阿普斯特中3-乙酰氨基邻苯二甲酸的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种阿普斯特中3-乙酰氨基邻苯二甲酸的检测方法。该方法采用的是酰胺型的亲水作用色谱柱，有效将阿普斯特中3-乙酰氨基邻苯二甲酸分离检测出来，检测结果准确、可靠，并且具有线性关系优异、精密度高、稳定性好、重复性好、回收率好、操作简便等诸多优点，适合于推广应用。

【技术实现步骤摘要】
阿普斯特中3-乙酰氨基邻苯二甲酸的检测方法
本专利技术涉及阿普斯特中杂质的检测方法，具体涉及3-乙酰氨基邻苯二甲酸的检测方法。
技术介绍
阿普斯特(apremilast，(S)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮，分子式：C22H24N2O7S，分子量：460.5)是由美国Celgene生物技术公司开发，2014年3月21日经美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于成人活跃型银屑病性关节炎(PsA)的治疗，商品名为Otezla。在阿普斯特产品中，往往会存在有多种杂质，例如其R构型对映异构体、3-氨基邻苯二甲酸、3-乙酰氨基邻苯二甲酸以及其他各种中间体和降解产物。由于杂质的存在会严重影响药物的质量控制和用药安全，因此需要对药物中各种杂质的含量进行检测和监控。因此，为解决上述问题，已有多篇文献报道了(例如中国专利CN104458961A、CN104792913A、CN105136933A、CN104820028A)阿普斯特中R构型对映异构体杂质的检测方法。然而，对于阿普斯特中的3-乙酰氨基邻苯二甲酸，目前尚没有相关检测方法的报道。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种阿普斯特中3-乙酰氨基邻苯二甲酸的检测方法，其特征在于：它包括以下步骤：a、制备供试品溶液：取待测阿普斯特样品，流动相溶解，过滤或不过滤，制备得到供试品溶液；b、制备3-乙酰氨基邻苯二甲酸的对照品溶液：取3-乙酰氨基邻苯二甲酸对照品，流动相溶解，制备得到3-乙酰氨基邻苯二甲酸的对照品溶液；c、分别将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪检测，色谱条件如下：色谱柱：亲水作用色谱柱；流动相：乙腈-0.02mol/L磷酸二氢盐溶液或甲醇-0.02mol/L磷酸二氢盐溶液；所述磷酸二氢盐溶液选自磷酸二氢钠溶液或磷酸二氢钾溶液；检测波长：230±10nm，优选的检测波长为230±2nm；d、根据检测结果计算得到阿普斯特样品中3-乙酰氨基邻苯二甲酸的含量。进一步地，步骤c中，所述亲水作用色谱柱是以酰胺键合的硅胶为填充剂的色谱柱。更进一步地，所述酰胺键合的硅胶是丙烯酰胺键合的硅胶。更进一步地，步骤c中，所述色谱柱的规格为：内径4.6mm，长度250mm，填料粒径5μm。更进一步地，步骤c中，所述色谱柱的型号为VenusilHILIC100A°。进一步地，步骤c中，所述甲醇或乙腈与磷酸二氢盐溶液的体积比为80％：20％～90％：10％。更进一步地，步骤c中，所述流动相为下述体积比的混合溶液：乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液＝80：20、乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液＝85：15、乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液＝90：10、甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液＝80：20、甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液＝85：15、甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液＝90：10、乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液＝80：20、乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液＝85：15或乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液＝90：10。进一步地，步骤c中，所述色谱条件的柱温为30℃～40℃，流速为0.8mL/min～1.2mL/min。进一步地，步骤c中，所述色谱条件的柱温为30℃～35℃，流速为.8mL/min～1.0mL/min。进一步地，其特征在于：步骤c中，所述色谱条件的进样量为20μL。亲水作用色谱柱指的是适用于亲水作用色谱(hydrophilicinteractionliquidchromatography，HILIC)的色谱柱。HILIC是采用极性固定相和水-水溶性有机溶剂D一种新型色谱分离手段，HILIC可以克服正相色谱和反相色谱在极性化合物分离过程中的不足，往往能够提供与反相色谱截然不同的分离选择性。专利技术人也在色谱柱的筛选中也发现，反相色谱并不能准确检测出阿普斯特中的3-乙酰氨基邻苯二甲酸。在硅胶基质的亲水作用色谱固定相中，根据其材料，主要分为未衍生化硅胶型、氨基型、氰基型、二醇基型、酰胺型、聚(琥珀酰亚胺)型、糖型和两性离子型键合相型。在本专利技术具体的实施例中，采用的是酰胺型的色谱柱。通常情况下，相比氨基柱，酰胺柱具有更好的稳定性。经试验证明，本专利技术阿普斯特中3-乙酰氨基邻苯二甲酸的检测方法，采用的是酰胺型的亲水作用色谱柱，有效将阿普斯特中3-乙酰氨基邻苯二甲酸分离检测出来，检测结果准确、可靠，并且具有线性关系优异、精密度高、稳定性好、重复性好、回收率好、操作简便等诸多优点，适合于推广应用。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1为实施例1本专利技术方法对系统适用性试验的检测结果；图2为实施例1对比试验方法对混合溶液的检测结果；图3为实施例13的标准曲线图；图4-6为实施例13专属性试验的检测结果：图4为(a)供试品溶液；图5为(b)对照品溶液；图6为(c)溶剂空白溶液。具体实施方式本专利技术具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。高效液相色谱仪(型号：LC-20AT二元泵，生产厂家：日本岛津公司)。电子天平(型号：AUW220D，生产厂家：日本岛津公司)。阿普斯特(批号：Y150102，来源：成都百裕金阁莱药业有限公司)。阿普斯特对照品(批号：Y150101，来源：成都百裕金阁莱药业有限公司)。3-乙酰氨基邻苯二甲酸对照品(批号：AP-I，来源：成都百裕金阁莱药业有限公司)。实施例11、检测波长的确定精密称取阿普斯特适量，用流动相(乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾＝85：15)配制成浓度为20μg/mL的溶液，作为供试品溶液。精密称取对照品(3-乙酰氨基邻苯二甲酸)适量，用流动相(乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾＝85：15)配制成浓度为20μg/mL的溶液，作为对照品溶液。取上述的供试品溶液、对照品溶液，在200nm～400nm波长范围内进行扫描，试验结果见表1。表1、本专利技术的紫外扫描结果项目峰波长(nm)峰值谷波长(nm)谷值供试品溶液2300.6172150.226对照品溶液2290.8342760.006试验结果表明，检测波长在220nm～230nm范围内，均适合本专利技术的高效液相色谱检测方法；优选的，检测波长为230±2nm。2、系统适用性试验制备供试品溶液：称取阿普斯特25mg，置于50mL量瓶中，加流动相(乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾＝85：15)适量，振摇10分钟，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。制备对照品溶液：称取3-乙酰氨基邻苯二甲酸对照品5mg，置于100mL量瓶中，精密量取1mL，置于100mL量瓶中，加流动相(乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾＝85：15)稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。采用亲水作用色谱进行检测：色谱柱的填充剂：用丙烯酰胺键合的硅胶为填充剂；色谱柱的型号为VenusilHI本文档来自技高网...

