和第二阶段采用固体培养基培养，第三阶段采用固体培养基和液体培养基置于培养床中结合培养，所述培养床包括：床体，其为上部开口的长方体结构，所述床体的底部为格栅结构，其上部铺设有2层亚麻纤维布，所述固体培养基置于2层亚麻纤维布上，所述床体的其中三个侧壁的下部沿其外边缘向下延伸出一定长度形成第一扣板，一插板从床体的另一侧壁处可拆卸地插接于所述床体的下部以使所述床体的下部可封闭，当加入固体培养基时，插入插板，待固体培养基凝固后取下插板；盖体，其为长方形板体，所述盖体的边长均大于所述床体上部开口的边长，以使所述盖体可拆卸地盖接于所述床体上，所述盖体上设有多个均匀分布的圆形通孔，对于任意一个圆形通孔，沿其边缘向下延伸出一定长度形成中空的圆柱形限位片，所述圆柱形限位片的下部与所述床体连通，所述圆柱形限位片的侧壁上设有多个均匀分布的通孔，将第二阶段取出的幼苗接入所述圆柱形限位片中的固体培养基中，每一个所述圆柱形限位片中接入一棵幼苗；储液槽，其为上部开口的长方体结构，所述储液槽设置在所述床体的下部，所述储液槽的其中三个侧壁的上部沿其内边缘向上延伸出一定长度形成与所述第一扣板相配合的第二扣板，储液槽的另一个侧壁的上部向上延伸出一定长度以使所述储液槽与所述床体卡接后使所述储液槽与所述床体的底部形成与外部不连通的封闭结构，所述储液槽的侧壁上部开设有可关闭或开启的进液口以便于注入液体培养基，储液槽内部的底部设有至少一个超声波雾化片，所述储液槽的一个侧壁上设有控制开关，其连接所述至少一个超声波雾化片，所述储液槽内装载所述液体培养基，所述控制开关控制所述至少一个超声波雾化片将储液槽内的液体培养基雾化。优选的是，所述的澳洲坚果的组织培养快速繁殖方法，将步骤C中得到的生根幼苗置于温度为25-27℃下炼苗5-7天，去除幼苗根部的培养基，移栽至灭菌处理的沙床基质中，并在其上部铺盖一层聚乙烯膜，并每隔3-5天掀开聚乙烯膜通风4-6h。优选的是，所述的澳洲坚果的组织培养快速繁殖方法，所述步骤A中将外植体进行消毒处理具体是指将外植体先用75％酒精消毒处理30s，再用消毒液浸泡6-8分钟，所述消毒液由质量分数为0.05％的石竹内酯、0.02％的胡桃醌和0.2％的氯化汞组成，最后用无菌水冲洗4-6次。优选的是，所述的澳洲坚果的组织培养快速繁殖方法，所述沙床基质包括两层，上层由粗河沙和经完全腐熟的坚果壳按照质量比为3:1组成，上层厚度为12-15cm，下层为泥炭藓、细河沙和经完全腐熟的口蘑菌渣按照质量比为6:2:3组成，下层厚度为18-24cm。优选的是，所述的澳洲坚果的组织培养快速繁殖方法，所述粪肥提取液的制备方法如下：将海鸟粪、蚯蚓粪、秸秆和香菇菌渣按照质量比为4:6:1-2:1-2混合后得到混合肥，加入混合肥重量的5％的酸奶和10％的米酒醪，再加入混合肥重量的8倍的淘米水，置于无氧条件下于36-38℃发酵20-25天，然后将其先通过60目过滤后，再通过石棉滤菌器过滤，即得所述粪肥提取液。优选的是，所述的澳洲坚果的组织培养快速繁殖方法，所述圆柱形限位片的轴向长度与所述床体的高度比为3-4:5。优选的是，所述的澳洲坚果的组织培养快速繁殖方法，所述第一阶段和第二阶段中所用的固体培养基中6-苄基腺嘌呤1.0-2.0mg/L，乙烯醇0.2-0.5mg/L；所述第三阶段中所用的固体培养基中6-苄基腺嘌呤0.1-0.8mg/L，乙烯醇0.01-0.1mg/L。