一种能够抑制流感病毒聚合酶亚基PA与PB1相互作用的化合物制造技术

本发明专利技术提供了一种化合物，所述化合物为式(Ⅰ)、式(Ⅱ)或式(Ⅲ)所示的化合物，所述化合物均能够抑制流感病毒聚合酶亚基PA与PB1相互作用，具有抗流感病毒的功能。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种化合物，具体涉及一种能够抑制流感病毒聚合酶亚基PA与PB1相互作用的化合物。
技术介绍
流感通过常规的季节性流行和在全球范围的大流行在人群中造成相当的发病率和一定的死亡率。由于流感病毒可以通过基因突变抑或在不同亚型间基因重组来逃避疫苗的作用以及对抗药物的抗病毒效果。因此，目前亟需新的药物靶点和创新性的治疗策略来推进抗流感病毒的疗法。相关实施例揭示，高度保守的流感病毒蛋白与蛋白间相互作用是抗流感病毒药物开发的潜在目标。流感病毒RNA聚合酶(RdRp)包含了PB1、PB2和PA三个亚基，并负责病毒基因组的转录和复制。在进入宿主的细胞核发挥功能之前,这三个亚基彼此间通过非共价键形成三元复合体。其中主要的蛋白-蛋白相互作用是通过PB1亚基的氨基端结构域(PB1N)和PA亚基的羧基端结构域(PAC)结合以及PB1亚基的羧基端结构域(PB1C)和PB2亚基的氨基端结构域(PB2N)结合构成。PAC与PB1N的共结晶结构已被成功解析。初略地说，PAC可以形成一个类似于“龙头”的结构，而“龙头”的上下颚之间恰好形成了一个疏水性的凹槽。于是，PB1亚基通过其氨基端的首25个氨基酸多肽，插入“上下颚”得以和龙头结合在一起。因此，PAC“龙头”的“上下颚”成为了潜在的药物靶点。通常来说，蛋白质之间的相互作用需要较大的表面积和较多的氨基酸位点接触以实现紧密的连接。不同的是，在PAC与PB1N复合体的相互作用中，只需要少数的氨基酸位点参与其中以贡献大部分结合所需的自由能，这使得小分子化合物抑制剂的成药成为可能。另外，相关实施例已经表明替换PAC或者PB1N结构域中参与蛋白相互作用的关键氨基酸位点将显著抑制整个RNA聚合酶的活性。所以，由PAC-PB1N结构域筛选而来的抗病毒药物所诱导产生耐药毒株的可能性会大大降低。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供了一种化合物，所述化合物能够抑制流感病毒聚合酶亚基PA与PB1相互作用，本专利技术还提供了所述化合物的用途。为实现上述目的，所采取的技术方案：一种能够抑制流感病毒聚合酶亚基PA与PB1相互作用的化合物，所述化合物为式(Ⅰ)、式(Ⅱ)或式(Ⅲ)所示的化合物，所述式(Ⅰ)所示的化合物的结构式如下：所述式(Ⅱ)所示的化合物的结构式如下：所述式(Ⅲ)所示的化合物的结构式如下：将上述所述式(Ⅰ)所示的化合物命名为PAC-3，将上述所述式(Ⅱ)所示的化合物命名为PAC-3-A-1，将上述所述式(Ⅲ)所示的化合物命名为PAC-3-A-2，本专利技术所述式(Ⅰ)、式(Ⅱ)和式(Ⅲ)所示的化合物均对甲型流感病毒包括H1N1、H3N2、H5N1、H7N7、H7N9和H9N2等亚型提供广谱抗病毒作用。BALB/c小鼠在感染致命剂量的H1N1流感病毒后接受PAC-3-A-1鼻腔给药，能够显著提高存活率并减少肺组织中的病毒量。本专利技术提供了上述所述的化合物在制备抗流感病毒的药物中的用途。优选地，所述流感病毒为甲型流感病毒。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了一种化合物，所述化合物为式(Ⅰ)、式(Ⅱ)或式(Ⅲ)所示的化合物，所述化合物均能够抑制流感病毒聚合酶亚基PA与PB1相互作用，具有抗流感病毒的功能。附图说明图1为本专利技术实施例1中本专利技术所述化合物PAC-3和PAC-3-A-1的体外抗病毒效果图；图2为本专利技术实施例1中本专利技术所述化合物PAC-3-A-1的体内抗病毒效果图；图3为本专利技术实施例1中本专利技术所述化合物PAC-3-A-1的抗病毒机制相关图。