【技术保护点】
阿普斯特中3‑乙酰氨基邻苯二甲酸的检测方法，其特征在于：它包括以下步骤：a、制备供试品溶液：取待测阿普斯特样品，流动相溶解，过滤或不过滤，制备得到供试品溶液；b、制备3‑乙酰氨基邻苯二甲酸的对照品溶液：取3‑乙酰氨基邻苯二甲酸对照品，流动相溶解，制备得到3‑乙酰氨基邻苯二甲酸的对照品溶液；c、分别将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪检测，色谱条件如下：色谱柱：亲水作用色谱柱；流动相：乙腈‑0.02mol/L磷酸二氢盐溶液或甲醇‑0.02mol/L磷酸二氢盐溶液；所述磷酸二氢盐溶液选自磷酸二氢钠溶液或磷酸二氢钾溶液；检测波长：230±10nm，优选的检测波长为230±2nm；d、根据检测结果计算得到阿普斯特样品中3‑乙酰氨基邻苯二甲酸的含量。

【技术特征摘要】
1.阿普斯特中3-乙酰氨基邻苯二甲酸的检测方法，其特征在于：它包括以下步骤：a、制备供试品溶液：取待测阿普斯特样品，流动相溶解，过滤或不过滤，制备得到供试品溶液；b、制备3-乙酰氨基邻苯二甲酸的对照品溶液：取3-乙酰氨基邻苯二甲酸对照品，流动相溶解，制备得到3-乙酰氨基邻苯二甲酸的对照品溶液；c、分别将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪检测，色谱条件如下：色谱柱：用丙烯酰胺键合的硅胶作为填充剂的亲水作用色谱柱；流动相：乙腈-0.02mol/L磷酸二氢盐溶液或甲醇-0.02mol/L磷酸二氢盐溶液；所述磷酸二氢盐溶液选自磷酸二氢钠溶液或磷酸二氢钾溶液；所述甲醇或乙腈与磷酸二氢盐溶液的体积比为80：20～90：10；检测波长：230±10nm；d、根据检测结果计算得到阿普斯特样品中3-乙酰氨基邻苯二甲酸的含量。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述检测波长为230±2nm。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤c中，所述色谱柱的规格为：内径4.6mm，长度250mm，填料粒径5μm。4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：步骤c中，所述色谱柱...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙毅，宋务雄，
申请(专利权)人：成都百裕金阁莱药业有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51