本专利技术的方法简单、遗传稳定性好，至少包括以下有益效果：1)本专利技术将只带一个腋芽的茎段通过第一阶段的分裂增殖培养，第二阶段在黑暗条件下诱导根原基生成，第三个阶段采用固体培养基与雾化的液体培养基结合培养本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种澳洲坚果的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括：步骤A、从澳洲坚果成年树上截取4cm长含有芽的茎段为外植体，每一个茎段上含有一个腋芽，将外植体进行消毒处理；步骤B、将步骤A中得到的外植体接入诱导培养基中进行诱导培养20‑24天，培养温度为23‑25℃，光照强度为2000‑2200Lux，每天光照13‑15h，所述诱导培养基的配方为：1/2MS，6‑苄基腺嘌呤0.2‑0.4mg/L，赤霉素0.2‑0.3mg/L，维生素B10.45‑0.55mg/L，琼脂7g/L和蔗糖25g/L；步骤C、将步骤B中培养出的新长腋芽苗在无菌条件下切成只带一个腋芽的茎段，接入生根培养基在培养温度为25‑27℃条件下进行培养，依次包括三个阶段：第一阶段，先置于光照强度为2200‑2400Lux，每天光照14‑16h培养12‑14天；第二阶段，置于黑暗条件下培养8‑10天；第三阶段，置于光照强度为2800‑3000Lux，每天光照18h培养直至生根；其中，所述生根培养基包括固体培养基和液体培养基，所述固体培养基的配方为：1/4MS，维生素B60.65‑0.75mg/L，6‑苄基腺嘌呤0.1‑2.0mg/L，赤霉素0.5‑1.0mg/L，乙烯醇0.01‑0.5mg/L，鱼骨粉1.2‑1.5g/L，竹醋液22‑26mg/L，杜仲提取物0.5‑0.7g/L，吲哚丁酸0.8‑1.0mg/L，α‑萘乙酸3‑6mg/L，琼脂4g/L和蔗糖25g/L；所述液体培养基的配方为：α‑萘乙酸1.5‑1.7mg/L，木醋液30‑35mg/L，海藻提取液55‑60mg/L，桑葚酵素40‑44g/L和粪肥提取液30‑36g/L；所述粪肥提取液由海鸟粪、蚯蚓粪、秸秆和香菇菌渣按照质量比为4:6:1‑2:1‑2混合后，加入其重量的6‑10倍的淘米水，发酵后过滤得到的提取液；其中第一阶段和第二阶段采用固体培养基培养，第三阶段采用固体培养基和液体培养基置于培养床中结合培养，所述培养床包括：床体，其为上部开口的长方体结构，所述床体的底部为格栅结构，其上部铺设有2层亚麻纤维布，所述固体培养基置于2层亚麻纤维布上，所述床体的其中三个侧壁的下部沿其外边缘向下延伸出一定长度形成第一扣板，一插板从床体的另一侧壁处可拆卸地插接于所述床体的下部以使所述床体的下部可封闭，当加入固体培养基时，插入插板，待固体培养基凝固后取下插板；盖体，其为长方形板体，所述盖体的边长均大于所述床体上部开口的边长，以使所述盖体可拆卸地盖接于所述床体上，所述盖体上设有多个均匀分布的圆形通孔，对于任意一个圆形通孔，沿其边缘向下延伸出一定长度形成中空的圆柱形限位片，所述圆柱形限位片的下部与所述床体连通，所述圆柱形限位片的侧壁上设有多个均匀分布的通孔，将第二阶段取出的幼苗接入所述圆柱形限位片中的固体培养基中，每一个所述圆柱形限位片中接入一棵幼苗；储液槽，其为上部开口的长方体结构，所述储液槽设置在所述床体的下部，所述储液槽的其中三个侧壁的上部沿其内边缘向上延伸出一定长度形成与所述第一扣板相配合的第二扣板，储液槽的另一个侧壁的上部向上延伸出一定长度以使所述储液槽与所述床体卡接后使所述储液槽与所述床体的底部形成与外部不连通的封闭结构，所述储液槽的侧壁上部开设有可关闭或开启的进液口以便于注入液体培养基，储液槽内部的底部设有至少一个超声波雾化片，所述储液槽的一个侧壁上设有控制开关，其连接所述至少一个超声波雾化片，所述储液槽内装载所述液体培养基，所述控制开关控制所述至少一个超声波雾化片将储液槽内的液体培养基雾化。...