具体实施方式为更好的说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。实施例11、材料和方法1.1细胞、病毒犬肾细胞(MDCK)和人胚肾细胞(HEK-293T)在包含有10％热灭活胎牛血清(FBS)，50单位/毫升青霉素和50微克/毫升链霉素(P/S)的DMEM培养基中培养。MDCK在病毒感染后，在含有1微克/毫升的TPCK胰蛋白酶但不含有胎牛血清的MEM中培养。总共8株/6种亚型的流感病毒株，即A/HK/415742/09(H1N1)、A/HongKong/1/1968(H3N2)、A/Shenzhen/406H/2006(H5N1)、A/HongKong/156/97(H5N1)、A/Vietnam/1194/2004(H5N1)、A/Netherlands/219/2003(H7N7)、A/Anhui/1/2013(H7N9)和A/HK/1073/1999(H9N2)分别在MDCK细胞中增殖并在本研究中使用。此外，还有一株在BALB/c小鼠体内多次传代获得的小鼠致死性流感病毒株A/HK/415742Md/09(H1N1)，是在鸡胚中增殖并应用于本次研究的动物实验的。病毒的滴度通过空斑试验(plaqueassay)测定后，分装并保存在-80摄氏度。所有与活病毒相关试验是在生物安全2级或3级设施中进行的。该实验所涉及的多肽购自合肥赛曼诺生物科技有限公司(中国安徽)。1.2选择性指数选择性指数(selectivityindex)是通过50％的细胞毒性浓度(CC50)除以50％的病毒抑制浓度(IC50)计算而来的，该指标数值越高则指示该药物有越好的临床应用前景。我们通过MTT法测定了本专利技术所述化合物的CC50，再通过空斑减数试验确定IC50值，最终得到了本专利技术所述化合物的选择性指数。1.3多周期病毒生长试验MDCK细胞在接种了感染复数(MOI)为0.002的流感H1N1病毒后，在含有20微摩的本专利技术所述化合物以及1微克/毫升TPCK胰蛋白酶的MEM培养基中培养。感染后0、6、21、25、32、47和54小时后，收集病毒上清液并使用空斑法测定病毒滴度。1.4交叉保护力试验本专利技术所述化合物针对多个亚型的流感病毒，包括甲型H1N1、H3N2、H5N1、H7N7、H7N9和H9N2的抗病毒效果也进行了测试。简单地说，MDCK细胞在接种0.002个MOI的流感病毒后1小时，用PBS洗净，并将培养基置换成新鲜的含有不同浓度(20、5、1.25、0.31微摩)本专利技术所述化合物的MEM培养基。病毒接种24小时候后，收集细胞上清液，并采用反转录-实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术测定病毒的滴度。1.5本专利技术所述化合物体内抗病毒疗效评估本实验采用6-8周龄本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种能够抑制流感病毒聚合酶亚基PA与PB1相互作用的化合物，其特征在于，所述化合物为式(Ⅰ)、式(Ⅱ)或式(Ⅲ)所示的化合物，所述式(Ⅰ)所示的化合物的结构式如下：所述式(Ⅱ)所示的化合物的结构式如下：所述式(Ⅲ)所示的化合物的结构式如下：

【技术特征摘要】
1.一种能够抑制流感病毒聚合酶亚基PA与PB1相互作用的化合物，其特
征在于，所述化合物为式(Ⅰ)、式(Ⅱ)或式(Ⅲ)所示的化合物，所述式(Ⅰ)
所示的化合物的结构式如下：
所述式(Ⅱ)所示的化合物的...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑伯建，袁硕峰，高一村，周婕，吴子柏，
申请(专利权)人：香港神农有限公司，
类型：发明
国别省市：中国香港;81