【技术特征摘要】
1.一种澳洲坚果的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括：步骤A、从澳洲坚果成年树上截取4cm长含有芽的茎段为外植体，每一个茎段上含有一个腋芽，将外植体进行消毒处理；步骤B、将步骤A中得到的外植体接入诱导培养基中进行诱导培养20-24天，培养温度为23-25℃，光照强度为2000-2200Lux，每天光照13-15h，所述诱导培养基的配方为：1/2MS，6-苄基腺嘌呤0.2-0.4mg/L，赤霉素0.2-0.3mg/L，维生素B10.45-0.55mg/L，琼脂7g/L和蔗糖25g/L；步骤C、将步骤B中培养出的新长腋芽苗在无菌条件下切成只带一个腋芽的茎段，接入生根培养基在培养温度为25-27℃条件下进行培养，依次包括三个阶段：第一阶段，先置于光照强度为2200-2400Lux，每天光照14-16h培养12-14天；第二阶段，置于黑暗条件下培养8-10天；第三阶段，置于光照强度为2800-3000Lux，每天光照18h培养直至生根；其中，所述生根培养基包括固体培养基和液体培养基，所述固体培养基的配方为：1/4MS，维生素B60.65-0.75mg/L，6-苄基腺嘌呤0.1-2.0mg/L，赤霉素0.5-1.0mg/L，乙烯醇0.01-0.5mg/L，鱼骨粉1.2-1.5g/L，竹醋液22-26mg/L，杜仲提取物0.5-0.7g/L，吲哚丁酸0.8-1.0mg/L，α-萘乙酸3-6mg/L，琼脂4g/L和蔗糖25g/L；所述液体培养基的配方为：α-萘乙酸1.5-1.7mg/L，木醋液30-35mg/L，海藻提取液55-60mg/L，桑葚酵素40-44g/L和粪肥提取液30-36g/L；所述粪肥提取液由海鸟粪、蚯蚓粪、秸秆和香菇菌渣按照质量比为4:6:1-2:1-2混合后，加入其重量的8倍的淘米水，发酵后过滤得到的提取液；其中第一阶段和第二阶段采用固体培养基培养，第三阶段采用固体培养基和液体培养基置于培养床中结合培养，所述培养床包括：床体，其为上部开口的长方体结构，所述床体的底部为格栅结构，其上部铺设有2层亚麻纤维布，所述固体培养基置于2层亚麻纤维布上，所述床体的其中三个侧壁的下部沿其外边缘向下延伸出一定长度形成第一扣板，一插板从床体的另一侧壁处可拆卸地插接于所述床体的下部以使所述床体的下部可封闭，当加入固体培养基时，插入插板，待固体培养基凝固后取下插板；盖体，其为长方形板体，所述盖体的边长均大于所述床体上部开口的边长，以使所述盖体可拆卸地盖接于所述床体上，所述盖体上设有多个均匀分布的圆形通孔，对于任意一个圆形通孔，沿其边缘向下延伸出一定长度形成中空的圆柱形限位片，所述圆柱形限位片的下部与...

【专利技术属性】
技术研发人员：凌华彪，
申请(专利权)人：广西合山市润鸿农业技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广西;45